芪仙安肠方对大鼠溃疡性结肠炎的治疗作用及机制

1、英仙安肠方对大鼠溃疡性结肠炎的治疗作用及机制作者：田军彪 单兆伟刘建平 赵红伟 康薇【摘要】目的探讨英仙安肠方对三硝基苯磺酸(tnbs)诱导溃疡性结肠炎模型大鼠的疗效及作用机制。方法 采用tnbs诱导制 备溃疡性结肠炎大鼠模型40只，随机分为模型组、阳性对照组及罠仙 安肠方低、中、高剂量组，各8只，并选未造模大鼠8只作为正常对照 组。各组均灌胃给约，模型组和止常对照组予0.9%氯化钠注射液，阳 性对照组予柳氮磺毗噪(sasp) 0. 50 g/kg,罠仙安肠方低、中、高剂 量组分别给予相应剂量(5.0、10.0、20.0 g/kg)的罠仙安肠方原液, 均每r 1次。给药吋间从造模后第3 fi开

2、始，连续14 ro造模后第18 日观察各组大鼠结肠黏膜损伤指数(cmdi)及黏膜病理组织学情况，并 检测免疫球蛋白(ig) a、igg、补体3 (c3)、补体4 (c4)、肿瘤坏死 因子-a (tnf- a )、白细胞介素-2 (il-2)及白细胞介素-4 (il-4)含量变 化。结果茯仙安肠方低、中、高剂量组结肠黏膜病理损伤明显改善, cmdi 均降低,c3、c4 及 il-4 含量明显提高，iga、igg、tnf-a、il-2 含量降低，与模型组比较差异均有统计学意义(p<0.01)；罠仙安 肠方中、高剂量组治疗后cmdi、c3、c4、il-2、il-4、tnf-a含量与 正

3、常对照组比较差异均无统计学意义(p>005)，与阳性对照组比 较差异有统计学意义(p<0.01)o结论罠仙安肠方对tnbs诱导的 大鼠溃疡性结肠炎疗效确切，中、高剂量尤其显著，其作用机制可能与 免疫调节和减轻细胞因子损伤有关。【关键词】结肠炎溃疡性屮药疗法 免疫球蛋白a免疫球蛋白 g补体3补休4肿瘤坏死因子q动物实验a study on the therapeutic effect and mechanism of qixiananchang decoction on ulcerative colitis of ratsabstract objective to o

4、bserve the therapeutic effect and mechanism of qixiananchang decoction on ulcerstive col i tis of rats induced by trinitrobenzene sulphoacid (tnbs) methods 40 sd rats were induced by tnbs and modeled and divided into 5 groups: model group, positive control group, high-dose, mid-dose, low-dose qixian

5、anchang decoction groups, with 8 rats in each group. there were al so 8 non-modeled sd rats in normal control group all groups were clystered: positive control group was treated by salazosulfapyridine (sasp) 0. 5 g/kg, high-dose, mid-dose and low dose groups were given qixiananchang decoction respec

6、tively (5.0 g/kg, 10. 0 g/kg, 20. 0 g/kg) from the 3rd day after modeling for 14 days and recorded the changes of the following values: cmdi, mucous membrane histopathology, iga, igg, c3, c4, - a (tnf- a ), il一2, il-4 after 18 days. results the therapeutic effects in all qixiananchang decoction grou

7、ps were superior to those in model control group (p⁢ 0. 01). there was no significant differences between mid/high dose groups and normal control group (p>0.01),and there was a significant difference between mid/high dose groups and positive control group (p⁢001). conclusion qix

8、iananchang decoction is effective in treatment on ulcerative colitis of rats induced by trinitrobenzene sulphoacid, especially in mid-dose and high-dose groups its mechanism may have a close connection with immunoregulation and al 1eviation of cytokine damageskey words qixiananchang decoction; ulcer

