食品毒理学一般毒性课件

1、一、实验动物的选择一、实验动物的选择 实验动物是指经人工培育，对其携带微生物实验动物是指经人工培育，对其携带微生物实行控制，遗传背景明确，来源清楚，可用于实行控制，遗传背景明确，来源清楚，可用于科学研究的动物。科学研究的动物。第一节第一节 化学物毒性评价的实验基础化学物毒性评价的实验基础 以选择哺乳动物为主。可采用以选择哺乳动物为主。可采用23种，啮齿类种，啮齿类和非啮齿类。常用大鼠和非啮齿类。常用大鼠(rat(rat）、小鼠（）、小鼠（mousemouse）、）、豚鼠、家兔和狗，尤以大鼠使用很多。豚鼠、家兔和狗，尤以大鼠使用很多。 Wistar Wistar 大鼠大鼠豚鼠豚鼠对化合物的毒性反

2、应及代谢过程与人相似对化合物的毒性反应及代谢过程与人相似自然寿命不太长自然寿命不太长易于饲养和实验操作易于饲养和实验操作经济并易于获得经济并易于获得（一）物种选择（一）物种选择 种类选择的依据：种类选择的依据： （二）品系选择（二）品系选择 品系指计划交配的办法获得的起源于共同祖先品系指计划交配的办法获得的起源于共同祖先的一群动物。同一品系的动物具有共同的遗传来的一群动物。同一品系的动物具有共同的遗传来源、相似的外貌特征、独特的生物学特性及稳定源、相似的外貌特征、独特的生物学特性及稳定的遗传性能。的遗传性能。1 1、近交系动物、近交系动物 指采用连续指采用连续20代以上兄妹交配或亲子交配而培育

3、代以上兄妹交配或亲子交配而培育的纯品系动物。遗传上高度一致，基因纯合度可达的纯品系动物。遗传上高度一致，基因纯合度可达98.6-99.8%。 对放射线耐受性强，淋巴细胞白血病发对放射线耐受性强，淋巴细胞白血病发病率病率6，化学致癌物质不能诱发乳腺癌，化学致癌物质不能诱发乳腺癌和卵巢囊肿，对结核杆菌有感受性。和卵巢囊肿，对结核杆菌有感受性。 可用于营养与肝癌发生率关系的研究，可用于营养与肝癌发生率关系的研究，对鼠伤寒沙门氏菌对鼠伤寒沙门氏菌C5C5有抵抗力，对酒精过有抵抗力，对酒精过敏。也可作为许多瘤株的宿主。敏。也可作为许多瘤株的宿主。 乳腺癌自发率低，肺癌发病率为乳腺癌自发率低，肺癌发病率为

4、2626，网状细胞瘤网状细胞瘤8 8，血管瘤，血管瘤6 6，淋巴肉瘤，淋巴肉瘤4545，乳腺癌，乳腺癌3 3，对放射线极为敏感。，对放射线极为敏感。 特点：特点：a.实验结果比较准确，可以避免遗传组成不同或实验结果比较准确，可以避免遗传组成不同或个体差异太大等所引起的误差。个体差异太大等所引起的误差。b.实验结果的平均性较一致。每组仅用较少数的实验结果的平均性较一致。每组仅用较少数的动物，即能看出显著性来。动物，即能看出显著性来。c.实验结果的重复性较大。实验结果的重复性较大。e.易于获得预期结果。易于获得预期结果。f.近交衰退。近交衰退。 2 2、突变系动物、突变系动物 在生长繁殖过程中，通

5、过自然突变或人工定向在生长繁殖过程中，通过自然突变或人工定向突变的方法，使其某基因发生突变并丧失原有的正突变的方法，使其某基因发生突变并丧失原有的正常功能。这种突变的基因可以世代相传并保持遗传常功能。这种突变的基因可以世代相传并保持遗传基因特性的品系动物，称为突变系动物。基因特性的品系动物，称为突变系动物。无胸腺裸鼠无胸腺裸鼠3 3、杂交群动物、杂交群动物 指两个不同近交系之间有目的地进行交配所产生指两个不同近交系之间有目的地进行交配所产生的第一代动物。的第一代动物。 特点：特点：a.a.具有纯系动物基本相似的遗传均质性具有纯系动物基本相似的遗传均质性。个体间遗。个体间遗传变异很小。传变异很小

