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1、会计学1实验直接抗人球蛋白实验实验直接抗人球蛋白实验第1页/共16页第2页/共16页 致敏红细胞致敏红细胞 抗人球蛋白抗人球蛋白直接抗人球蛋白试验直接抗人球蛋白试验第3页/共16页第4页/共16页第5页/共16页第6页/共16页第7页/共16页受检标本受检标本红细胞悬液配制：红细胞悬液配制： 1. 1. 抗凝全血抗凝全血 2ml2ml（与抗凝剂混匀）（与抗凝剂混匀） 1000g 1000g 离心离心3min3min 分离上层血浆分离上层血浆 2. 2. 压积红细胞的制备：压积红细胞的制备：NSNS洗涤三次，注意离心速度及时间洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g1000g离心离心1min1

2、min） （注意操作轻柔，防溶血！）（注意操作轻柔，防溶血！） 3. 3. 取压积红细胞配成取压积红细胞配成5 5的红细胞悬液（的红细胞悬液（1d1d压积红细胞压积红细胞19d NS19d NS）第8页/共16页 人工制备人工制备IgGIgG型致敏红细胞（阳性对照）：型致敏红细胞（阳性对照）：1 1、采集、采集3 3人份人份O O型型RhDRhD阳性抗凝全血，阳性抗凝全血，1000g1000g离心离心3min3min，分离，分离血浆；红细胞经生理盐水（血浆；红细胞经生理盐水（NSNS）3 3次洗涤后，取次洗涤后，取3 3人份的压积人份的压积红细胞各红细胞各5 5滴混匀，备用；滴混匀，备用；2

3、2、用一次性吸管取压积红细胞、用一次性吸管取压积红细胞3 3滴于试管中，加入滴于试管中，加入2 2倍体积倍体积的单克隆的单克隆IgGIgG抗抗D D血清，混匀，置于血清，混匀，置于3737孵育孵育45min45min；3 3、孵育结束取出试管，、孵育结束取出试管，1000g1000g离心离心2min2min，弃上清，用，弃上清，用2 2倍体倍体积的积的NSNS洗涤洗涤3 3次（次（1000g1000g离心离心1min1min），最后加入），最后加入NSNS配制成约配制成约5 5的致敏红细胞悬液（的致敏红细胞悬液（1d1d压积红细胞压积红细胞19d NS19d NS），备用），备用第9页/共16页 未致敏红细胞（阴性对照）：未致敏红细胞（阴性对照）： 取取3 3滴滴3 3人份混合压积红细胞，加入人份混合压积红细胞，加入5757滴滴NSNS混匀，备用。混匀，备用。 （无须单克隆（无须单克隆IgGIgG抗抗D D血清致敏）血清致敏）第10页/共16页第11页/共16页第12页/共16页v如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集凝集者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集

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