趋化因子-趋化因子研究进展

1、趋趋 化化 因因 子子 研研 究究 进进 展展北京大学医学部北京大学医学部韩韩 * 玲玲简简 介介目前，近目前，近5050种趋化因子得以发现，成为最大的细胞因子种趋化因子得以发现，成为最大的细胞因子亚家族亚家族; ; 趋化因子及其受体具有重要的生理意义和病理作用趋化因子及其受体具有重要的生理意义和病理作用, ,在在炎症、肿瘤、炎症、肿瘤、aidsaids等疾病中发挥重要作用，趋化因子相等疾病中发挥重要作用，趋化因子相关产品已经进入临床研究，成为新的生物治疗热点关产品已经进入临床研究，成为新的生物治疗热点; ; 趋化因子的理论和应用研究是目前生命研究的趋化因子的理论和应用研究是目前生命研究的热点

2、之一。热点之一。趋化因子研究的迅速发展趋化因子研究的迅速发展趋化因子研究的标志性成果趋化因子研究的标志性成果一、趋化因子一、趋化因子（一）概念：（一）概念：趋化因子趋化因子（chemokines, chemokines, chemochemoattractant cytoattractant cytokineskines ，ckck）是能使细胞发生是能使细胞发生趋化运动趋化运动的小分子细胞因子。的小分子细胞因子。趋化运动是指细趋化运动是指细胞胞向高浓度刺激物方向的定向向高浓度刺激物方向的定向运动。运动。c5ac5a和细菌和细菌代谢产物代谢产物细胞因子细胞因子（il-8)（二）命名（二）命名早期

3、：根据早期：根据ckck来源、靶细胞、结构特征来源、靶细胞、结构特征而命名。而命名。tarctarc：t thymus and hymus and a activation ctivation r regulated egulated c chemokine hemokine 胸腺和活化调节的趋化因子胸腺和活化调节的趋化因子stcp-1 stcp-1 / /mdcmdc: : s stimulated timulated t t cell cell c chemoattractant hemoattractant p protein-1 rotein-1 （活化活化t t细胞趋化蛋白细胞趋化蛋

4、白-1 -1 ） m macrophage-acrophage-d derived erived c chemokinehemokine （巨噬细胞来源的趋化因子）；巨噬细胞来源的趋化因子）； 19991999年，国际命名委员会根据年，国际命名委员会根据ckck的结构特征命名。的结构特征命名。绝大多数绝大多数ckck有有4 4个保守的半胱氨酸（个保守的半胱氨酸（cyscys），），根据前两个根据前两个cyscys的相对位置不的相对位置不同，可以分为同，可以分为cxccxc（ ） 、cccc（ ） 、c c（ ） 和和cxcx3 3c c（ ） 趋化因子。趋化因子。分别用分别用cxclncxcl

5、n、cclnccln、 xcln xcln和和cx3clncx3cln代表代表cxccxc、cccc、 c c 和和cx3ccx3c家族家族ckck ，l l为为ligandligand，迄今发现的迄今发现的ckck有有cxcl1-16cxcl1-16， ccl1-28 ccl1-28， xcl1 xcl1- -2 2和和cx3cl1cx3cl1。ccl17ccl17/ /tarctarc， ccl22ccl22/ /stcp-1stcp-1/ /mdcmdcckck基因的命名基因的命名: :scyn: small inducible cytokine gene scyn: small ind

6、ucible cytokine gene scyan:cc; scybn:cxc; scycn: c; scydn: cxscyan:cc; scybn:cxc; scycn: c; scydn: cx3 3c c。ckck受体的命名规则与此相似，用受体的命名规则与此相似，用r r即即receptorreceptor代替代替l l。目前发现的目前发现的ckck受体有受体有ccr1-11ccr1-11，cxcr1-6cxcr1-6，xcr1xcr1和和cx3cr1cx3cr1。 （三）趋化因子的分类（三）趋化因子的分类1