6、。b.b.表现双亲的显性性状表现双亲的显性性状 c.c.对各种实验结果重复性好对各种实验结果重复性好d.d.具有杂种优势具有杂种优势 e e. .国际上分布广国际上分布广4 4、封闭群动物、封闭群动物 指在指在5年以上不从外部引进新血缘，仅由同一年以上不从外部引进新血缘，仅由同一品系的动物在固定场所保存繁殖的动物群。个品系的动物在固定场所保存繁殖的动物群。个体间具有一定程度的遗传学差异。封闭群动物体间具有一定程度的遗传学差异。封闭群动物个体间差异的大小，取决于祖代的来源个体间差异的大小，取决于祖代的来源 。（三）微生物控制的选择（三）微生物控制的选择1 1、无菌动物无菌动物 germ free

7、 animal, GF 指体内外均无任何微生物和寄生虫的动物。经指体内外均无任何微生物和寄生虫的动物。经人工剖腹产净化培育而来。人工剖腹产净化培育而来。2 2、悉生动物、悉生动物 gnotobiotic animal, GN 指体内带有已知微生物的动物。是经人工有计指体内带有已知微生物的动物。是经人工有计划地将已知菌投入动物体内。划地将已知菌投入动物体内。3、无特定病原体动物、无特定病原体动物 specific pathogen animal, SPF 指体内无特定的微生物和寄生虫的动物。即无指体内无特定的微生物和寄生虫的动物。即无传染病的动物，容许携带非特定微生物。传染病的动物，容许携带非特

8、定微生物。 SPF动物群的建立，其原种必须来源于无菌动物动物群的建立，其原种必须来源于无菌动物或悉生动物才能保证。或悉生动物才能保证。4 4、清洁动物、清洁动物 Clean animal,CL 也称最低限度疾病动物，动物体内外不携带人也称最低限度疾病动物，动物体内外不携带人畜共患疾病的病原体或动物传染病病原体。畜共患疾病的病原体或动物传染病病原体。（四）个体选择（四）个体选择1、年龄、年龄 取决于实验类型。取决于实验类型。急性实验急性实验成年动物成年动物亚慢性、慢性实验亚慢性、慢性实验较年幼或初断乳动物。较年幼或初断乳动物。 在实际工作中常以动物体重粗略判断动物在实际工作中常以动物体重粗略判断

9、动物的年龄。各组动物的年龄应尽可能保持一致。的年龄。各组动物的年龄应尽可能保持一致。2、性别、性别 不同性别的实验动物对化学物毒性的敏感程度不同性别的实验动物对化学物毒性的敏感程度有时会不同。有时会不同。一般选用雌雄两性一般选用雌雄两性。3、生理状态、生理状态 一般选用一般选用未产未孕未产未孕的雌性动物。雌雄分养。的雌性动物。雌雄分养。4、健康状况、健康状况 应选用健康动物。一般试验前检疫观察应选用健康动物。一般试验前检疫观察57天天二、常用染毒方法二、常用染毒方法（一）经口染毒（一）经口染毒1 1、灌胃、灌胃 是将液态受试化合物或固态、气态化合物溶于是将液态受试化合物或固态、气态化合物溶于某

10、种溶剂中，配制成一定浓度，装入注射器等定某种溶剂中，配制成一定浓度，装入注射器等定量容器，经过导管注入胃内。量容器，经过导管注入胃内。优点优点：剂量准确：剂量准确缺点缺点：工作量大；可能损伤食道或误入气管；与人：工作量大；可能损伤食道或误入气管；与人的接触方式差异很大。的接触方式差异很大。 2 2、吞咽胶囊、吞咽胶囊 将一定剂量受试化合物装入药用胶囊内将一定剂量受试化合物装入药用胶囊内，强制放到动物的后咽部迫使动物咽下。，强制放到动物的后咽部迫使动物咽下。家兔及猫、狗等大动物可用此法。家兔及猫、狗等大动物可用此法。 优点优点：剂量准确，尤其适用于易挥发、：剂量准确，尤其适用于易挥发、易水解和有

