L-丝氨酸酶法生产工艺放大试验培训课件

1、L-丝氨酸酶法生产工艺放大试验丝氨酸酶法生产工艺放大试验目录 概述 制药工艺路线及研究阶段 原材料及产品的主要技术规格 生产流程简述 发酵工艺放大优化 分离纯化放大与优化 产品的检验与分析 主要设备的计算 种子罐 发酵罐 离子交换罐研究内容：研究内容：L-丝氨酸丝氨酸 概述L-丝氨酸是一种脂肪族极性氨基酸。L-丝氨酸是组成蛋白质的常见20种氨基酸中的一种，是哺乳动物的非必需氨基酸，也是生酮氨基酸。在自然界中也有D-丝氨酸，如丝原蛋白中。在一些抗生素中也有D-丝氨酸。符号：S。 学名：2-氨基-3羟基丙酸。 英文名：L-Serine，缩写：L-Ser， 分子式：C3H7NO3，结构式：CH2OH

2、CH(NH2)COOH，分子量：105.09。 结构式： 药理作用：药理作用：磷脂酰丝氨酸补充剂能增加大脑皮层中的神经传递质乙酰胆碱的产量，乙酰胆碱与思维、推理和注意力集中有关联。磷脂酰丝氨酸也能刺激多巴胺的合成和释放。磷脂酰丝氨酸似乎和大脑对压力的反应有关联。一项临床研究发现，在针对健康人施加压力的实验中，服用磷脂酰丝氨酸的人群对于压力的反应要比其他人群低。压力反应是通过衡量血液中促肾上腺皮质激素水平得出的，促肾上腺皮质激素是由脑下垂体分泌的一种激素，它随之促进肾上腺分泌应激激素皮质醇。磷脂酰丝氨酸主要用于治疗痴呆症（包括阿兹海默症和非阿兹海默症的痴呆）和正常的老年记忆损失。国内外的生产情况

3、国内外的生产情况L-丝氨酸的主要生产方法有以下四种。蛋白质水解法：L-丝氨酸在丝胶蛋白中的含量丰富，蚕茧衣中含量为13.64%，因此，可用水解蚕茧衣制取。添加前体发酵法：L-丝氨酸在生物体内代谢运转速度极快，直接发酵法生产困难。一般采用添加前体的发酵法。添加的前体主要有甘氨酸、甘氨酸三甲内盐或甘油酸，其中以甘氨酸为前体的已工业化。产生菌可分为两类：异养型和甲基营养型细菌。化学合成法：DL-丝氨酸可有以羟基乙醛为原料的合成法等，然后再拆分得L-丝氨酸。酶法：利用丝氨酸羟甲基转移酶催化甲醛和甘氨酸（Gly）可逆的合成L-Ser，反应过程中SHMT需PLP和四氢叶酸（THFA）作为其辅因子，由于主要

4、原料来源广泛、价格低廉，并可合成高浓度的产物，因此该法是目前最有应用前景的L-Ser生产方法。鉴于化学合成法和酶法各自的优势,可将二者结合起来,即先用化学合成法制备出DL-丝氨酸,将其氨基乙酰化,再用固定化酶法进行拆分。现用于氨基酸拆分的酶主要是氨基酰化酶,通常将酶固定在DEAE-葡聚糖凝胶A-25、碘乙酰纤维素或聚丙烯胺凝胶上。将固定化酶均心地装入柱内,底物(乙酰化氨基酸)溶液在合适的柱温、pH条件下以一定的速度通过酶柱即可。过程如下：7用途与发展前景L-丝氨酸虽属于非必需氨基酸但具有许多重要的生理功能和作用,因此,在医药、食品、化妆品中均有较为广泛的应用。丝氨酸是重要的自然保湿因子(NMF

5、)之一,皮肤角质层保持水分的主要角色,因此是很多高级化妆品中的关键添加剂,只是因其价格限制了它在化妆品中的应用。L-丝氨酸广泛用于配置第三代复方氨基酸输液和营养增补剂，并用于合成多种丝氨基酸衍生物，如心血管、抗癌、爱滋病新药及基因工程用保护氨基酸等。抗衰老作用。食品：L-丝氨酸用于运动饮料、氨基酸减肥饮料等。饲料：L-丝氨酸用于动物饲料，可促进动物生长发育；制备工艺路线制备工艺路线发酵过程发酵过程原材料及产品的主要技术规格培养基：LB培养基蛋白胨10g酵母浸出液5g氯化钠5g水1L 发酵流程发酵流程1.将LB培养基共0.25m3放入0.3m3的种子罐配料罐中，待搅拌均匀后，用泵打入种子罐中，种

6、子罐用138水蒸气进行夹套加热灭菌（使培养基从25升至121），再用冷却水使之冷却到37，接入菌种后培养到对数期待用。2021-12-112在12m3的发酵罐配料罐中加入8.35m3的LB培养基，开启搅拌待混匀后，用泵打入发酵罐中，进行灭菌，用138水蒸气先进行间接加热（使培养基从25升至90），再用蒸汽直接加热（使培养基从90升至121），然后用冷却水使之冷却到37，待用。3.将种子罐中的料液放入发酵罐中发酵14h，再用离心机进行离心分离，收集菌体，废液放入贮罐中。2021-12-11发酵放大主要过程示意图发酵放大主要过程示意图2021-12-11生产原料生产原料氢氧化钠溶液用量66040L