9、ative colitis： tnbs: immunoglobulin; complement; cytokine溃疡性结肠炎(ulcerative col itis, uc)是一种临床常见的 反复发作性、难治性消化系统疾病。罠仙安肠方具有健脾益气、清热 燥湿、化瘀解毒的功效。现以三硝基苯磺酸(tnbs)为半抗原诱导建 立大鼠uc模型,观察苣仙安肠方对其治疗作用并探讨相关机制。1材料与方法1. 1药品与试剂 罠仙安肠方（药物组成：黄罠12 g,炒白 术io g,仙鹤草15 g,败酱草12 g,黄连3 g,白及12 g,炒口芍 药15 g,煨木香6 g,血竭2 g）原液（ftl河北省中医院制剂室

10、提供, 每ml含生药2. 0 g）,罠仙安肠方低、中、高剂量（5. 0、10. 0、20. 0 g/kg） 分别相当于临床成人日用量的3. 5、7、14倍。柳氮磺毗噪（sasp）（上 海三维制药有限公司，批号：200609c15）；三硝基苯磺酸（tnbs）（日 木tci公司，批号：p1315） ;elisa试剂盒为rd公司产品；免疫球蛋 白试剂盒由四川迈克科技有限责任公司提供。1.2实验动物sd大鼠48只，雄性，体质量180200 g,由 河北医科大学实验动物中心提供。动物等级：清洁级。合格证 号:612168o1.3仪器日本奥林帕斯显微镜（型号bx51t-phd-j11）；莱 卡rm2135

11、切片机（德国leica） ； lg15-w高速微量离心机（北京医 用离心机厂）；bm- ii型病理组织包埋机（安徽电子科学研究所）； biocell 2010 酶标检测仪（奥地利 anthos lab tec instruments 公司）。1.4造模方法 实验前禁食24 h, 口由饮水，在乙醯麻醉下, 用直径2 nun的硅胶软管经肛门轻插至结肠8 cm处,推入含tnbs 20 mg 的30%乙醇溶液0. 5 ml,捏紧肛门平放10 min即可。3日后即为造模 成功1，2。1.5动物分组及给药方法将造模大鼠随机分为5组，各8 只。各组均于造模后第3日灌胃给药，模型组予0.9%氯化钠注射液； 罠

12、仙安肠方低、中、高剂量组分别予相应剂量(5. 0、10. 0、20. 0 g/kg)； 阳性药对照组予sasp 0. 50 g/kgo另取8只未造模大鼠作为正常对照 组，予0. 9%氯化钠注射液。均每日1次，共14 ho1.6观察指标及检测方法造模后第18日，各组大鼠均予2% 戊巴比妥麻醉，腹主动脉取血做生化检查。用免疫比浊法检测血清免 疫球蛋白(ig) a、igg、补体3 (c3)、补体4 (c4)o elisa法检测血 清瘤坏死因子-a (tnf- a )、白细胞介素-2仃1厂2)、白细胞介素-4(11厂4) 的变化。取出全结肠，纵向剪开，冲洗掉污物，测量结肠长度及最大宽度, 肉眼观察结肠

13、的损伤情况。黏膜损伤指数(cmdi)评分标准3:粘 连，0分:无;1分:轻度(结肠与其它组织剥离较易)；2分:重度。溃疡 形成及炎症，0分:无；1分:局部充血，无溃疡；2分：1处溃疡不伴充 血或肠壁增厚;3分:1处溃疡伴炎症;4分：$2处溃疡伴炎症;5分：22 处溃疡和(或)炎症&gt；l cm; 68分:溃疡和(或)炎症2 cm,病变范 围每增加1 cm,计分加1分。在病变最严重处剪取一块结肠，甲醛固定， 石蜡包埋,he染色，光镜下观察病理组织学变化。其余结肠称其质量， 与剪取的结肠之和为结肠质量。1.7统计学处理方法 各组检测结果用均数土标准差(x±s)表示,组间比较采用