11、异味的化合物。易水解和有异味的化合物。3 3、喂饲、喂饲 将化合物拌入饲料和水中，需计算每日进食量将化合物拌入饲料和水中，需计算每日进食量和饮水量，折算摄入剂量。和饮水量，折算摄入剂量。 优点优点：符合人接触化合物的方式：符合人接触化合物的方式 缺点缺点：可能拒食；挥发性化合物可使摄入量下：可能拒食；挥发性化合物可使摄入量下降，且有经过呼吸道吸入的可能；化合物易水解降，且有经过呼吸道吸入的可能；化合物易水解或与食物中的化学成分起反应。或与食物中的化学成分起反应。（二）经呼吸道染毒（二）经呼吸道染毒1 1、静式吸入、静式吸入 在固定体积的密闭容器中，加入定量的易挥发液在固定体积的密闭容器中，加入

12、定量的易挥发液态化合物或气态化合物。将动物置于其中，一般态化合物或气态化合物。将动物置于其中，一般2h2h。尤其是适用于小动物接触易挥发液态化合物的急。尤其是适用于小动物接触易挥发液态化合物的急性毒性研究。性毒性研究。优点优点：设备简单；操作方便；消耗化合物少：设备简单；操作方便；消耗化合物少缺点缺点：柜内空气组成、环境条件不稳定；化合物浓：柜内空气组成、环境条件不稳定；化合物浓度难以恒定。度难以恒定。表表5-1 实验动物最低需气量及不同体积染毒柜应放置实验动物最低需气量及不同体积染毒柜应放置动物数关系动物数关系 动物种动物种属属呼吸通气呼吸通气量量(L/小时小时)最低需气最低需气量量(L/小

13、时小时)不同容积染毒柜放置动物数不同容积染毒柜放置动物数(只只)25L50L100L300L小小 鼠鼠大大 鼠鼠1.4510.182.4530.535610121512364056浓度计算：浓度计算：C=a.d/L10001000（mg/m3） a加入化合物量（加入化合物量（ml），），d比重，比重，L容积（容积（L）2 2、动式吸入、动式吸入 染毒柜染毒柜空气流动空气流动 面罩吸入面罩吸入避免化合避免化合物经皮吸入物经皮吸入 优点：剂量准确优点：剂量准确 缺点：装置复杂；消耗缺点：装置复杂；消耗大；可能造成污染大；可能造成污染（三）经皮肤染毒（三）经皮肤染毒 用于研究化合物经皮肤吸收的毒性作

14、用及化合用于研究化合物经皮肤吸收的毒性作用及化合物对接触皮肤的局部作用（皮肤刺激和致敏）物对接触皮肤的局部作用（皮肤刺激和致敏）第二节第二节 急性毒性及其评价方法急性毒性及其评价方法 实验目的实验目的1.求出受试化合物对一种或几种实验动物的致死求出受试化合物对一种或几种实验动物的致死剂量剂量(通常以通常以LD50为主要参数为主要参数)，以初步估计该化，以初步估计该化合物对人类毒害的危险性。合物对人类毒害的危险性。2.阐明受试化合物急性毒性的阐明受试化合物急性毒性的剂量反应关系剂量反应关系与与中毒特征。中毒特征。3.研究化合物在机体内的生物转运和生物转化过研究化合物在机体内的生物转运和生物转化过

15、程及其动力学变化。也可用于研究急救治疗措施程及其动力学变化。也可用于研究急救治疗措施4.为亚急性、慢性实验设计提供依据为亚急性、慢性实验设计提供依据二、急性毒性评价方法二、急性毒性评价方法（一）经典的急性致死性毒性试验（一）经典的急性致死性毒性试验1 1、实验动物、实验动物 选用成年健康动物，常用大鼠和小鼠。各剂选用成年健康动物，常用大鼠和小鼠。各剂量组雌：雄量组雌：雄1 1：1 1，出生，出生2 23 3个月个月。数量。数量10102020只最佳。大动物每组只最佳。大动物每组6 6只。实验前至少观察一只。实验前至少观察一周，选取其中健康动物，随机分组。周，选取其中健康动物，随机分组。2、染毒

