水质检测操作过程(最新修订版)

1、水产养殖与水域生态实验室实验方法- 水化学AAE项目分析时间顺序实验室观测指标（按时间顺序） ：1 氨氮2 磷酸盐3 硝酸盐4 亚硝酸盐5 高锰酸盐指数6 生化耗氧量7 悬浮物8 总氮、总磷9 总硬度10 溶氧11 硅酸盐另附： 12 磷含量测定现场测定水样的温度，透明度。测定过程：1 透明度 塞氏盘法参考文献：魏复盛 . 水和废水监测分析方法 ( 第四版 )M. 北京 : 中国环境科学出版社 ,2002.101.A. 方法原理透明度反映水体澄清程度。洁净的水是透明的，当水中存在悬浮物和胶体物质时透明度降低。地下水的透明度通常较高，但由于供水和环境条件不同，透明度可能不断变化。与浊度相反，水中

2、悬浮物越多透明度越低。利用塞氏盘（Scheii disc）法测定透明度的定义是：将一个黑白圆盘沉入水中，刚刚观察不到该圆盘的深度即为水体的透明度（Scheiidepth）。B. 仪器透明度盘（塞氏盘）：直径为 200mm 的圆板（通常用较厚的白铁片剪成） ，圆板的上面从中心平分为四部分，以黑漆和白漆相间涂布。圆板正中心开小孔，下面加1 铅锤，上面系小绳，绳上每10cm 处用有色丝线或漆做深度标记。C. 步骤1水产养殖与水域生态实验室实验方法- 水化学在背光处将透明度盘平放入水中，逐渐下沉至恰恰不能看见盘面的白色时，测量盘面所在深度，即得透明度（ cm）。注意：（ 1）背光读取透明度数值，需反复

3、观察3 次，取平均值。（ 2）透明度盘长期使用后盘面白漆颜色会变黄，必须重新涂漆。实验室内分析项目（按分析时间顺序排列）1 氨氮 纳氏试剂法A. 方法原理氨氮（ NH 3-N）包括游离态氨（ NH 3）或铵盐（ NH4+），两者在水中的比例取决于水温+和 pH。当 pH 高时， NH 3 的比例较高；反之NH 4 的比例较高。水温对NH 3-N 组成的影响与 pH 相反。碘化汞和碘化钾 （KI ）的碱性溶液与 NH 3-N 反应生成淡红棕色胶态化合物，此颜色在较宽的波长内（通常测量用波长在410425nm）具有强烈吸收。方法精密度和准确度：三个实验室分析含1.141.16mg/L NH 3-N

4、 的加标水样，单个实验室的相对标准偏差不超过9.5%；加标回收率范围为95%104%。四个实验室分析含1.813.06mg/L 氨氮的加标水样，单个实验室的相对标准偏差不超过4.4%；加标回收率范围为 94%96%。B. 仪器和试剂 722 分光光度计（波长 460 nm -760 nm）无氨水：每升蒸馏水中加0.1ml H 2SO4，在玻璃蒸馏器中蒸馏，弃去50ml 初馏液，接取其余馏出液于具塞磨口玻璃瓶中，密塞保存。注：无氨水不能长期保存。纳氏试剂：称取 20g KI ，溶于约 100ml 水中，边搅拌边分次少量加入二氯化汞（HgCl 2）结晶粉末（约 10g），至出现不易溶解朱红色沉淀。

5、另外称取 60g 氢氧化钾（ KOH ），溶于水并稀释至250ml，充分冷却至室温后，将上述氯化汞和碘化钾（ KI ）溶液在搅拌状态下，徐徐注入KOH 溶液中，用水稀释至400ml，混匀。静置过夜。2水产养殖与水域生态实验室实验方法- 水化学将上清液（纳氏试剂）移入聚乙烯瓶中，密塞保存。酒石酸钾钠（ KNaC 4H4O6 ·4H2O）溶液：称取酒石酸钾钠50g，溶于 100ml 水中，加热煮沸以去除氨，冷却后定容至100ml 。铵标准贮备溶液：称取3.819g 在 100下干燥过的优级纯氯化铵（NH4Cl），溶于水中，移入 1000ml 容量瓶中，定容。此溶液每毫升含1.00mg N