7、 1、根据蛋白质的一级结构进行分类：、根据蛋白质的一级结构进行分类： cxc cxc （ ）趋化因子；）趋化因子； cc cc （ ）趋化因子；）趋化因子； c c （ ）趋化因子；）趋化因子； cx cx3 3c c （ ）趋化因子。）趋化因子。c c为半胱氨酸为半胱氨酸, ,x x为任意氨基酸为任意氨基酸（1 1）cxccxc（）趋化因子趋化因子根据该家族根据该家族ckck第一个第一个cyscys前是否有前是否有elrelr（glutamic acid-glutamic acid-leucine-arginine,leucine-arginine,谷氨酸谷氨酸- -亮氨酸亮氨酸- -精氨酸

8、）结构，分为：精氨酸）结构，分为：elr cxc趋化因子趋化因子: : elrcxcelrcxcc cc c cxcl8/il-8 cxcl8/il-8 等，等， 趋化趋化neuneu，不能趋化不能趋化momo；促进血管的生成。促进血管的生成。非非elr cxc趋化因子趋化因子: : cxccxcc cc c cxcl12/sdf-1 cxcl12/sdf-1等，等， 趋化趋化lymphocytelymphocyte或或hpchpc；抑制血管的生成。抑制血管的生成。同源性：同源性： cxc家族家族ckck之间之间 ：25%-90%。染色体定位：染色体定位： cxcl1-11cxcl1-11：4

9、 4q21q21；cxcl12cxcl12：1010q11q11；cxcl13cxcl13：5q315q31cxc趋化因子的名称、染色体定位及受体趋化因子的名称、染色体定位及受体（2 2） cc cc （）趋化因子）趋化因子 分分 类：类：4 4cys cccys cc趋化因子趋化因子: :包括多数包括多数cc ckscc cks ccccc cc c 6 6cys cccys cc趋化因子趋化因子: : ccl15/ccl15/lkn-1lkn-1，ccl21/slc/6ckineccl21/slc/6ckine ccccc cc cc cc c 趋化谱：趋化谱：t t、b b、momo、b

10、asbas、eoseos、neuneu等。等。 同源性同源性：cccc成员之间：成员之间：25%-70%25%-70%； 定定 位：位：ccl1-16,18,23: 17q11-12; ccl1-16,18,23: 17q11-12; ccl17,22:16q13;ccl17,22:16q13; ccl19,21,25,27:9p13 ccl19,21,25,27:9p13cc趋化因子的名称、染色体定位及受体趋化因子的名称、染色体定位及受体cc趋化因子在趋化因子在1717号染色体上成基因簇形式存在号染色体上成基因簇形式存在（3 3）c c（ ）趋化因子）趋化因子结结 构：构：c cc c (2

11、 (2，4 4位位cys)cys) ltn1ltn1，2 2 (lymphotactin (lymphotactin，淋巴细胞趋化素淋巴细胞趋化素) )两个成员，两个成员， 趋化谱趋化谱：t t，bmcbmc定定 位位：1 1q23 q23 (4)cx(4)cx3 3c c （ ）趋化因子）趋化因子结结 构：构：cxxxccxxxcc cc c. fractalkine/neurotactin: fractalkine/neurotactin: 分形素分形素/ /神经神经 趋化素，唯一一个趋化素，唯一一个cxcx3 3c c成员，为成员，为膜结合型膜结合型 ckck。趋化谱：趋化谱：膜型膜型:

12、 :mo,t;mo,t; 重组的趋化因子功能区重组的趋化因子功能区: :neuneu。定定 位：位：1616q13q13，与与ccl17,22ccl17,22紧密连锁紧密连锁。 2、根据来源和功能分类：、根据来源和功能分类： （1 1）组成性）组成性/ /淋巴组织淋巴组织/ /自稳性趋化因子：自稳性趋化因子： 定定 义：义：胸腺、淋巴结、脾脏中组成性高表达的胸腺、淋巴结、脾脏中组成性高表达的ckck。 靶细胞：靶细胞：初始初始t t细胞、胸腺细胞、记忆细胞。细胞、胸腺细胞、记忆细胞。 功功 能：能：在淋巴细胞的发育、成熟、归巢和再循环过在淋巴细胞的发育、成熟、归巢和再循环过 程中发挥重要作用。