16、剂量设计、染毒剂量设计（1）查阅文献）查阅文献：分析受试化合物的化学结构和其：分析受试化合物的化学结构和其理化性质，依此查阅文献，找出与受试化合物化理化性质，依此查阅文献，找出与受试化合物化学结构与理化性质近似化合物的毒性资料，并以学结构与理化性质近似化合物的毒性资料，并以其其LD50(LC50)值作为受试化合物的预期毒性中值。值作为受试化合物的预期毒性中值。（2）试验）试验：以文献：以文献LD50为中值，取倍差，设为中值，取倍差，设34个梯度，找出大致的个梯度，找出大致的LD10-90的范围。的范围。（3）正式试验）正式试验： I（logLD90logLD10）/（n-1）组距，即相邻）组距

17、，即相邻两个剂量组对数差或相邻组比值的对数值。一般两个剂量组对数差或相邻组比值的对数值。一般设设57个剂量组。个剂量组。 限量实验：限量实验：毒性较小的化学物若无法求得毒性较小的化学物若无法求得LD50，则进行限量实验，单次染毒剂量则进行限量实验，单次染毒剂量5g/kg（体重），（体重），食品毒理学实验食品毒理学实验15g/kg（体重）。（体重）。 3 3、观察、观察 一般要求计算一般要求计算两周内两周内的总死亡数。对于一些速的总死亡数。对于一些速死性化合物求其死性化合物求其LD50(LC50)也可仅计算也可仅计算24小时的死小时的死亡率。应注明是多少时间的亡率。应注明是多少时间的LD50值，

18、以便于在进值，以便于在进行毒性比较时有共同的基础。行毒性比较时有共同的基础。 观察内容：观察内容：（1 1）死亡情况（）死亡情况（2 2）动物体重（）动物体重（3 3）中毒反应症状）中毒反应症状（4 4）病理学检查）病理学检查4、LD50 计算计算 LD50是经统计学计算得到的毒性参数，并可报是经统计学计算得到的毒性参数，并可报告其告其95可信限。可信限。LD50(LC50)值是一个统计量，值是一个统计量，较少受实验动物个体易感性差异的影响，较为准较少受实验动物个体易感性差异的影响，较为准确，因此是最重要的急性毒性参数，也用来进行确，因此是最重要的急性毒性参数，也用来进行急性毒性分级。急性毒性

19、分级。 直接回归法直接回归法 将剂量对数值与死亡将剂量对数值与死亡率率(概率单位概率单位)的关系，的关系，进行直线回归，用最小进行直线回归，用最小二乘法求出二乘法求出a、b值。代值。代入直线方程：入直线方程：ya十十bX。式中，。式中，X为剂量对为剂量对数值，数值，y为死亡率的概为死亡率的概率单位。利用此式即可率单位。利用此式即可求得受试化学物的求得受试化学物的LD50及其及其95可信区间。可信区间。 % 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0 . 2.67 2.95 3.12 3.25 3.36 3.45 3.52 3.59 3.66 10 3.72 3.77 3.82 3.87 3.9

20、2 3.96 4.01 4.05 4.08 4.12 20 4.16 4.19 4.23 4.26 4.29 4.33 4.36 4.39 4.42 4.45 30 4.48 4.50 4.53 4.56 4.59 4.61 4.64 4.67 4.69 4.72 40 4.75 4.77 4.80 4.82 4.85 4.87 4.90 4.92 4.95 4.97 50 5.00 5.03 5.05 5.08 5.10 5.13 5.15 5.18 5.20 5.23 60 5.25 2.28 5.31 5.33 5.36 5.39 5.41 5.44 5.47 5.50 70 5.52

21、5.55 5.58 5.61 5.64 5.67 5.71 5.74 5.77 5.81 80 5.84 5.88 5.92 5.95 5.99 6.04 6.08 6.13 6.18 6.23 90 6.28 6.34 6.41 6.48 6.55 6.64 6.75 6.88 7.05 7.33 百分率百分率-概率单位换算表概率单位换算表（二）急性毒性实验的其他方法（二）急性毒性实验的其他方法 经典的急性毒性试验和经典的急性毒性试验和LD50的缺点：的缺点：消耗的动物量大消耗的动物量大获得的信息有限获得的信息有限测得的测得的LD50值实际上仅是近似值值实际上仅是近似值 五种化合物的五种化合

