生物制品及其质量管理

1、 生物制生物制 1主要内容主要内容 一、生物制品定义一、生物制品定义二、生物制品种类二、生物制品种类三、生物制品的基本属性和特点三、生物制品的基本属性和特点四、生物制品的管理四、生物制品的管理五、五、生物制品生物制品GMP现场检查要点现场检查要点2一、生物制品定义一、生物制品定义 生物制品生物制品( (Biological Products)是应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液体等生物材料制备，用于疾病预防、治疗和诊断的药品。3二、生物制品分类二、生物制品分类 按生物制品的组成和性质可分为按生物制品的组成和性质可分为:

2、:疫苗（疫苗（VaccinesVaccines）抗毒素及免疫血清抗毒素及免疫血清(Antitoxin and Antisera)(Antitoxin and Antisera)血液制品（血液制品（Blood ProductsBlood Products）细胞因子和重组细胞因子和重组DNADNA产品（产品（Cytokines and Cytokines and Recombinant DNA ProductsRecombinant DNA Products）诊断制品诊断制品(Diagnostic Reagents)(Diagnostic Reagents)其他制品其他制品4细菌类疫苗细菌类疫苗

3、由细菌、螺旋体或其衍生物制备而成，包括：由细菌、螺旋体或其衍生物制备而成，包括： 减毒活疫苗：卡介苗、人用炭疽和人用鼠疫减毒活疫苗：卡介苗、人用炭疽和人用鼠疫疫苗等疫苗等 灭活疫苗：霍乱菌体疫苗、钩端螺旋体疫苗灭活疫苗：霍乱菌体疫苗、钩端螺旋体疫苗等等 亚单位疫苗：脑膜炎球菌多糖疫苗、伤寒亚单位疫苗：脑膜炎球菌多糖疫苗、伤寒ViVi多糖疫苗等多糖疫苗等 重组重组DNADNA疫苗：重组疟疾疫苗、重组幽门螺疫苗：重组疟疾疫苗、重组幽门螺杆菌疫苗等杆菌疫苗等5病毒类疫苗病毒类疫苗 由病毒、衣原体、立克次体或其衍生物制备由病毒、衣原体、立克次体或其衍生物制备而成，包括：而成，包括：减毒活疫苗：乙型脑炎

4、减毒疫苗、麻疹疫苗、减毒活疫苗：乙型脑炎减毒疫苗、麻疹疫苗、风疹疫苗、风疹疫苗、OPVOPV等等灭活疫苗：乙型脑炎灭活疫苗、出血热疫苗、灭活疫苗：乙型脑炎灭活疫苗、出血热疫苗、狂犬疫苗等狂犬疫苗等亚单位疫苗：重组乙肝疫苗等亚单位疫苗：重组乙肝疫苗等重组重组DNADNA疫苗：重组乙肝疫苗等疫苗：重组乙肝疫苗等6联合疫苗联合疫苗 由两种或两种以上疫苗抗原原液配制而成由两种或两种以上疫苗抗原原液配制而成的具有多种免疫原性的疫苗。的具有多种免疫原性的疫苗。 例如：例如： 吸附百白破联合疫苗吸附百白破联合疫苗 麻风腮三联疫苗麻风腮三联疫苗 7抗毒素及免疫血清抗毒素及免疫血清 由特定抗原免疫的动物血清而制

5、备由特定抗原免疫的动物血清而制备 主要产品：主要产品： 白喉抗毒素白喉抗毒素 破伤风抗毒素破伤风抗毒素 抗狂犬病血清等抗狂犬病血清等8血液制品血液制品 由健康人的血浆或特异免疫人血浆分由健康人的血浆或特异免疫人血浆分 离、提纯或由重组技术制成的血浆蛋离、提纯或由重组技术制成的血浆蛋 白组分或血细胞组分制品白组分或血细胞组分制品 。 主要产品：主要产品：人血白蛋白人血白蛋白 人免疫球蛋白人免疫球蛋白 人凝血因子等人凝血因子等 9细胞因子和重组细胞因子和重组DNADNA产品产品 由健康人血细胞增值、分离、提纯或由健康人血细胞增值、分离、提纯或 由重组技术制成的多肽类或蛋白类制由重组技术制成的多肽类