6、H3-N。铵标准使用溶液： 移取 5.00ml 铵标准贮备液到500ml 容量瓶中，定容。此溶液每毫升含0.010mg NH3-N 。C. 测定步骤（ 1）NH 3-N 标准曲线移取 0、 0.50、1.00、3.00、5.00、7.00 和 10.00ml 铵标准使用液于50ml 比色管中，加无氨水定容至标线。向比色管中加入 1.0ml 酒石酸钾钠溶液，混匀。加入 1.5ml 纳氏试剂，混匀。放置 10min 后，在波长 420nm 处，用光程 20mm 比色皿，以无氨水为参比，测量吸光度。根据吸光度（ x）和 NH 3-N 含量（y：mg/L ）绘制标准曲线， 建立回归方程： y=ax+b

7、，其中 a、b 为常数。注：（ 1）比色皿使用前需要进行空白校正，样品皿吸光度空白值 =样品皿盛无氨水时的吸光度 -参比皿盛无氨水时的吸光度。测量时以吸光度最低的比色皿做参比皿，以吸光度较高的比色皿做样品皿，样品吸光度=样品皿吸光度 -参比皿吸光度 -样品皿吸光度空白值。（ 2）水样 NH 3-N 浓度受空气中 NH 3 影响很大，实验室内不能存放氨水；另外，由于水样 NH 3-N 浓度测定结果受环境影响较大，每次测定都应做标准曲线。（ 2）水样测定将水样摇匀，经0.45 m 滤膜过滤（过滤前先用水样润洗过滤装置，滤膜用前用无氨水浸泡）后，取 50ml 水样于 50ml 比色管（用无氨水洗涤并

8、避免空气中 NH 3 溶入）定容至标线，加 1.0 ml 酒石酸钾钠溶液， 加入 1.5ml 纳氏试剂，放置 10min 后，在波长 420nm 处，用光程 20 mm 比色皿，以无氨水为参比，测量吸光度（步骤同标准曲线）（ 3）计算将水样吸光值（ A ）代入标准曲线方程y=ax+b 计算出水样的 NH 3 -N 浓度。NH 3-N（N： mg/L） =aA+b3水产养殖与水域生态实验室实验方法- 水化学2 磷酸盐磷酸盐的测定钼锑抗分光光度法方法原理在酸性条件下，正磷酸盐与钼酸铵，酒石酸锑氧钾反应，生成磷钼杂多酸，被还原剂抗坏血酸还原，则变成蓝色络合物，通常称磷钼蓝。仪器和化学试剂1. 分光光

9、度计2. （1+1）硫酸3. 10%抗坏血酸溶液：溶解 13g 钼酸铵（ NH4 ）6MoO24·4H2O）于 100ml 水中。溶解 0.35g 酒石酸锑氧钾（ K（ SbO）C4H4O6·1/2H2O）于 100ml 水中。在不断搅拌下，将钼酸铵溶液徐徐加到300ml（ 1+1）硫酸中，加酒石酸锑氧钾溶液并且混合均匀。贮存在棕色玻璃瓶中约4°C 保存。至少稳定两个月。4. 浊度 -色度补偿液：混合两份体积的（ 1+1）硫酸和一份体积的 10%抗坏血酸溶液。此溶液当天配制。5. 磷酸盐贮备液溶液：将优级纯磷酸二氢钾（ KH2PO4）于 110°C 干燥

10、 2h，在干燥器中放冷。称取 0.2197g 溶于水，移入 1000ml 容量瓶中。加（ 1+1）硫酸 5ml，用水稀释至标线。此溶液每毫升含 50.0ug 磷（以 P 计）。6. 磷酸盐标准溶液：吸取 10.00ml 磷酸盐贮备液于 250ml 容量瓶中，用水稀释至标线。此溶液每毫升含 2.00ug 磷。临用时现配。C步骤1. 校准曲线的绘制取数支 50ml 具赛比色管， 分别加入磷酸盐标准使用液0，0.50，1.00，3.00，5.00，10.0，15.0ml，加水至 50ml。显色：向比色管中加入1ml 10%抗坏血酸溶液，混匀。 30s 后加 2ml 钼酸盐溶液充分混匀，放置 15mi