22、物的LDLD5050值的实验室间变异值的实验室间变异化合物化合物 范围范围(mg/kg) (mg/kg) 比值比值( (最大值最小值最大值最小值) )五氯酚五氯酚 7474620 8.38 620 8.38 水杨酸钠水杨酸钠 9309302328 2.502328 2.50苯胺苯胺 4794791169 2.441169 2.44乙酰苯胺乙酰苯胺 7237233060 4.233060 4.23氯化镉氯化镉 105105482 4.59482 4.59单次口服固定剂量试验法结果的评价单次口服固定剂量试验法结果的评价剂量剂量(mg/kg) 试试 验验 结结 果果 存活数存活数2000mg/kg

23、用用2000mg/kg试验试验 2000.0 用用500mg/kg试验试验 该化合物无严重急性中毒的危险性该化合物无严重急性中毒的危险性 1、固定剂量法、固定剂量法 2、急性毒性分级法、急性毒性分级法 3. 上、下移动法上、下移动法(updown method)或阶梯法或阶梯法 第二个动物接受化学物的剂量由第一只动物第二个动物接受化学物的剂量由第一只动物染毒后的反应决定，如果动物死亡，则下一个剂染毒后的反应决定，如果动物死亡，则下一个剂量降低；如果动物存活则下一个剂量增高，但是量降低；如果动物存活则下一个剂量增高，但是实验需要选择一个比较合适的剂量范围，使得大实验需要选择一个比较合适的剂量范围

24、，使得大部分的动物所接受的化学物剂量都会在真正的平部分的动物所接受的化学物剂量都会在真正的平均致死剂量左右。均致死剂量左右。 三、急性毒性分级三、急性毒性分级 目前国际上对外源化学物急性毒性分级的标准不统一。目前国际上对外源化学物急性毒性分级的标准不统一。 外源化学物急性毒性分级外源化学物急性毒性分级(WHO)(WHO)毒性分毒性分级级大鼠一次经大鼠一次经口口LDLD5050(mg/kg)(mg/kg)6 6只大鼠吸入只大鼠吸入4 4小时小时死亡死亡2 24 4只只的浓度的浓度(ppm)(ppm)兔经皮兔经皮LDLD5050(mg/kg)(mg/kg)对人可能致死剂量对人可能致死剂量单位体重单

25、位体重（g/kg g/kg ）总重总重(g/60k(g/60kg)g)剧毒剧毒高毒高毒中等毒中等毒低毒低毒微毒微毒1 11 150505005005000050000101010101001001000100010000100005 55 54444350350218021800.050.050.050.050.50.55 515150.10.13 33030252510001000我国食品毒理急性毒性分级法我国食品毒理急性毒性分级法19941994急性毒性分级急性毒性分级 大鼠经口大鼠经口LDLD5050(mg/kg) (mg/kg) 大致相当于体重为大致相当于体重为 70kg70kg人的致

26、死剂量人的致死剂量6 6级级( (极毒极毒) ) 1 1 稍尝，稍尝，7 7滴滴5 5级级( (剧毒剧毒) ) 1 150 750 7滴滴1 1茶匙茶匙4 4级级( (中等毒中等毒) ) 5151500 1500 1茶匙茶匙3535克克3 3级级( (低毒低毒) ) 5015015000 355000 35350350克克2 2级级( (实际无毒实际无毒) ) 5001500115000 35015000 35010501050克克1 1级级( (无毒无毒) ) 15000 15000 10501050克克第三节第三节 亚慢性、慢性毒性及其亚慢性、慢性毒性及其评价方法评价方法一、亚慢性和慢性毒

27、性试验的概念一、亚慢性和慢性毒性试验的概念 亚慢性毒性亚慢性毒性(subchronic toxicity)是指实验动物是指实验动物连续连续(通常通常13个月个月)重复染毒外源化学物所引起重复染毒外源化学物所引起的毒性效应；的毒性效应； 慢性毒性慢性毒性(chronic toxiciy)是指实验动物长期染是指实验动物长期染毒外源化学物所引起的毒性效应。一般是连续染毒外源化学物所引起的毒性效应。一般是连续染毒毒6个月至两年，甚至终生染毒。个月至两年，甚至终生染毒。二、亚慢性和慢性毒性试验的目的二、亚慢性和慢性毒性试验的目的 1. 确定受试物亚慢性和慢性毒性的确定受试物亚慢性和慢性毒性的效应谱效应谱