6、或蛋白类制 剂。剂。 主要产品：干扰素主要产品：干扰素(IFN)(IFN) 白细胞介素白细胞介素(IL)(IL) 集落刺激因子集落刺激因子(CSF) (CSF) 红细胞生成素红细胞生成素 (EPO) (EPO)等等 10诊断制品诊断制品 由特定抗原、抗体或有关生由特定抗原、抗体或有关生物物质制成的用于体外诊断疾病的试剂或试物物质制成的用于体外诊断疾病的试剂或试剂盒，如伤寒、副伤寒等细菌的诊断菌液，剂盒，如伤寒、副伤寒等细菌的诊断菌液，沙门氏菌属诊断血清，沙门氏菌属诊断血清，HBsAgHBsAg诊断试剂盒等。诊断试剂盒等。 由抗原制成的用于体内诊断由抗原制成的用于体内诊断疾病的试剂，如卡介苗纯蛋

7、白衍生物（疾病的试剂，如卡介苗纯蛋白衍生物（BCG-BCG-PPDPPD）、锡克试剂毒素、标记的单克隆抗体等。）、锡克试剂毒素、标记的单克隆抗体等。 11其他制品其他制品 由有关生物材料或特定方法制成的，由有关生物材料或特定方法制成的，上述上述5 5类产品以外的生物制品，如变态类产品以外的生物制品，如变态反应原、微生态制剂、重组反应原、微生态制剂、重组DNADNA产品、产品、基因治疗产品、单克隆抗体制剂、某基因治疗产品、单克隆抗体制剂、某些细胞治疗制剂等。些细胞治疗制剂等。12生物制品按用途分类生物制品按用途分类 疫苗疫苗、类毒素、类毒素、被动免疫制剂被动免疫制剂 免疫学诊断试剂、基因诊断试剂

8、、免疫学诊断试剂、基因诊断试剂、 生化试剂生化试剂 血液制剂、细胞因子制剂、酶和激素、血液制剂、细胞因子制剂、酶和激素、 特异性抗体特异性抗体、非特异性免疫治疗制剂、非特异性免疫治疗制剂、 基因及细胞治疗制品等基因及细胞治疗制品等 13预防类生物制品预防类生物制品减毒活疫苗与灭活疫苗的比较减毒活疫苗与灭活疫苗的比较减毒活疫苗减毒活疫苗灭活疫苗灭活疫苗1.注射一次即可有效注射一次即可有效2.接种后似自然感染，接种后似自然感染，形成完整免疫形成完整免疫3.在一定范围内疫苗病在一定范围内疫苗病毒可排斥野毒毒可排斥野毒1.可多种抗原混合制成多价疫可多种抗原混合制成多价疫苗苗2.抗原性稳定抗原性稳定3.

9、经过灭活处理不会污染其它经过灭活处理不会污染其它病原病原4.可提纯抗原，加入佐剂增加可提纯抗原，加入佐剂增加免疫效果免疫效果1.抗原不稳定，灭活即抗原不稳定，灭活即失效失效2.易污染其它病原易污染其它病原1.一般需注射一般需注射23次才明显有效次才明显有效2.一般仅产生体液免疫一般仅产生体液免疫3.抗原要求量大，制造工艺较抗原要求量大，制造工艺较繁琐繁琐14三、生物制品的基本属性和特点三、生物制品的基本属性和特点（一）（一） 其起始材料均为生物活性物质；生物制品生产加工全过程是生物学过程，是无菌操作过程；有些生物制品的生产过程是有毒或有菌的过程;生物制品多为蛋白质或多肽类物质，分子量较大，并具