7、浓度1M盐酸用量66040LpH=2无水乙醇用量2080L去离子水用量99060L717型离子交换树脂用量49530L产品的主要技术规格产品的主要技术规格生产规模：80吨/年生产方法：717型离子交换树脂离子交换层析后，进行浓缩，之后添加乙醇结晶，离心分离生产天数：300天生产周期：1天生产方式：间歇生产分离纯化所需原材料及产品的主要技术规格分离纯化所需原材料及产品的主要技术规格 生产流程简述生产流程简述 :本设计采用离子交换层析对两种氨基酸（L-丝氨酸和L-甘氨酸）进行分离。 基本流程：基本流程：反应液离子交换层析浓缩结晶过滤干燥产品 反应过程反应过程: 发酵结束后收集菌体，菌体沉淀中加入蒸

8、馏水制成菌悬液，细胞破碎后加入5-磷酸吡哆醛（PLP，终浓度为2mmol/L），37温育24h。然后加入四氢叶酸（终浓度为25mmol/L）、甘氨酸（终浓度为2mol/L）、37的甲醛溶液（终浓度为50mmol/L）进行酶反应72h2021-12-11离子交换层析过程离子交换层析过程采用717型离子交换树脂，将其装入离子交换罐，保证其密实。然后用氢氧化钠水溶液处理（溶液浓度为1M，体积为66040L）使离子交换柱呈碱性，处理完之后上样。上样后，L-丝氨酸和L-甘氨酸吸附在交换树脂上，可用酸性溶液洗脱，本设计采用pH=2的Hcl溶液洗脱，用量为66040L，洗脱前需要用去离子水洗涤，最终可得氨基

9、酸溶液为16510L，其中L-丝氨酸为6934L。结晶过程结晶过程离子交换层析完毕后，对料液进行浓缩。采用蒸汽加热，可将料液浓缩至原体积的1/10。浓缩过程：浓缩过程：待浓缩液冷却后，加入208L无水乙醇，使L-丝氨酸结晶，最后离心烘干可得产品267kg/天。年操作日为300天。简述:717型离子交换树脂装入离子交换罐用氢氧化钠溶液处理上样用去离子水洗涤用Hcl溶液洗脱浓缩冷却加入无水乙醇结晶离心过滤烘干产品2021-12-11工艺分离工艺分离生产条件:已知L-丝氨酸的小试纯化工艺为：717型离子交换树脂用1M的NaOH溶液处理成OH-型，水洗至中性后装柱（三根25500mm的柱子）。对第一根

10、柱子上样，上样结束后水洗。然后连接另2根柱子，用pH=2的Hcl洗脱，分别收集只含L-丝氨酸、L-甘氨酸，以及同时含这两种氨基酸的洗脱液。假设一个柱子的体积为V，已知NaOH溶液用量为4V，洗涤水用量为2V，洗涤液用量为4V，其中含氨基酸的洗脱液体积为1V，含L-丝氨酸的洗脱液体积为0.42V。将含L-丝氨酸的洗脱液浓缩液浓缩至原体积的1/10，加入3倍体积的无水乙醇，将晶体（湿含量15%）离心烘干，L-丝氨酸的分离得率为77%。年操作日300天，生产方式：间歇生产。水蒸气138，冷却水由27进，37出。 物料衡算物料衡算已知柱子25500mm，一个柱子的体积为V，已知NaOH溶液用量为4V，

11、洗涤水用量为2V，洗涤液用量为4V，其中含氨基酸的洗脱液体积为1V，含L-丝氨酸的洗脱液体积为0.42V。将含L-丝氨酸的洗脱液浓缩液浓缩至原体积的1/10，加入3倍体积的无水乙醇，将晶体（湿含量15%）离心烘干，L-丝氨酸的分离得率为77%。年操作日300天。2021-12-11 离子交换罐离子交换罐小试生产时：g539. 2105024178. 0024178. 077. 00314. 0mol0314. 0157. 02 . 0V2 . 0157. 0157000500220V-L32得丝得丝甘丝mmolnnnLmmL储罐：高位槽储罐：高位槽NaOH总体积为66040L，分3个高位槽安放

12、。选型为F25000HG/T2374-98公称容积为25000L实际容积为27790L直径D为2800mm高度H为5379mm液位计直径为65/50mmHCl总体积为66040L，分3个高位槽安放。选型为F25000HG/T2374-98公称容积为25000L实际容积为27790L直径D为2800mm高度H为5379mm液位计直径为65/50mm洗脱水体积为99060，分4个高位槽安放选型为F25000HG/T2374-98实际容积为27790L直径D为2800mm高度H为5379mm液位计直径为65/50mm无水乙醇体积2080L选型为F3000HG/T2374-88公称容积为3000L实际