28、,并发现在急性及并发现在急性及亚急性毒性试验中未发现的毒作用；亚急性毒性试验中未发现的毒作用； 2. 研究受试物亚慢性和慢性毒作用的研究受试物亚慢性和慢性毒作用的靶器官靶器官； 3. 研究受试物亚慢性和慢性毒性剂量研究受试物亚慢性和慢性毒性剂量-反应反应(效应效应)关系，确关系，确定其观察到定其观察到有害作用的最低剂量有害作用的最低剂量(LOAEL)和和未观察到有害作未观察到有害作用的剂量用的剂量(NOAEL)，提出此受试物的安全限量参考值；，提出此受试物的安全限量参考值； 4. 研究受试物亚慢性和慢性毒性损害的研究受试物亚慢性和慢性毒性损害的可逆性可逆性； 5. 亚慢性毒性试验为慢性毒性试验

29、的剂量设计及观察指标亚慢性毒性试验为慢性毒性试验的剂量设计及观察指标选择提供依据；选择提供依据； 6. 确定不同动物物种对受试物亚慢性和慢性毒效应的差异确定不同动物物种对受试物亚慢性和慢性毒效应的差异，为将毒性研究结果外推到人提供依据。，为将毒性研究结果外推到人提供依据。三、亚慢性毒性和慢性毒性的评价方法三、亚慢性毒性和慢性毒性的评价方法（一）实验动物（一）实验动物 一般要求一般要求两种实验动物两种实验动物，一种为啮齿类，另一种，一种为啮齿类，另一种为非啮齿类。实验动物最好为纯系甚至同窝动物均为非啮齿类。实验动物最好为纯系甚至同窝动物均匀分布于各剂量组。雌雄各半。亚慢性实验每组匀分布于各剂量组

30、。雌雄各半。亚慢性实验每组20只以上大鼠，慢性实验每组只以上大鼠，慢性实验每组40100只。只。亚慢性毒性试验动物的亚慢性毒性试验动物的体重体重(年龄年龄)应较小，如小鼠应较小，如小鼠应为应为15g左右，大鼠左右，大鼠100g左右。左右。慢性毒性实验动物年龄应更小，大鼠和小鼠应为初慢性毒性实验动物年龄应更小，大鼠和小鼠应为初断奶者断奶者。（二）染毒途径（二）染毒途径 尽量模拟人类的接触方式；应与预期进行慢尽量模拟人类的接触方式；应与预期进行慢性毒理试验的接触途径相一致。性毒理试验的接触途径相一致。 染毒时间每日应定时，以维持动物血液中浓染毒时间每日应定时，以维持动物血液中浓度稳定。度稳定。 常

31、用的染毒途径是经胃肠道、经呼吸道和皮常用的染毒途径是经胃肠道、经呼吸道和皮肤染毒。肤染毒。（三）染毒期限（三）染毒期限 工业接触毒物：亚慢性毒性工业接触毒物：亚慢性毒性13个月，慢性个月，慢性毒性毒性6个月个月 环境毒物：亚慢性毒性环境毒物：亚慢性毒性36个月，慢性毒性个月，慢性毒性12个月以上个月以上 如果慢性毒性实验与致癌实验结合，染毒期如果慢性毒性实验与致癌实验结合，染毒期限最好是接近或等于终生染毒。限最好是接近或等于终生染毒。动物研究期限相当于寿命期动物研究期限相当于寿命期( () )和人染毒的时间和人染毒的时间物物种种研究期限研究期限(月月)相当于寿命期相当于寿命期() 研究期限研究

32、期限(月月)相当于人相当于人(月月)13612241361224大大鼠鼠4.112.025.04999 34 101202 404 808兔兔1.44.59.018.36 12 36 72 145 289狗狗0.822.54.99.8206.5 20 40 81162猪猪0.822.54.99.8206.5 20 40 81162猴猴0.551.6 3.36.6134.5 13 27 61107（四）剂量分组（四）剂量分组 至少至少3个剂量组和个剂量组和1个对照组。个对照组。 高剂量组高剂量组：出现较明显的毒性效应，死亡率：出现较明显的毒性效应，死亡率小于小于10或无死亡或无死亡 中剂量组中剂