10、有复杂的分子结构, 较不稳定，易失活，易被微生物污染，易被酶解破坏。15三、生物制品的基本属性和特点三、生物制品的基本属性和特点（二）（二）其质量控制和质量检定是采用生物学分析方法，其效价或生物活性检定有其变异性；生物制品原材料、中间品、成品、运输、贮存、甚至使用保持在“冷链”系统中；特别是预防制品使用对象不是病人，而是健康人群；生物制品的质量控制实行生产全过程监控; 生产现场检查时要充分考虑这些特点16四、生物制品的管理生物制品国家管理生物制品国家管理6 6项基本职能项基本职能 1完整的疫苗和生物制品审批程序和审批标准的法规文件； 2审批结论要以实验和临床试验数据为依据； 3国家质控当局对疫

11、苗和生物制品出厂销售实行国家批签发制度； 4要有对疫苗和生物制品进行质量评价的法定的实验检定机构和实验实施； 5对生物制品生产企业实施GMP定期检查； 6对生物制品有效性和不良反应进行上市后检测。17生物制品实行国家批签发生物制品实行国家批签发 药品管理法实施办法中规定，国家对所规定的生物制品实行国家批签发制度。 国家批签发国家药品监督管理部门授权国家药品检定机构，对所规定的生物制品，在出厂前或进口时，按批进行审查和签发，凡审查或检定不合格的不允许销售或者进口。18生物制品国家批签发分为三种类型生物制品国家批签发分为三种类型一、仅对某种制品每批的批记录摘要进行审查，符合要求发给批签发证；二、审

12、查批记录摘要 对部分批次制品进行抽检检定、审查和检定符合要求发给批签发证；三、审查批记录摘要 批批检定，审查和批批检定符合要求发给批签发证。19菌种筛选#种子批的#建立及检定菌种接种#原液合并半成品*配置杀 菌原液收获#扩大培养原液保存分 装*包 装检 定图图- 细菌疫苗工艺流程及环境区域划分示意图细菌疫苗工艺流程及环境区域划分示意图10 000 级100 000 级20毒种筛选#种子批的#建立及检定毒种接种#培养细胞原液合并半成品*配置病毒灭活病毒的收获过滤 #扩大细胞培养病毒原液保存分 装*包 装检 定图图- 病毒疫苗工艺流程及环境区域划分示意图病毒疫苗工艺流程及环境区域划分示意图原代细胞

13、的制备或传代细胞复苏减毒活疫苗10 000 级100 000 级21细菌和病毒类疫苗质控要点细菌和病毒类疫苗质控要点 1所有原辅材料符合中国药典或中国生物制品主要原辅料质量标准； 2采用强毒菌株（鼠疫、霍乱、炭疽等）、芽胞菌和强毒病毒株，应有专用生产操作间，专用生产设备及隔离实施，操作人员应有安全防护设施； 3所用生产的菌株或病毒株，要建立原始种子批、主代种子批、生产种子批三级种子批系统；病毒疫苗生产用细胞也要建立上述三级细胞库系统； 4菌苗及疫苗原液、中间品合并、分离、纯化等每道加工工序后均要做无菌试验和鉴别试验；22细菌和病毒类疫苗质控要点细菌和病毒类疫苗质控要点 5细菌类及病毒类的灭活疫

14、苗，加入灭活剂后，必须要做活菌或活毒试验，确保彻底灭活； 6原材料、半成品及成品，应按现行中国生物制品规程相关标准进行检定； 7对制品的安全、效价或免疫力试验等项目检定所用实验动物应符合清洁级； 8从起始材料直至使用，全过程，必须无菌操作，制品28保存； 9生物制品生产用水均为注射用水。23血浆合并病毒灭活精 洗灭菌除热原低温乙醇法超滤浓缩入 库外包材血浆内包材图图- 血液制品工艺流程及环境区域划分示意图血液制品工艺流程及环境区域划分示意图除菌过滤*分 装*包 装粗 洗10 000 级100 000 级24血液制品质量控制要点血液制品质量控制要点 1生产用具，经过严格清洗、去热原处理、灭菌处理