14、t检验。用spss 11. 5软件进行统计学处理。2结果2.1对大鼠一般状态的影响 正常组大鼠反应灵活，毛色光 润，喜活动，主动觅食，大便呈小球状。其余5组大鼠造模后第2日 开始精神萎靡，懒于活动，被毛松散无泽，拱背，食量下降，拉稀便 或黏液血便，形态消瘦，体质量下降，粪隐血试验呈强阳性。罠仙安 肠方低、中、高剂量组及阳性对照组治疗57日后，稀便基本消失, 状态恢复接近正常，但体质量仍明显减轻；粪隐血试验虽呈阳性，但程 度明显减轻;腹泻、黏液便等症状也有所改善，渐为软便；食量渐增, 活动明显增多，精神状态好转。其中苣仙安肠方高、中剂量组疗效最2.2对大鼠组织病理形态学的影响2.2.1肉眼观察

15、正常对照组大鼠结肠黏膜光滑，纹理清晰, 未见充血、水肿。模型组肠管变狭小，肠壁增厚，黏膜可见多个溃疡, 溃疡旁黏膜充血、水肿明显。茂仙安肠方低、中、高剂量组及阳性对 照组损伤明显减轻，尤以罠仙安肠方高、屮剂量组明显，高剂量组结 肠溃疡面积显著缩小，水肿消失，肠腔未见粘连。 2. 2. 2各组cmdt 积分比较见表1。表1各组cmdi的积分(略)与正常对照组比较，p<001;与模型组比较，*p<0.01 ；与阳性对照组比较，#p<o. 01由表1可见，罠仙安肠方高、中、低剂量组cmdi积分明显下 降，与模型组比较差异均有统计学意义(p<0.

16、01)；茂仙安肠方高、 中剂量组cmdi积分与正常对照组比较差异无统计学意义(p>0. 05),与阳性对照组比较差异有统计学意义(p<0.01)o2.2.3光镜观察 模型组镜下可见中性粒细胞明显浸润，杯状 细胞轻度减少，黏膜组织可见肉芽肿,未见纤维化，偶见隐窝脓肿。英 仙安肠方低、中、高剂量组及阳性对照组均表现出明显的治疗作用， 罠仙安肠方高剂量组镜下溃疡面积较模型组显著缩小，炎性细胞浸润 减少，炎症多局限于黏膜层,未见肉芽组织。止常对照组黏膜上皮细胞 完整，腺体排列整齐，结构清晰。2.3各组igg、iga及c3、c4含量比较 见表2。表2各组igg、iga及c3、

17、c4含量比较(略)与模型组比较，*p&lt;005；与阳性对照组比较，#p&lt;0. 05;与正常对照组比较，ap&lt;o. 05由表2可见，罠仙安肠方低、中、高剂量组igg、iga含量均 明显降低,c3、c4水平升高，与模型组比较差异均有统计学意义(p&lt;0. 05)o模型组、罠仙安肠方低剂量组和阳性对照组与正常对 照组比较均有统计学意义(p<0. 05)；罠仙安肠方高、中剂量组igg、 iga及c3、c4含量与正常对照组比较差异均无统计学意义(p&gt;0. 05), 与阳性对照组比较差异有统计学意义(p&lt;0. 05)o2

18、. 4各组血清ti-2. ti-4及tnf- a含量比较见表3。表3各组血清il - 2、il -4及tnf-a含量比较(略)与正常对照组比较，*p&lt;0.01;与模型组比较，#p&lt;0. 05；与阳性对照组比较，ap&lt;0. 05由表3可见，罠仙安肠方低、中、高剂量组血清il-4含量升 高,il-2 . tnf-a含量降低，与模型组比较差异有统计学意义(p&lt;0. 05);罠仙安肠方高、中剂量组治疗后血清il-2、il-4及 tnf-a含量与正常组比较差异均无统计学意义(p&gt;0.05),与阳性 对照组比较差异均有统计学意义(p&a

