实验五酶促反应动力学实验

1、实验五酶促反应动力学实验【实验目的】1、了解温度对酶活性及酶促反应速度的彩响，加深对酶特性的认识。2、了解离子对酶活性及酶促反应速度的影响，加深对酶特性的认识。【实验原理】1、每种酶都冇其最适温度，高于或低于此温度酶的活性都降低。一般而言， 若酶处于过高的温度环境中，会使酶活性永久丧失；而若处于极低温度的 环境屮只会使酶活性受到抑制，一旦温度适宜，酶又会全部或部分的恢复 其活性。2、酶的活性常常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为酶的 激活剂；冇些物质能使酶的活性降低，称为酶的抑制剂。c是唾液淀粉酶 的激活剂。其它的阴离子，如br no3和i对该酶也有激活作用，但较 微弱。而c产对

2、唾液淀粉酶具有抑制作用。激活剂和抑制剂影响酶活性的 剂量是很少的，并且常具有特异性。就木实验，低浓度c可以增加酶活性，高浓度的c或者低浓度的cu2+则 会抑制酶活性，同时低浓度的naj so?-等对酶活性没冇影响。激活剂的 作用机制是多种多样的，可能是作为辅酶或辅基的一个组成部分，也可以 直接作为酶活性中心的构成部分。【实验用品】1、仪器和器材：冰箱、恒温水浴锅、紫外分光光度计、试管和试管架、移液枪及枪头、胶头滴管、烧杯2、试剂:dph6.8的缓冲液:量取15.45ml的0.2m磷酸氢二钠和4.55ml的柠檬酸混合摇匀即可。2) 0.5%淀粉的0.5%氯化钠溶液：0.5g可溶性淀粉和0.5g氯

3、化钠,溶于100ml蒸憾水(需加热)。3) 碘液4) 1 m hci 溶液5) 1 m naoh 溶液6) 稀释100倍的唾液7) 冰水浴8) 1%naci 溶液9) 0.1%cuso4 溶液10) 0.1%淀粉液【实验内容】（-）温度对酶活性的影响1. 制管和预温：由于木实验对恒温反应要求较高，故每个温度梯度使用两支试管，分别标记 为a管和b管，同时欲温底物与酶。a管加入ph6. 8的缓冲液和0. 5%淀粉液; b管使用移液枪加入稀释100倍的唾液，相对应的两支试管置于设定的温度 下预温5mino取12支洁净试管，参照下表加入试剂:管号1 (0°c)2（室温）3(37°c

4、)4(50°c)5(70°c)6（室温）aph6.8 的 缓冲液(ml)222222含 nacl 的 0.5% 淀粉液(ml)22222用2ml 的蒸馅 水代替b稀释100 倍的唾液（ml）111111*6号管为对照组（比色时作为0号管），置于室温，且淀粉液用蒸憾水代替2. 混合a、b管：将1号a管试剂迅速加入温度对应的b管中（为了最大限度保证酶的量），此 时为计时的起点（使用秒表），摇匀后放回对应温度继续水浴。注意：转移a 管试剂前需将其摇匀。3时间控制然后每隔lmin或2min （时间自定）按上步操作依次把2、3、4、5、6号的a、 b管混合，严格控制好时间。4. 中止

5、反应准确反应13min,向1号管加入2滴im hc1溶液，立即混匀，中止反应，按 上一步的顺序和吋间间隔依次对各管进行操作，并移至试管架。后再各用2 滴im naoii溶液中和每管。5. 显色在每管中各加入加1 0. 03175g/l碘液并混匀，观察现象。6. 比色若不同温度梯度间现象差别不明显，则进行比色，通过光密度值来比较。（二）离子对酶活性的影响取3支洁净的试管，编号后按下表操作:管号1231%naci(ml)10.1%cuso4(ml)1蒸憾水（ml）10.1%淀粉液（ml）333100倍稀释唾液（ml）11137°c恒温水浴15min,取出滴加碘液碘液222结果【结果处理】记录现象（或比较吸光度值），做岀合理分析。【注意事项】严格注意时间的控制及各物质的添加量。【思考题】1