13、程中发挥重要作用。 皮肤、小肠、粘膜组织中也表达此类皮肤、小肠、粘膜组织中也表达此类ckscks，与组织特与组织特 异性淋巴细胞归巢有关。异性淋巴细胞归巢有关。自稳性趋化因子的组织表达自稳性趋化因子的组织表达 （2 2）诱导性表达趋化因子）诱导性表达趋化因子/ /炎性趋化因子炎性趋化因子： 定定 义：义：在在lpslps、il-1il-1、tnf-tnf- 等刺激下产生的等刺激下产生的ckck 。 靶细胞：靶细胞：效应细胞。效应细胞。 功能：功能：防御功能；反应过度时，有破坏作用。防御功能；反应过度时，有破坏作用。趋化因子的表达模式趋化因子的表达模式constitutiveinducibleb

14、ca-1normal trafficksdf-1hcc-1teckslcelcneoplasiadc-ck1mdclarcinfection inflammation immunitynap-2ip-10 il-8rantesmcpseotaxinsmip-1,ltflkgcp-2grostarc炎性趋化因子和自稳性趋化因子成员、受体及靶细胞炎性趋化因子和自稳性趋化因子成员、受体及靶细胞（3）其它具有趋化活性的细胞因子）其它具有趋化活性的细胞因子igf-1,fgf,hgfigf-1,fgf,hgf等细胞因子具有趋化活性，但它们的等细胞因子具有趋化活性，但它们的主要作用不是趋化作用，不列为主要作

15、用不是趋化作用，不列为ckscks。 1 1、ckscks分子量小，在分子量小，在8-128-12kdkd之间；之间；2 2、蛋白质一级结构上具有同源性，蛋白质一级结构上具有同源性，cxccxc与与cc cc 成员之成员之 间：间：20%-30%20%-30%；（四）趋化因子的共同结构特点（四）趋化因子的共同结构特点3 3、多数、多数ckscks含有含有4 4个保守的个保守的cyscys ，1 1，3 3位位cyscys、 2 2，4 4位位 cys cys形成功能必须的两对二硫键；形成功能必须的两对二硫键；4 4、ckscks有有2 2个个 螺旋，螺旋，3 3个个 折叠；折叠；cxclcxc

16、l12/12/sdf-1sdf-1的空间构型图（的空间构型图（nmrnmr）5 5、不同、不同ckscks具有相似的空间结构。具有相似的空间结构。趋化因子的结构、定位及组成趋化因子的结构、定位及组成二、趋化因子受体二、趋化因子受体趋化因子受体属于趋化因子受体属于7 7次跨膜的次跨膜的g g蛋白蛋白偶联受体超家族（偶联受体超家族（gpcrsgpcrs，g-protein coupled receptorsg-protein coupled receptors）1 1、7 7次跨膜，次跨膜，c c端位于胞内，有端位于胞内，有ser/thrser/thr位点，参位点，参 与信号转导；与信号转导；(一

17、一) 趋化因子受体的特点趋化因子受体的特点2 2、不同、不同ckrckr之间具有同源性；之间具有同源性；3 3、胞内区与、胞内区与g g蛋白偶联，蛋白偶联，g g蛋白由蛋白由组成；组成；4 4、 亚单位具有亚单位具有gtpgtp结合位点和结合位点和gtpgtp酶活性；酶活性；5 5、ckrckr未与未与ckck结合时，结合时，呈聚合状态，呈聚合状态， 与与gdpgdp结合；结合； 与与ckck结合后，结合后， 与与gtpgtp结合，结合，游离，活化下游效应物游离，活化下游效应物. .6 6、与、与ckrckr偶联的偶联的g g蛋白有多种，蛋白有多种，与趋化运动有关的与趋化运动有关的 g g蛋白