15、； 2原料血浆要经过乙肝、丙肝、艾滋、梅毒、ABO定型诊断试剂检测合格，-20以下保存； 3生产工艺采用低温乙醇法分部提取各组份；工艺中应有去除/灭活病毒工艺步骤； 4原液、半成品、成品符合现行中国生物制品规程相应标准； 5所用血源检测和成品检测的乙肝、丙肝、艾滋、梅毒等检测的试剂均为国家批批检定试剂。25细胞复苏扩大培养大罐培养粗纯扩大培养发酵粗纯接种灭菌除热原精洗粗洗内包材菌种细胞种子原液除菌过滤除菌过滤配制及除菌过滤分装包装入库外包装图图- 重组产品工艺流程及环境区域划分示意图重组产品工艺流程及环境区域划分示意图原核表达真核表达10 000 级100 000 级26重组重组DNADNA产

16、品质量控制要点产品质量控制要点 1生产用工程菌株或工程细胞株要建立原始种子批、主代种子批、生产种子批系统，定期进行质粒稳定性检查； 2发酵用培养基应不含抗生素，生产用细胞培养液应不含血清和抗生素； 3发酵培养过程中应根据工艺要求控制其培养温度、pH、溶氧、辅料及培养时间； 4根据其工艺要求，通过初步纯化和高度纯化达到规定质量要求； 5重组产品的原液，应做：蛋白质含量、比活性、纯度、效价、SDS-PAGE法、高效液相色谱法、分子量、外源性DNA残留含量、宿主蛋白残留含量、等电点、紫外光谱肽图（至少每年1次），N末端氨基酸序列（至少每年测一次）；27重组重组DNADNA产品质量控制要点产品质量控制

17、要点 6半成品及成品应按现行中国生物制品规程相关标准进行检定； 7工程菌株应进行菌落形态、革兰氏染色、抗生素的抗性、电镜检查、生化反应、表达量、质粒酶切图谱等检查； 8工程细胞应进行外源因子（细菌、真菌、支原体、病毒）检查、致病性实验、细胞鉴别试验、表达量测定等； 9重组DNA产品生产，必须按其生产所用工程菌株或工程细胞株、将原核细胞系与真核细胞系彻底分离分别进行生产。28菌种筛选#组装图图-5 酶联免疫诊断试剂工艺流程及环境区域划分示意图酶联免疫诊断试剂工艺流程及环境区域划分示意图抗原包被微孔板酶标记抗体其它组分阳性对照*100 000 级隔离区29酶联免疫诊断试剂质控要点酶联免疫诊断试剂质

18、控要点 1所用抗原或抗体的纯度、带型、效价及稳定性等符合现行国家标准，来源要固定； 2辣根过氧化物酶R2不应低于3.0； 3微孔板CV（%）不大于10%； 4选择最佳浓度进行抗原或抗体包被，选择最佳浓度进行酶标记 5酶标记后抗体加入有关保护剂，低温保存； 6应有阳性血清处理、分装的隔离操作间。30菌种筛选#组装图图- PCR诊断试剂工艺流程及环境区域划分示意图诊断试剂工艺流程及环境区域划分示意图PCR组份PCR组份PCR组份阳性对照*100 000 级隔离区31PCRPCR诊断试剂质控要点诊断试剂质控要点 1应有阳性血清处理、分装的隔离操作间； 2PCR试剂的生产区与检定区严格分开； 3PCR