13、容积为3337L直径D为1450mm高度H为2933mm液位计直径为65/50mm 废液储罐废液储罐已知此液总体积为16510L选用搪玻璃卧式储罐型号为HG/T237594公称容积为20000L实际容积为22332L直径D为2400mm长度L为5374mm液位计直径为65/50mm产品的检验与分析检验原理检验原理：纸层析法是利用各物质不同的分配系数，使混合物随流动相时而得到分离的方法。纸层析法是以滤纸作为惰性支持物的。滤纸纤维与水亲和力较强，而与有机溶剂亲和力弱，所以纸层析以滤纸纤维和结合水为固定相，以有机溶剂为流动相。当有机相沿滤纸流动经过样品点时，样品点上的溶液在水相和有机相之间进行分配，

14、样品移动速率与样品的极性及水亲和力有关，因此，极性氨基酸移动较慢，而非极性氨基酸移动较快。2021-12-112021-12-11在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。产品的检验与分析 实验器材与试剂（1）实验器材：硅胶板，层析缸，毛细管，铅笔，展开剂，显色剂（2）实验试剂展开剂:正丁醇：丙酮：氨水：水（10：10：2：1）100ml指示剂:茚三酮丙酮（150）20ml（3）待测溶液：L-丝氨酸反应液实训步骤：1.试剂准备:展开剂以及茚三酮显色剂配制。2.划线:用铅笔在硅胶板上距末端一厘米出轻轻画一横线。2021-1

15、2-113.点样用毛细管分别吸取待测样品溶液，在横线上轻轻点样，分别点三次。注：点完一次之后等到残余溶剂渗入之后再点样，点样不宜太多，否则会降低Rf值，斑点直径控制在2毫米，不宜超过5毫米。同时点样点之间距离在一厘米左右，防止边缘效应。硅胶板在空气中放置时间要尽量短，否则会因吸潮而降低活性。4.展层将点了样的硅胶板放在盛有展开剂（约05cm）的展开槽中。距离硅胶板上端二厘米处取出硅胶板。注：展开剂不能超过一厘米出画的线。由于毛细管作用，展开剂在硅胶板上缓慢前进，样品由于与展开剂的亲和力不同而分离。5.显色展开好后，取出，晾干，用装有茚三酮的喷雾器进行喷雾显色，多数在日光下可找到色点。用铅笔将各

16、斑点框出，并找出斑点中心，用小尺量出各斑点到原点的距离和溶剂前沿到起始线的距离，然后计算出样品的比移值2021-12-11“三废三废”治理及综合利用治理及综合利用废水处理废水处理各类废水将经厂区污水站预处理达标后，可纳入污水管网，进污水处理厂集中处理，达标排放。厂区生产废水预处理工艺图：2021-12-11噪声、固废污染防治噪声、固废污染防治（1）噪声对高噪声设备如风机、水泵等进行消声、隔声处理，污水提升泵站在泵房内隔音。（2）固废应按照固体废物的性质进行分类收集和暂存。本项目所有废物都必须储存于加盖密闭容器中。各种脚料及母液用钢质容器储存，脱水渣也采用聚氯乙烯容器储存。发酵液板框压滤废渣干燥

17、后可做生物复合肥原料综合利用；粗品溶解滤渣主要成分为硅藻土，干燥后也可做生物复合肥原料综合利用。2021-12-11对蒸馏残液以及废活性炭等危险固废，对其进行焚烧处理。烟气高空排放。项目燃煤锅炉煤渣可外卖综合利用，由砖瓦厂制砖或用于铺路等。厂区职工产生的生活垃圾，可由环卫部门外运填埋处理。具有刺激性、恶臭物料的包装材料储存于容器中并加盖密闭。废包装箱、捆绑材料等则应及时收集，室内分类存放，可回收综合利用的尽量回用，少量不能回用的，应进行去毒或无害处理后一并由环卫部门外运填埋处理。2021-12-11主要设备：种子罐主要设备：种子罐不锈钢种子罐广泛用于微生物生长的一种反应设备。在种子罐（发酵罐）

18、中各种微生物在适当的环境中生长,新陈代谢和形成发酵产物。种子罐广义的理解为存储或产生种子的容器，发酵设备目前已广泛地用于制药、味精、酶制剂、食品等行业。适用于酸奶及乳酸菌饮料母液发酵、酿造、佐料、制药、化工及真菌培植，其作用可加热、保温及冷却，为全封闭卫生型发酵专用设备。2021-12-112021-12-11主要设备：发酵罐主要设备：发酵罐发酵罐，指工业上用来进行微生物发酵的装置。其主体一般为用不锈钢板制成的主式圆筒，其容积在1m3至数百m3。在设计和加工中应注意结构严密，合理。能耐受蒸汽灭菌、有一定操作弹性、内部附件尽量减少（避免死角）、物料与能量传递性能强，并可进行一定调节以便于清洗、减少污染，适合于多种产品的生产以及减少能量消耗。用于厌气发酵(如生产酒精、溶剂)的发酵罐结构可以较简单。用于好气发酵(如生产