18、蛋白 亚单位多为亚单位多为ptxptx敏感的敏感的g g i i。（二）、趋化因子受体的分类（二）、趋化因子受体的分类1 1、根据结合、根据结合配体配体的不同，分为的不同，分为cxcrcxcr， ccr ccr， xcr, cx xcr, cx3 3crcr。 2 2、根据、根据特异性特异性不同，分为特异性受体、共享性受体、杂合性不同，分为特异性受体、共享性受体、杂合性 受体（受体（darcdarc，duffyduffy血型抗原，红细胞趋化因子受体）、血型抗原，红细胞趋化因子受体）、 孤儿受体、病毒受体等。孤儿受体、病毒受体等。（三）、趋化因子受体的表达（三）、趋化因子受体的表达1 1、ckr

19、ckr有其相对特异的表达谱：有其相对特异的表达谱： cxcr4 cxcr4： neu neu、momo; ; ccr3 ccr3: : eoseos、basbas； darc darc：rbcrbc趋化因子受体、配体及靶细胞趋化因子受体、配体及靶细胞2 2、ckrckr的表达具有时、空特异性：的表达具有时、空特异性：（1 1）在）在thth细胞的不同阶段，表达不同的细胞的不同阶段，表达不同的ckrckr： nanave th:ccr7, cxcr4;ve th:ccr7, cxcr4; th0: ccr7, ccr5, cxcr3 th0: ccr7, ccr5, cxcr3 th1: ccr

20、5, cxcr3; th2:ccr3,4,8, cxcr4 th1: ccr5, cxcr3; th2:ccr3,4,8, cxcr4（2 2）ckrckr在在dcdc迁移和功能成熟中具有不同的表达模式迁移和功能成熟中具有不同的表达模式: : 非成熟非成熟dcdc：ccr1ccr1，ccr2ccr2，ccr5ccr5， cxcr4cxcr4， 易于向炎症部位聚集，摄取抗原易于向炎症部位聚集，摄取抗原 负载抗原的成熟负载抗原的成熟dcdc：ccr4ccr4，ccr7ccr7，cxcr4cxcr4， 便于向淋巴组织迁移便于向淋巴组织迁移tlrtlr调控调控dcdc细胞细胞ckrckr的表达的表达

21、( (四四) )ckrckr的信号传导途径的信号传导途径il-8+il-8rgdpgtp. tpkplc2,3 pi-3k ip3 + dag ca2+ pkcpkbmapkckr的信号传导途径的信号传导途径三、趋化因子的基本功能三、趋化因子的基本功能（一）趋化作用；（一）趋化作用；（二）上调整合素的表达（二）上调整合素的表达, , 活化白细胞；活化白细胞；（三）促进细胞脱颗粒和生物活性物质释放（三）促进细胞脱颗粒和生物活性物质释放: : ccl2/mcp-1ccl2/mcp-1：basbas释放组织胺；释放组织胺； cxcl8/il-8 cxcl8/il-8：neuneu产生活性物质，呼吸爆

22、发；产生活性物质，呼吸爆发；（四）调节血管生成：（四）调节血管生成： elrcxc elrcxc 、ccl2ccl2促进血管生成；促进血管生成；cxcl10 cxcl10 、ccl21/slcccl21/slc抑制血管生成。抑制血管生成。趋化因子引起的细胞形态改变趋化因子引起的细胞形态改变趋化因子在白细胞迁移中的作用趋化因子在白细胞迁移中的作用cxcl8/il-8cxcl8/il-8的作用的作用（五）生长因子活性，促进细胞增殖（五）生长因子活性，促进细胞增殖四、趋化因子在免疫细胞四、趋化因子在免疫细胞发育、定位及免疫应答中的作用发育、定位及免疫应答中的作用（一）（一）cks促进免疫细胞发育、成

