~131I核素标记B7-H3单抗靶向治疗肾透明细胞癌试验研究

1、(131)I 核素标记 B7-H3 单抗靶向治疗肾透明细胞癌实验研究肾癌( renal cell carcinoma,RCC )是泌尿系统常见肿瘤 , 其最常见的病理 类型为肾透明细胞癌( clear cell renal cell carcinoma,cc RCC), 其所占肾癌比例超过 80%。肾根治性切除手术是早期肾癌的主要治疗方式, 而肾癌术后及转移性肾癌缺乏有效的治疗手段。针对肿瘤新生血管的靶向治疗被认为是最有可能成为晚期肾癌的有效治疗 手段, 并且针对肿瘤血管开展靶向治疗已成为肿瘤生物治疗的热点,其药物从作用机制上主要分为两类：抗血管内皮生长因子(VEGF /血管内皮生长因子受体

2、(VEGFR和抑制哺乳动物类雷帕霉素靶蛋白(mTOR途径。目前靶向治疗的临 床治疗效果并不显著 , 加上其独特的不良反应 , 限制了其在临床的进一步应用。B7-H3在肿瘤的进展尤其是在肿瘤新生血管生成方面是近年来研究的热点,B7-H3可作为肿瘤相关性抗原发挥重要作用，是肿瘤靶向治疗的一个潜在靶 点。本研究首先从临床收集肾透明细胞癌病例，检测B7-H3在肾癌中的表达，结合 临床资料,观察B7-H3在肾癌的价值及临床意义。然后我们采用核素¹³¹l进行B7-H3鼠抗人单克隆抗体4H7标记,¹³¹I-4H7的标

3、记率,放化纯达到实验要求,且在肾癌荷瘤鼠移植 瘤内具有较高的摄取率和较长的滞留时间 , 具有良好的靶向性 , 进而利用 ¹³¹I-4H7 对荷肾癌移植瘤裸鼠进行治疗 , 观察 ¹³¹I-4H7 对肾癌的治疗效果 , 并初步探讨其可能存在的机制及应用 价值。本研究分三个部分：第一部分B7-H3在肾透明细胞癌中的表达及临床意义 目的：探讨B7-H3在肾透明细胞癌患者血清水平及其临床意义,及B7-H3在肾透明 细胞癌组织中表达的临床意义方法: 收集临床上确诊为肾透明细胞癌病例资料 126 例, 对其临床资料进

4、行 分析, 并留取患者术前血清 , 及术后肾肿瘤组织标本。运用酶联免疫吸附法( enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA )法检测肾透明细胞癌患者及健 康体检者对照组血清可溶性 B7-H3, 结合患者临床资料评估其对肾透明细胞癌患 者的临床意义。运用免疫组织化学方法 (immunohistochemistry,IHC )检测肾透明细胞癌组 织中B7-H3的表达,尤其是在血管上皮的表达,结合患者临床资料,观察B7-H3表 达阳性的临床意义。结果：肾透明细胞癌患者血清中存在可溶性 B7-H3,与健康体 检者相比 , 其水平显著增高。肾透明细胞癌患者游离B7-H

5、3高水平与肾癌临床分期、淋巴结有无转移及远 处脏器有无转移有关。B7-H3在肾透明细胞癌组织中阳性表达高于在正常肾脏组 织中的表达。126例肾透明细胞癌标本中 , 有 102例(80.95%)肾透明细胞癌患者肿瘤组织血管中可见B7-H3阳性表达。结论：肾透明细胞患者血清可溶性B7-H3水平显 著上调 , 与疾病进展相关。肾透明细胞癌组织中高表达B7-H3,尤其是在肿瘤血管中呈阳性表达，提示 B7-H3可能在肿瘤血管生成方面发挥重要作用。第二部分B7-H3单克隆抗体4H7的¹³¹l标记及体内生物分布研究目的：研究鼠抗人B7-H3单克隆抗 体4H7的&

6、lt;sup>131</sup>l标记方法,观察标记抗体药代动力学特点及其在肾透 明细胞癌皮下移植瘤模型中生物学分布与显像研究。方法：采用氯胺T法进行标记，测定¹³¹I-4H7标记率、放化纯和 稳定性。对 ¹³¹l-4H7 体内分布及药物代谢动力学进行研究观察 ¹³¹I-4H7 在荷肾透明细胞癌（ 786-0 细胞）裸鼠皮下移植 瘤模型中的生物学分布 , 并进行显像研究。 结果 :¹³¹I-4H

7、7 标记率为 61.64%, 放化纯为 98.4%。¹³¹l-4H7在ICR小鼠体内代谢过程符合一级血药动力学二室模 型,t1/2 a为27.94min,t1/2 B为1634.74min,在体内主要通过肝和肾代谢。 ¹³¹I-4H7 在荷瘤小鼠实验研究中显示 ¹³¹I-4H7 在肿瘤 组织中停留时间较长，且皮下移植瘤摄取率较高，在24h达最高，为3.32%ID/g。荷瘤鼠体内丫显像研究显示,¹³¹I-4H7组在

8、各个时间点放射浓 聚高于Na¹³¹l组。结论:¹³¹I-4H7易于制备，放化纯度 高,标记物的稳定性好 ,达到实验要求。¹³¹I-4H7 在肾癌荷瘤鼠中具有较高的摄取率和较长的滞留时 间,具有良好的靶向性 ,对肾癌放免显像和治疗有潜在的应用前景。第三部分 ¹³¹I标记B7-H3单克隆抗体在肾透明细胞癌裸鼠移植瘤治疗实验研 究目的：观察¹³¹I-4H7在肾透明细胞癌裸鼠

9、移植瘤中的治疗作用， 并探讨其可能存在的机制及应用价值。方法：在荷肾透明细胞癌786-0细胞裸鼠移植瘤直径达8mm寸，将裸鼠模型分 为¹³¹I-4H7 组、¹³¹l-m Ig G 组、¹³¹l 组 及生理盐水组，各组分别注射250卩Ci/100卩l的¹³¹l-4H7、 ¹³¹I-m Ig G 、 Na¹³¹I 或等体积生理

10、盐水 , 通过肿瘤的 生长曲线进行传统药效学分析 , 及在第 0、 7、 14、 21 天分别注射 18氟-精氨酸- 甘氨酸-天冬氨酸（RGD肽（18F-RGD ,行小动物正电子发射计算机断层显像positron emission tomography-computed tomography,PET-CT ）实时监测肿 瘤体积变化及观察移植瘤内组织放射性摄取率变化。 结果 :¹³¹I-4H7 组肿瘤生长明显缓慢 ,治疗21天后,肿瘤体积明显小于 ¹³¹I 及生理 盐水注射组 , 抑瘤率达 48.81%,

11、 差异具有统计学意义( P&lt;0.001 )。¹³¹I-m Ig G 组在 21 天时的抑瘤率为22.41%,<sup>131v/sup>l-4H7 抑瘤效果优于 ¹³¹l-m Ig G组,差异具 有统计学意义(P&lt;0.05 )。小动物PET-CT检查提示，在第7天、14天及21 天,¹³¹I-4H7组肿瘤组织的18F-RGD摄取率明显降低，与生理盐水组、 ¹³¹I组及¹³¹I-m Ig G 组相比差异具有统计学意义(P&lt;0.001 )。结论:<sup>131</sup