11、n。测量：用 10mm 或 30mm 比色皿，于 700nm 波长处，以零浓度溶液为参比，测量吸光度。2样品测定：分取适量经滤膜过滤或消解的水样（使含磷量不超过30ug）加入 50ml 比色管中，用水稀释至标线。以下按绘制校准曲线的步骤进行显色和测量。减去空白实验的吸光度，并从4水产养殖与水域生态实验室实验方法- 水化学校准曲线上查出含磷量。计算磷酸盐（ P，mg/L ） =m/V式中 m由校准曲线查得的磷量（ug）；V 水样体积（ ml）。D注意事项1. 如试样中色度影响测量吸光度，需做补偿校正。在50ml 比色管中，分取与样品测定相同量的水样，定容后加入3ml 浊度补偿液，测量吸光度，然后

12、从水样的吸光度中减去校正吸光度。2. 室温低于 13°C 时，可在 20-30°C 水浴中显色 15min。3. 操作所用的玻璃器皿，可用（ 1+5）盐酸浸泡 2h，或用不含磷酸盐的洗涤剂刷洗。4. 比色皿用后应以稀硝酸或铬酸洗液浸泡片刻，以除去吸附的钼蓝有色物。3 硝酸盐铜镉柱还原法A. 方法原理当水样通过一个镀铜的镉屑柱时，海水中的硝酸盐定量地被还原成亚硝酸盐。生成的亚硝酸盐和对氨基苯磺酰胺重氮化并与 N（ 1萘基）乙二胺偶联而形成一种深色能用分光光度法测量的偶氮染料。用该法测定硝酸盐时必须校正样品中的亚硝酸盐含量。B. 仪器和化学试剂 722 分光光度计 50ml 具

13、塞比色管硝酸盐还原柱： 镉-铜屑：将纯金属镉锉成细屑，镉屑应能通过 2mm 筛孔而不通过 0.5mm筛孔。将约 100g 锉屑（足够两个还原柱用）加入500ml 2% （重量 /体积）的硫酸铜（ CuSO4·5H2O ）溶液，搅拌至溶液的蓝色消失。将一小团细铜丝（旋屑）置于还原柱底部，将稀氯化铵溶液注入还原柱。注入浆糊状镉 -铜屑并缓慢地装填至柱高约 30 厘米。装柱时镉 -铜屑应一直浸泡在稀氯化铵溶液中，不应干涸。装柱后在柱的顶端塞一小团细铜丝。用稀氯化铵溶液充分冲洗还原柱并轻敲柱壁来调节流速， 正常流速应 100ml/8-12min，若流速低于该值则需重新装柱。注：镉 -铜屑使用

14、一段时间后需活化：从柱中取出镉-铜屑，用 5%（体积 /体积）盐酸清洗，5水产养殖与水域生态实验室实验方法- 水化学然后用蒸馏水冲洗直至倾出液 pH>5 。按上述方法用硫酸铜将镉屑活化，装柱。浓氯化铵溶液：将 125g 分析纯氯化铵溶于 500ml 蒸馏水中。此溶液贮存在玻璃或塑料瓶中。稀氯化铵溶液：用蒸馏水将50ml 浓氯化铵溶液稀释至2000ml。此溶液贮存在玻璃或塑料瓶中。显色剂：在 500ml 烧杯中加入 250ml 水和 50ml 磷酸，加入 20.0g 对 -氨基苯磺酰胺，将 1.00g N-（1-萘基） -乙二胺二盐酸盐（ C10H7NHC2H4NH2· 2HCl

15、 ）溶于上述溶液中，转移至 500ml 容量瓶中，用水稀释至标线，混匀。此溶液贮于棕色瓶中，在25下保存，至少可稳定一个月。注意：显色剂有毒，避免与皮肤接触或摄入体内。硝酸盐标准溶液：准确称取在 105110烘 4h 后的 KNO30.7218g，加水溶解后稀释至1000ml（贮备液：氮浓度 100g/ml）。取 10ml 贮备液，准确稀释至 100ml（使用液：氮浓度 10g/ml）。 50ml 量筒等玻璃仪器。C. 步骤（1）标准曲线的绘制：向 6 个 50ml 具塞比色管内分别加入0、 0.25、 0.50、1.00、1.50、2.00ml 硝酸盐标准使用液，加水至标线，混匀（硝酸盐标准