23、熟：促进免疫细胞发育、成熟：1、 cxcl12/sdf-1cxcl12/sdf-1和和cxcr4cxcr4促进促进b b细胞分化发育成熟；细胞分化发育成熟；2 2、ccl25/teckccl25/teck和和ccr9ccr9、 cxcl12/sdf-1 cxcl12/sdf-1和和cxcr4cxcr4、 ccl22/mdc ccl22/mdc和和ccr4ccr4等促进等促进t t细胞发育成熟；细胞发育成熟；3 3、ccl3ccl3，4/mip-14/mip-1 、 和和ccr1ccr1，ccr2ccr2，ccr5ccr5等促进等促进非成熟非成熟dc dc 向炎症部位聚集，摄取抗原，发生功能成熟

24、。向炎症部位聚集，摄取抗原，发生功能成熟。cxcl12/sdf-1cxcl12/sdf-1和和cxcr4cxcr4促进促进b b细胞分化发育成熟细胞分化发育成熟hpchpc表达表达cxcr4cxcr4，骨髓基质细胞产生骨髓基质细胞产生cxcl12/sdf-1cxcl12/sdf-1；cxcl12/sdf-1cxcl12/sdf-1趋化趋化hpchpc与基质细胞相互作用，与基质细胞相互作用， 促进促进hpchpc向向b b细胞发细胞发育，表达育，表达sigsig；成熟成熟b b细胞对细胞对cxcl12/sdf-1cxcl12/sdf-1反应性反应性 ，离开骨髓，进入血循环，离开骨髓，进入血循环c

25、cl25/teckccl25/teck和和ccr9ccr9、 cxcl12/sdf-1 cxcl12/sdf-1和和cxcr4cxcr4、ccl22/mdcccl22/mdc和和ccr4ccr4等促进等促进t t细胞发育成熟细胞发育成熟 ccl22/mdc ccl22/mdc和和ccr4ccr4促进促进dpdp与与tectec作用，作用，发生阴性选择或成熟为单阳性细胞进入外周发生阴性选择或成熟为单阳性细胞进入外周胸腺中表达的胸腺中表达的ckck和和ckrckrccl3ccl3，4/mip-14/mip-1 、 和和ccr1ccr1，ccr2ccr2，ccr5ccr5等促进等促进dcdc成熟成熟

26、( (二）二） ccl21/slcccl21/slc，ccl19/elcccl19/elc和和ccr7ccr7、cxcl13/bca-1/blccxcl13/bca-1/blc和和cxcr5 cxcr5 协助协助t t、b b、dcdc细胞在周围免疫器官中正确定位并相互作用细胞在周围免疫器官中正确定位并相互作用t t： ccr7; ccr7; dcdc：ccr7;ccr7;b b： ccr7ccr7 、cxcr5;cxcr5;tfhtfh：cxcr5cxcr5t t区区hevhev：slcslc、elc;elc;b b滤泡区滤泡区hevhev：bca;bca;t t与与dcdc在在t t区作用

27、，分区作用，分化效应细胞化效应细胞; ;tfhtfh与与b b在在b b区作用，协区作用，协助助abab产生和类别转换产生和类别转换（三）促进效应（三）促进效应t t细胞回到炎症和感染部位细胞回到炎症和感染部位1 1、tfhtfh：cxcr5cxcr5，进入滤泡区，辅助进入滤泡区，辅助b b细胞产生抗体细胞产生抗体 的类别转换；的类别转换；2 2、th1: ccr5, cxcr3th1: ccr5, cxcr3，进入病毒感染等炎症部位；进入病毒感染等炎症部位；3 3、th2:ccr3,4,8, cxcr4th2:ccr3,4,8, cxcr4，进入过敏反应部位。进入过敏反应部位。病原体决定免疫