19、引物设计要合理，引物合成要有固定场所及专用设备；纯度达到现行国家标准； 4DNA聚合酶活性及稳定性达现行国家标准并有固定来源； 5PCR检测方法要可靠，操作人员经专门培训。32五、生物制品五、生物制品GMPGMP检查要点检查要点保护环境和操作者防止交叉污染，严格分区，独立空调局部负压尽可能一个产品、一个车间彻底消毒和清场严格动物使用及动物管理环境温度331强毒与弱毒“强毒”系指生物制品生产及检定用细菌株及病毒株，其致病力强，传染性强，感染的机率高，感染后症状较重，可危及生命健康，甚至引起传染病爆发流行的细菌菌株及病毒株。“弱毒”系指生物制品生产及检定用细菌株及病毒株，经过天然或人工改造方法，去

20、除或封闭其毒力因子，使其致病力减弱，一般不引起感染或发病的细菌菌株及病毒株。强毒株与弱毒株，不允许混放在一起，其生产及检定操作场所须严格分开，并有专用设备。生物制品生物制品GMPGMP认证检查要点认证检查要点342死毒与活毒“活毒”是制备灭活疫苗的第一阶段或减毒活疫苗生产时，将生产用细菌或病毒株进行大规模培养制备，其生产过程和生产场所、生产设备、器材含有大量活的细菌或活的病毒生物体，称之为“活毒”。“死毒”是制备灭活疫苗时，第一阶段生产出大量活细菌或或病毒后，到第二阶段，对活生物体加入一定量甲醛或适宜灭活剂，将全部细菌或病毒杀死，称之为“死毒”。“活毒”与“死毒”的生产场所、生产设备及器材，须

21、严格分开。353“脱毒前”与“脱毒后”“脱毒前”系指破伤风梭状菌、白喉杆菌繁殖培养时，生产大量破伤风毒素及白喉毒素，对人体有致病性，这一阶段为“脱毒前”。“脱毒后”系指毒素中加入一定量甲醛或适宜脱毒剂，将毒素去掉毒性，不再具有致病性，仍保留其抗原性和免疫原性，称之为“脱毒后”。“脱毒前”与“脱毒后”的生产场所、生产设备及器材须严格分开。364血液制品、抗血清、人和动物组织制备的制品，其生产所用的原材料，为人血浆、动物免疫血清、人和动物器官、组织及组织液等，均含有大量的人和动物的异种蛋白质或细胞活性物质，具有较强的致敏原物质，不经过相应处理和加工，可致人体过敏反应或血清病。因此，血液制品、抗血清

22、、人和动物组织生产制备制品时，须有专用生产场所、生产设备及器材，不可与其他生物制品混用。375芽孢菌制品，系用炭疽杆菌、破伤风梭菌、肉毒梭菌等含有芽孢菌来生产制备的制品，芽孢菌是微生物对外周环境抵抗力最强的生命单位。芽孢菌在自然界可存活数十年及百年之久，100可耐受2小时以上，在70酒精中存活20年，低温和干燥对其毫无作用。生产芽孢菌制品的生产场所、生产设备和器材须专用，与其他制品生产严格分开。386卡介苗与结核菌制品生产场所，必须严格分开，其生产设备、器材、生产用菌种必须专用，不能混用。1930年德国Lubeck地方，给251名婴儿误用结核菌液，而不是减毒的卡介苗，造成72名婴儿死亡，病死率为28.68，有142名婴儿感染结核，感染率为56.5，称之为“Lubeck疫苗接种事故”。397卫生部1985年卫药第11号文中国医学微生物菌毒种保藏管理办法，规定一类、二类菌种和毒种为“强毒微生物”。一类：鼠疫杆菌、霍乱弧菌、天花病毒（已消灭）、黄热病毒、马脑炎病毒、Lassa病毒、Mstburg病毒、Ebola病毒、猴疱疹病毒等。二类：布氏菌、炭疽杆菌、肉毒梭菌、麻风杆菌、结核分枝杆菌等。狂犬病毒（街毒）、流行性出血热病毒、登革热病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病