16、溶液系列的氮浓度分别为0、0.050、0.100、0.200、0.300、0.400mg/L）。分别向每个比色管中加入1.0ml 浓氯化铵溶液，摇匀。将比色管内的溶液加入还原柱中，先加入约5ml，使其通过还原柱，然后将剩余的溶液加入柱中并用空比色管收集还原柱流出的液体，将最初收集的约10ml 液体弃去，再收集25ml。将还原柱内多余液体排放尽后再加下一个样品。注意：过还原柱时液面不能低于铜丝，且测定的空白和标准样品应用同一个还原柱，过柱流速应一致。在收集的经过还原柱的溶液中分别加入0.5ml 显色剂，密塞，混匀。静置20min 后，在2h 内以水为参比，测量吸光度（波长 543nm，比色皿光程

17、 10mm），绘制校准曲线： y=ax+b，其中 a、b 为常数。注：测定前先对比色皿进行校正。（ 2）水样测定：将水样摇匀后经0.45 m 滤膜过滤（滤器使用前先用水样润洗一遍），取 50ml 过滤水样于6水产养殖与水域生态实验室实验方法- 水化学50ml 比色管中（水样中硝酸盐含量较高，则进行适度稀释），每个比色管中分别加1.0ml浓氯化铵溶液，摇匀。过还原柱，测定吸光度。（ 3）计算将水样的吸光值代入标准曲线方程，求出总亚硝酸盐氮含量，用总亚硝酸盐含量减去水样中的亚硝酸盐氮含量即得硝酸盐氮含量。计算方法如下：（ NO3-N+ NO2-N ）（ N：mg/L）=aA+bNO3-N （ N：

18、 mg/L）=（ NO3-N+ NO2-N ） - NO2-N4 亚硝酸盐 N（ 1萘基）乙二胺光度法A. 方法原理在磷酸介质中（ pH=1.8±0.3），亚硝酸盐与对氨基苯磺酰胺反应生成重氮盐，再与N（ 1萘基）乙二胺偶联生成红色染料。在540nm 波长处有最大吸收。方法的精密度和准确度： 三个实验室分析含 0.02570.0816 mg/L 亚硝酸盐氮加标水样，单个实验室的相对标准偏差不超过 9.3%；加标回收率为 90%114%。五个实验室分析含 0.0830.18mg/L 亚硝酸盐氮加标水样， 单个实验室的相对标准偏差不超过 2.8%；加标回收率为 96%102%。B. 仪器

19、和化学试剂 722 分光光度计去亚硝酸盐水： （ 1）在蒸馏水中加入少许高锰酸钾晶体（呈红色） ，再加氢氧化钡（或氢氧化钙）使呈碱性。在玻璃蒸馏器内蒸馏，弃去 50ml 初蒸液，收集中间约 70%不含锰的馏出液。或（ 2）在每升蒸馏水中加 1ml 浓硫酸和 0.2ml 硫酸锰溶液（每 100ml 水中含36.4gMnSO4·H2O），加入 13ml0.04%高锰酸钾溶液至呈红色，重蒸馏。磷酸(1.70g/ml)显色剂：在 500ml 烧杯中加入 250ml 水和 50ml 磷酸，加入 20.0g 对-氨基苯磺酰胺，将1.00g N-（1-萘基） -乙二胺二盐酸盐（ C10H7NHC

20、2H4NH 2·2HCl ）溶于上述溶液中，转移至500ml 容量瓶中，用水稀释至标线，混匀。此溶液贮于棕色瓶中，在25下保存 ，至少可稳定一个月。注意：显色剂有毒，避免与皮肤接触或摄入体内。7水产养殖与水域生态实验室实验方法- 水化学高锰酸钾标准溶液 （1/5KMnO 4）=0.050mol/L：溶解 1.6g 高锰酸钾于 1200ml 水中，煮沸0.51h，使体积减少到 1000ml 左右，放置过夜。用 G-3 号玻璃砂芯滤器过滤后，滤液贮存于棕色试剂瓶中避光保存，并进行标定。草酸钠标准溶液（ 1/2Na2C2O4） =0.0500mol/L：溶解经 105烘干 2h 的优级纯无

21、水草酸钠 3.350g 于 750ml 水中，移入 1000ml 容量瓶定容。亚硝酸盐氮标准贮备液： 称取 1.232g 亚硝酸钠（NaNO2），溶于 150ml 水中，转移至 1000ml 容量瓶中，定容至标线（贮备液） 。每毫升贮备液约含 0.25mg 亚硝酸盐氮。贮备液亚硝酸盐氮浓度需要标定。标定方法如下：在 300ml 具塞锥形瓶中加入 50.00ml 0.050mol/L 的高锰酸钾溶液， 5ml 浓硫酸，用 50ml移液管加入 50.00ml 亚硝酸钠标准贮备液（移液时移液管下端插入高锰酸钾溶液液面下），轻轻摇匀。在水浴中加热至 7080，用移液管加入草酸钠标准液（每次加入 10.