28、应答病原体决定免疫应答（四）（四）cks促进天然免疫细胞和促进天然免疫细胞和活化的适应性免疫细胞相互作用活化的适应性免疫细胞相互作用1 1、ckscks使使th2th2活化与组织活化与组织esoeso聚集相联系；聚集相联系；2 2、ctlctl活化，产生活化，产生ckscks，momo、nknk、granulocytegranulocyte聚聚 集，扩大杀伤效应。集，扩大杀伤效应。趋化因子与过敏反应中嗜酸细胞聚集趋化因子与过敏反应中嗜酸细胞聚集th2th2细胞分细胞分泌的泌的il-4il-4、il-13il-13与与il-1il-1、tnftnf协同作用，协同作用，促进促进 eotaxins-

29、eotaxins-1,2,31,2,3、mcp-4mcp-4产生，产生，趋化趋化eoseos、basbas。ctlctl产生趋化因子产生趋化因子白细胞聚集病毒感染部位，放大免疫反应白细胞聚集病毒感染部位，放大免疫反应（五）（五）cks协助记忆、效应协助记忆、效应t、b细胞向特定组织归巢细胞向特定组织归巢cla+ t向皮肤归巢：向皮肤归巢： ccl27 / ctack、 ccr10， ccl17/tarc、ccr4 4 7hi t向小肠归巢：向小肠归巢： ccl25 / teck、ccr9iga asc向小肠粘膜归巢：向小肠粘膜归巢： ccl25 / teck、ccr9igg asc位于慢性炎症

30、部位：位于慢性炎症部位： cxcl9 / mig 、 cxcr3， cxcl12 / sdf-1 、 cxcr4t向粘膜归巢：向粘膜归巢：ccl28 / mec。趋化因子及其受体在免疫应答中的作用趋化因子及其受体在免疫应答中的作用五、趋化因子调节造血五、趋化因子调节造血（一）趋化造血前体细胞，调节骨髓造血功能：（一）趋化造血前体细胞，调节骨髓造血功能： mip-1mip-1 /ccl3 /ccl3、mcp-4/ccl13mcp-4/ccl13、teck/ccl25teck/ccl25等等2525种种ckscks抑制抑制 髓系造血；髓系造血； 人人mip-1mip-1 /ccl3/ccl3与与g

31、m-csfgm-csf和和m-csfm-csf协同刺激骨髓造血；协同刺激骨髓造血；（二）促进（二）促进b b前体细胞的发育：前体细胞的发育：sdf-1/cxcl12sdf-1/cxcl12；（三）促进（三）促进eoseos前体细胞发育成熟：前体细胞发育成熟：eotaxin/ccl11eotaxin/ccl11。 六、趋化因子的常用研究方法六、趋化因子的常用研究方法（一）趋化实验（一）趋化实验 ：1 1、体内实验、体内实验：皮下、腹腔、静脉注射，观察细胞皮下、腹腔、静脉注射，观察细胞 浸润情况；繁琐。浸润情况；繁琐。2 2、体外实验：、体外实验：最常用的方法是最常用的方法是boydenboyde

32、n小室法，也称微孔滤膜小室法，也称微孔滤膜 法。法。4848孔趋化小室，上层放靶细胞，下层放待检测因子，两孔趋化小室，上层放靶细胞，下层放待检测因子，两 层之间有聚炭膜隔开；简单易行。层之间有聚炭膜隔开；简单易行。 细胞类型细胞类型 膜孔径膜孔径 趋化时间趋化时间 neu: 3um neu: 3um 3030minmin； lymphocytes: lymphocytes: 5 5umum 120 120minmin； mo: 8um 90min mo: 8um 90min 反应结束后，洗掉非特异结合细胞，固定、染色，记数。反应结束后，洗掉非特异结合细胞，固定、染色，记数。记数方法：记数方法：