33、量组：轻微毒性，即观察到最低有害作：轻微毒性，即观察到最低有害作用剂量（用剂量（LOAEL） 低剂量组低剂量组：不出现中毒反应，即未观察到有：不出现中毒反应，即未观察到有害作用剂量（害作用剂量（NOAEL） 亚慢性毒性实验：亚慢性毒性实验：可参考两个数值，一是以急性毒性的阈可参考两个数值，一是以急性毒性的阈剂量为亚慢性试验的最高剂量；一是以此化合物剂量为亚慢性试验的最高剂量；一是以此化合物LD50的的1/20 1/5为最高剂量。为最高剂量。 慢性毒性实验：慢性毒性实验：剂量的选择可参考三组数据。剂量的选择可参考三组数据。1、亚慢性亚慢性NOAEL或其或其1/5 1/2剂量为慢性毒性试验的最高剂

34、量为慢性毒性试验的最高剂量，以这一阈剂量的剂量，以这一阈剂量的1/50 1/10为慢性毒性试验的预计阈剂为慢性毒性试验的预计阈剂量组，并以其量组，并以其1/100为预计的慢性无作用剂量组为预计的慢性无作用剂量组2、亚慢性试验的亚慢性试验的LOAEL的的1/2、1/4、1/8分三组分三组3、急性毒性的急性毒性的LD50剂量为出发点，即以剂量为出发点，即以LD50 的的1/10剂量为剂量为慢性试验的最高剂量。以慢性试验的最高剂量。以LD50的的1/100为预计慢性阈剂量，为预计慢性阈剂量，以以LD50 的的1/1000为预计的无作用剂量组。为预计的无作用剂量组。（五）观察指标（五）观察指标1、中毒

35、症状、中毒症状：每日观察动物有无中毒症状和程度：每日观察动物有无中毒症状和程度，外观和行为有无异常，外观和行为有无异常2、体重、体重：每周称重一次：每周称重一次3、食物利用率、食物利用率：记录每日饲料消耗量，计算食物：记录每日饲料消耗量，计算食物利用率（每摄入利用率（每摄入100g饲料所增长的体重克数）。饲料所增长的体重克数）。4、实验室检查、实验室检查（1）血液学检查）血液学检查（2）尿液检查）尿液检查（3）血液生化检查）血液生化检查5、病理及病理组织学检查、病理及病理组织学检查 凡是在实验过程中死亡的动物均应及时解剖检查，凡是在实验过程中死亡的动物均应及时解剖检查，实验结束后所有动物都要杀

36、死检查。慢性毒性实验实验结束后所有动物都要杀死检查。慢性毒性实验在实验中期进行一次检查。在实验中期进行一次检查。（1）系统解剖系统解剖：包括肉眼观察：包括肉眼观察 动物固定在解剖板上，解剖颈部(颌下腺、腮腺、局部淋巴结等) 取一侧乳腺及腹部皮肤；开腹并扩展切口(胰、脾、生殖器官、肾、肾上腺、直肠、胃、十二指肠、空肠、回肠、肠系膜淋巴结、肝脏等) 开胸(舌、喉、气管、甲状腺、甲状旁腺、食管、心、肺、胸腺) 剥离左后肢(肌肉、坐骨神经、股骨)；头皮、耳； 开颅(颅神经、脑组织、垂体)；暴露脊髓(取出脊髓)（2）脏器系数）脏器系数：也称脏体比值，是指某个脏器的：也称脏体比值，是指某个脏器的湿重与单位体重的比值，通常以湿重与单位体重的比值，通常以100g或或1g体重计。体重计。此指标的意义是实验动物在不同年龄期，其各脏器此指标的意义是实验动物在不同年龄期，其各脏器与体重之间重量比值有一定规律；若受试化合物使与体重之间重量比值有一定规律；若受试化合物使某个脏器受到损害，则此比值就会发生改变。脏体某个脏器受到损害，则此比值就会发生改变。脏体比值是一个灵敏、有效和经济的指标。比值是一个灵敏、有效和经济的指标。（3）组织病理学检查）组织