19、mp;lt;0. 05)；模型组、阳性对照组 与正常对照组比较差异均有统计学意义(p<0. 01)。3讨论uc是一种以黏膜和黏膜下层炎性浸润为主，特发于结肠的非 特异性炎症性肠病。近年发病有增加的趋势，目前尚缺乏有效的治疗 方法，临床常予抗感染剂、皮质类固醇类、免疫抑制剂等对症治疗， 长期疗效不佳，副作用明显。uc属中医学泄泻、久痢、肠癖等范畴，为 本虚标实之证。治以益气健脾、清热利湿、化瘀解毒之法，屡获良效。 本实验采用tnbs+乙醇灌肠造成大鼠uc模型，在组织学变化上与人类 uc有一定的相似4。本研究结果显示，罠仙安肠方对tnbs诱导uc 模型大鼠有较好的治疗作用，主要表现为明显减轻

20、结肠溃疡，镜下溃疡 面积缩小，炎性细胞浸润显著减少,病变深度明显减轻。一般认为uc是在遗传物质基础上，由于抗原刺激和体内免疫 系统的激活,各种环境因素相互作用而引起的一种以肠道炎症为主要 表现的慢性疾病5。uc结肠黏膜浆细胞合成抗体异常，其固有膜中 igg、igm浆细胞异常增多,病损区可见免疫复合物或颗粒状沉积，从 uc患者的肠黏膜中纯化出一种特定的igg抗体，为uc的口身免疫发病 机制进一步提供了依据。本研究发现tnbs造模的大鼠，血清igg、iga 含量异常增高，补体c3、c4含量降低，经过罠仙安肠方治疗，大鼠血 清igg、iga含量明显降低，补体c3、c4含量升高，与模型组比较差异 有统

21、计学意义(p&lt；o. 05),提示抑制igg、iga合成，提高补体水平,可能是罠仙安肠方免疫调节作用的一个方面。tnf- ci是一种促炎症性蛋白，能诱导多种细胞增生、凋亡，激 活血管内皮细胞，继而表达多种细胞因子和黏附因子引发一系列的炎 性细胞浸润和炎症反应。tl-2是一种强而有力的中性粒细胞趋化因子 和活化因子，主要生物学作用是趋化并激活中性粒细胞，促进中性粒 细胞的溶酶体酶活性和吞噬作用，对嗜碱性粒细胞和t淋巴细胞也有 一定的趋化作用。这些生物学活性与炎症反应密切相关，故il-2及相 关的趋化因子在炎症反应屮起更直接的介导作用6oil-4主要由cd4 阳性t淋巴细胞th2亚群分

22、泌的，对th2的分化最为关键，属炎性抑 制因子与上述tnf-a、il-2等致炎因了相抗衡。肠道炎症的启动及其 慢性化在很大程度上可能与炎性因子与抑炎性因子的失衡有关7 9o我们观察到，uc大鼠表现为细胞因子tnf-a、il-2含量增高, il-4含量降低。罠仙安肠方各组可明显升高il-4含量，降低il-2、 tnf-a含量(p&lt;o. 05),高、中剂量组优于阳性对照组(p&lt;0. 05), 可以看出细胞因子变化与uc治疗效果密切相关。本研究结果显示，苣仙安肠方对大鼠uc模型有明显的治疗作 用，结合文献研究可以推测，免疫调节作用和消除细胞因子对结肠黏 膜的损伤作用是其主要机制之一。【参考文献】1 郑礼，高振强,王淑仙大鼠溃疡性结肠炎模型的实验 研究j中国药理学通报，199& 14(4) :3702 李林，王竹立,柯剑婷，等实验性溃疡性结肠炎动物模 型选择j 世界华人消化杂志,2001,9(5):584.3 王皓，欧阳钦,胡仁伟.三硝基苯磺酸结肠炎动物模型的 建立j 胃肠病学,2001,6(1):7-10.4 何禧晖，陈芝芸,严茂祥，等.人鼠溃疡性结肠炎模型的 实验研究j 中国中西医结合消化杂志，2004, 14(4)： 242.5 lin h,parmac