33、 高倍镜下每孔随机选高倍镜下每孔随机选5 5个视野，取平均值。个视野，取平均值。趋化活性表示方法：趋化活性表示方法： 通常以趋化指数（通常以趋化指数（chemotatic index, cichemotatic index, ci）表示表示。 ci ci指实验组细胞数与对照组细胞数（三个复孔指实验组细胞数与对照组细胞数（三个复孔 的平均值）的比值，的平均值）的比值，cici大于大于2 2有意义。有意义。boydenboyden小室示意图小室示意图a a、微孔滤膜法示意图微孔滤膜法示意图 b b、内皮细胞趋化结果内皮细胞趋化结果（二）钙流实验（二）钙流实验 多数多数ckck与受体结合后与受体结合

34、后, , 胞内胞内ca2+ ca2+ ；indo-1 amindo-1 am或或fura-2 amfura-2 am等是等是ca2+ca2+螯合剂螯合剂egtaegta的衍生物，的衍生物，可特异高亲和可特异高亲和ca2+ca2+；将靶细胞与荧光探针孵育；将靶细胞与荧光探针孵育；检测荧光强度变化，反映检测荧光强度变化，反映ckck活性。活性。 （三）功能实验（三）功能实验cxccxc cks:cks:弹性蛋白酶、葡萄糖醛酸酶释放检测、呼吸弹性蛋白酶、葡萄糖醛酸酶释放检测、呼吸 爆发实验；爆发实验；mip-1mip-1 ，：用骨髓造血干细胞集落形成实验；用骨髓造血干细胞集落形成实验；cc cks:

35、cc cks:组织胺释放。组织胺释放。七、新趋化因子七、新趋化因子cdnacdna的克隆技术的克隆技术 ( (一一) )早期早期ckscks：蛋白质到核酸；费时耗力：蛋白质到核酸；费时耗力, ,cxcl8/il-8cxcl8/il-8。 ( (二二) )新发现新发现ckscks：核酸到蛋白质；快速。：核酸到蛋白质；快速。1 1、ckscks产生细胞产生细胞cdnacdna的大规模测序和生物信息学分析的大规模测序和生物信息学分析 ckscks产生细胞产生细胞cdnacdna文库文库大规模随机测序大规模随机测序同源性比较同源性比较与与已知已知ckscks有同源性的克隆有同源性的克隆全长全长cdna

36、cdna克隆化克隆化表达表达活性筛活性筛选选鉴定鉴定ccl23/mpif-1:ccl23/mpif-1:动脉内皮细胞动脉内皮细胞cdnacdna文库大规模随机测序，发现其编文库大规模随机测序，发现其编码氨基酸与码氨基酸与mip-1mip-1有有51%51%的同源性，昆虫细胞表达蛋白具有趋化的同源性，昆虫细胞表达蛋白具有趋化t t、momo细胞的活性。细胞的活性。 2、染色体中免疫分子聚集区的大规模测序染色体中免疫分子聚集区的大规模测序 1717号染色体存在号染色体存在cc clustercc cluster，对对yacyac克隆测序、分析，克隆测序、分析，克隆了克隆了ccl18/mip-4,c

37、cl18/mip-4,与与mip-1mip-1有有49.549.5的同源性，趋的同源性，趋化化t t细胞。细胞。 3 3、差异显示技术克隆细胞因子、差异显示技术克隆细胞因子 同一细胞在不同条件下表达的免疫分子不同，利用同一细胞在不同条件下表达的免疫分子不同，利用dd-pcrdd-pcr、rdarda、sshssh等技术克隆新细胞因子。等技术克隆新细胞因子。例：本实验室克隆的例：本实验室克隆的cklf1:cklf1:il-10il-10抑制细胞因子产生，利用抑制细胞因子产生，利用sshssh技术克隆技术克隆u937u937细胞中被细胞中被il-10il-10抑制的抑制的cdnacdna，发现新的

