拟南芥培养基配置(共3页)

1、11播种和发芽拟南芥可在非无菌条件下，生长在土壤或人工配制的各种中。作为栽植的容器，可根据各自条件置于或格状分离的多穴中。常用的混合物有、和等，例如珍珠 岩蛭石泥炭藓 =111的混合物，表土、堆肥或腐殖质土珍珠岩或蛭石 =11，12或 21的混合物。如果用于营养研究则可以蛭石类惰性物质作培养介质，施以配有营养物质的水溶液。栽培拟南芥的介质均要求有良好的排水性，因此一般混合砂子、蛭石等惰性介质，保持良好的排水，防止过湿引起真菌和滋生。播种前土壤混合物进行高压灭菌处理 30min，以杀死可能存在于混合物中的任何害虫。在把土壤混合物置于花盆或其他容器中后，将整个容器置于水或营养液中，靠毛细管作用浸湿

2、介质，然后将处理洗净来的种子，用尖头烧融后的移液管小心移至土表，均匀播下。如果播种量较大，可用浓度为 01g/100mL琼脂或事先均匀混合后播种。种子发芽期间必须保持高湿度，故容器可用塑料膜复盖，保持一周左右方可揭去。1 将播有种子的容器移至低温或相应低温条件下，在 24下 放置 24d，从而于吸胀条件下破除种子休眠，这对新鲜收获的拟南芥种子尤为必要。对大多数拟南芥品系来说其种子是中度休眠 的，收获已久的这类生态型的拟南芥种子可免于低温处理，而有些生态型甚至需长达7d的 低温 处理。干种子的低温处理往往是无效的。低温处理后，将盆移至温室或生长室，在 22 左右发芽，夜温可比日温低2，用 200

3、0lx的荧光灯给予光照，光周期为18h光 /6h暗（也可24h光照2 ），在 5d左右可见拟南芥发芽。拟南芥发芽需光，故防止种子被土覆盖。12生长发育条件的控制3 拟南芥一般是冬性，自然条件下种子在秋 天发芽，幼年期度 过冬天，花分生组织在春季分化，种子在夏季成熟脱落。大多数实验室栽植的拟南芥品种在后 4周开花，而在 46周后采集种子。不同拟南芥生态型其发育进程快慢、开花时间早晚、何时成熟等除了取决于以外，也受外界环境条件的影响。121光光对拟南芥生长的影响涉及和光周期两个方面。以光强度说，在生长室中一般最适光的光强度为120150mol/（ · s）（1mol/（· s）

4、=5烛光 =0217W/m 2 =538lx），这可通过荧光灯，配以白炽光来达到。在 夏天温室中，60%荫影有助于光强控制和温度调节，高光强或直接太阳光照射对较老植株可以忍受，而年幼植株避免强光。拟南芥在连续照光和 长日下开花加快，短日时开花被 或延迟，这表 明拟南芥开花需要长日照光周期，一般至少12h的光照。在冬季温室中可补充早晚的光照，以满足需要，一般给以16h光照，8h暗期为宜。连续光照可促进循环，略微提早开花，但使叶数减少及降低种生成，而较短日照有利于营养生长。122温度温室和生长室的温度应予以控制，最适生长温度 为25 左右，稍低的温度也是允许的。当水分供应充足时，植物甚至能在高达3

5、4 时生长，但会减少受精。较老的植物能忍受高温，但保持25对整个生长周期是有利的。当种子形成时，生长室温度宜设 定在25，而温室温度宜在23，夜温可比日温低24为宜。2 对于许多迟开花的拟南芥生态型来说，要给以 4左 右处 理一 个时期（如几周），以完成春化作用，从而在长日下促进开花。而对于常用的拟南芥生态型 Landsbergerecta和 Columbia则 不需作春化处理就能 开花。 必须注意这里的低温春化处理是不同于播种时破除休眠的低温处理，破除休眠的低温处理又称层积处理（stratification）。123水分在种子发芽后的头几周里，理想的供水是来自由下至上的渗水，只有当土壤呈现干

6、旱时适时灌溉。过量供水会引起土表藻类和真菌的生长。在拟南芥头两片真叶开始伸展之前必须避免干旱，当真叶长出后，灌水频率可相应减少，如每周一或两次，而至长角果充实阶段必须保证水分供应，以利于种子形成。浇水时最好待90%左右的穴盘或花盆完全干燥之后进行。2 不仅土壤供水状况影响到拟南芥的生长发育，而且湿度也会影响水分供给。虽然湿度的增加（如 50% 60%）会大大减少土表干旱的影响以及发芽着的幼苗脱水危害，但一般说来拟南芥植株，包括幼苗都能忍受低湿度，处在莲座状阶段的植株可在不同湿度下生长，当进入成熟阶段时，较低湿度（如 <50%）是有利的。124营养正常情况下只要配置合适的土壤混合物，就并非

7、必须供给营养物质，但是的营养状况会降低植株高度，使它提早开花，并使种子着生减少。在生长发育的后期阶段补充营养物质将会增 加种子着生，并产生较健壮的植 株。当植株呈现出轻微淡绿色时，表明营养供给不 足，则应立即施以营养物质，正常健壮的拟南芥植株是亮暗绿色的。125防止杂交拟南芥是自交授粉的，为了保持拟南芥品系的纯化，必须防止温室或生长室中各品系之间的杂交。为此可根 据各自实验室条件进行设置。例如，保持生长环境的清洁，从而防止经昆虫载体而导致的杂交机会。栽植时注意各品系种植之间的距离（如 20cm），从而防止来自不同品系的花互相接触。在长成植株后，可采取适当措施，防止植株，以致互相接触。无菌培养拟

8、南芥之所以作为，其中一个原因 在于可以在灭菌条件下进行突变体筛选。此外，在许多拟南芥研究方面也需要做无菌培养。无菌培养在拟南芥研究中的应用可归纳为以下几方面：21无菌培养的培养基组成最普遍的培养基是1倍或0.5倍浓度MS培养基，其中加入琼脂达 06% 08%的浓度，可另加蔗糖至 0% 3%。也有实验采用 GamborgB5培养基。以下列出一种培养基配方：培养基组成最终浓度MS基本培养基盐类 44mg/mL蔗糖 10/mL 100/ 10g/mL05g/mL烟酸 05g/mLMES2（N吗啉代）乙磺酸 05mg/mL在上述配制溶液中，加入 1mol/LKOH调 pH至 5.7，在加入适量或蔗糖后，灭菌，贮存。当需铺平板时，将贮藏培养基置于中熔化，即可将其倒至培养皿中。0.8%琼脂浓度有利于在不伤根的情况下取出培养的小植株，并移植至土壤。蔗糖用作碳源，有利幼苗茁壮生长，但对只需短时间发芽生长的处理可免去蔗糖成分。22种子灭菌和播种种子表面灭菌可采用漂白剂、乙醇等，另可附加 SDS，TritonX100等。例如，将拟南芥种子用含 0001% 02% SDS的 50%漂白剂处