38、细胞因子发现新的细胞因子cklf1cklf1（chemokine-like chemokine-like factor 1factor 1），cklf1cklf1具有趋化效应，促进骨髓细胞集落形成效应具有趋化效应，促进骨髓细胞集落形成效应和刺激骨骼肌细胞效应。和刺激骨骼肌细胞效应。 4 4、blastblast检索及检索及estest分析和拼接分析和拼接 例例1 1：从公共的：从公共的estest数据库发现数据库发现ccl26/ mip-4ccl26/ mip-4 , , 与与mip-1mip-1有有4444的同源性，趋化的同源性，趋化t t、momo。例例2 2：本室大鼠：本室大鼠cklf1

39、cklf1，2 2、小鼠小鼠cklf2cklf2，4 4及人及人cklf-rp1-cklf-rp1-8(cklf-related protein 1) 8(cklf-related protein 1) 的克隆化。的克隆化。八、八、 总总 结结（一）（一）cks概念、命名、分类、结构特点：概念、命名、分类、结构特点： 1、概念、概念：是能使细胞发生趋化运动的小分子细胞因子。是能使细胞发生趋化运动的小分子细胞因子。 趋化运动是指细胞向高浓度刺激物方向的定向运动。趋化运动是指细胞向高浓度刺激物方向的定向运动。2、命名：、命名： cks： cxclncxcln、cclnccln、 xcln xcln

40、、cx3clncx3cln ck ck基因：基因：scyan:cc; scybn:cxc; scycn:scyan:cc; scybn:cxc; scycn: c; scydn: cx c; scydn: cx3 3c c。 ck ck受体：受体：cxcr1-6cxcr1-6， ccr1-11ccr1-11，xcr1xcr1和和cx3cr1cx3cr1。3 3、分类：、分类：（1 1） cxc cxc （ ）：）：elrelr和非和非elrelr；cc cc （ ）：）：4 4c c和和6 6c c； c c （ ）；）；cxcx3 3c c （ ）。）。 （2 2）组成性）组成性/ /淋巴组

41、织淋巴组织/ /自稳性趋化因子；自稳性趋化因子； 诱导性表达诱导性表达/ /炎性趋化因子。炎性趋化因子。4 4、 ckscks的结构特点：的结构特点：（1 1）ckscks分子量小，在分子量小，在8-128-12kdkd之间；之间；（2 2）蛋白质一级结构上具有同源性；蛋白质一级结构上具有同源性；（3 3）多数）多数ckscks含有含有4 4个保守的个保守的cyscys，1 1，3 3位位cyscys、 2 2，4 4 位位cyscys形成功能必须的两对二硫键；形成功能必须的两对二硫键；（4 4）ckscks有有2 2个个 螺旋，螺旋，3 3个个 折叠；折叠；（5 5）不同）不同ckscks具

42、有相似的空间结构。具有相似的空间结构。（二）（二）ckr结构特点、结构特点、分类、表达及信号转导分类、表达及信号转导1 1、结构特点：、结构特点： （1 1）7 7次跨膜，次跨膜，c c端位于胞内，有端位于胞内，有ser/thrser/thr位点，参与信位点，参与信 号转导；号转导； （2 2）不同）不同ckrckr之间具有同源性；之间具有同源性； （3 3）胞内区与）胞内区与g g蛋白偶联，蛋白偶联，g g蛋白由蛋白由组成；组成； （4 4） 亚单位具有亚单位具有gtpgtp结合位点和结合位点和gtpgtp酶活性；酶活性； （5 5）ckrckr未与配体结合时，未与配体结合时，呈聚合状态，呈聚合状态， 与与gdpgdp结结 合；与合；与ckck结合后，结合后， 与与gtpgtp结合，结合，游离，活化下游离，活化下 游效应物游效应物. . （6 6）与与ckrckr偶联的偶联的g g蛋白有多种，蛋白有多种，与趋化运动有关的与