22、00ml，直至红色褪去），记录草酸钠标准溶液的用量（ V2）。用高锰酸钾标准溶液滴定过量草酸钠至溶液呈微红色，记录高锰酸钾标准溶液总用量（V1）。用 50ml 水代替亚硝酸盐氮标准贮备液，重复上述操作。高锰酸钾的浓度（ C1）用草酸钠标准溶液标定：C1（ 1/5KMnO 4） =0.0500×V4/V3标准贮备液中亚硝酸盐氮浓度按下式计算：NO2-N （N：mg/L ）=（ V1C1-0.0500 ×V2）×7.00 ×1000/50.00=140 V1C1-7.00 ×V2式中： C1 高锰酸钾标准溶液浓度（mol/L ）；V1 滴定亚硝酸盐

23、氮标准贮备液时加入高锰酸钾标准溶液总量（ml）；V2 滴定亚硝酸盐氮标准贮备液时加入草酸钠标准溶液总量（ml ）；V3 滴定水时加入高锰酸钾标准溶液总量（ml）；V4 滴定空白时加入草酸钠标准溶液总量（ml）；7.00 亚硝酸盐氮（ 1/2N）的摩尔质量（ g/mol ）；50.00亚硝酸盐氮标准贮备液取用量（ml ）；0.0500 草酸钠标准溶液浓度（ 1/2Na2C2O4，mol/L ）。亚硝酸盐氮标准中间液：取 50.00ml 亚硝酸盐氮标准贮备液（含 12.5ml 亚硝酸盐氮），准确稀释至 250ml 容量瓶中。每毫升中间液中含 50.0 g 亚硝酸盐氮。8水产养殖与水域生态实验室实验

24、方法- 水化学注：中间液贮于棕色瓶内，在25保存，可稳定一周。亚硝酸盐氮标准使用液：取10.00ml 亚硝酸盐氮标准中间液 , 置于 500ml 容量瓶中定容。每毫升使用液含1.00 g 亚硝酸盐氮。使用液使用当天配置。C. 步骤（ 1）绘制曲线：在 6 支 50ml 比色管中，分别加入 0、 1.00、3.00、5.00、 7.00 和 10.00ml亚硝酸盐氮标准使用液，用不含亚硝酸盐的水稀释至标线。加入1.0ml 显色剂，加塞，混匀。静置 20min。在 2h 内以水为参比，测量吸光度（波长540nm，比色皿光程10mm），绘制校准曲线： y=ax+b，其中 a、 b 为常数。注：测定前

25、先对比色皿进行校正。（ 2）水样测定：将水样摇匀后经0.45 m 滤膜过滤（滤器使用前先用水样润洗一遍），取50ml 过滤水样于 50ml 比色管中（水样中硝酸盐含量较高，则进行适度稀释），每个比色管中分别加 1.0ml 显色剂，摇匀。静置20min。在 2h 内以水为参比，测量吸光度。（ 3）计算将水样的吸光值代入标准曲线方程，求出亚硝酸盐氮含量。计算方法如下：NO2-N（N：mg/L ） =aA+b5 高锰酸盐指数 酸性高锰酸钾法A. 方法原理加入硫酸使水样呈酸性后加入一定量的高锰酸钾溶液，在沸水浴中加热反应一定的时间，利用高锰酸钾氧化水样中有机物。加入过量草酸钠溶液还原剩余的高锰酸钾，用

26、高锰酸钾溶液回滴过量的草酸钠，计算求出高锰酸盐指数。高锰酸钾指数是一个相对的条件性指标，其测定结果与溶液的酸度、高锰酸盐浓度、加热温度和时间有关。因此测定时必须严格控制条件以使结果具有可比性。方法的适用范围：适用于氯离子含量不超过300mg/L 的水样。当水样的高锰酸盐指数值超过 10mg/L 时则酌情分取少量试样，并用水稀释后再进行测定。方法的精密度和准确度： 五个实验室分析高锰酸盐指数为 4.0mg/L 的葡萄糖标准溶液，实验室内相对标准偏差为 4.2%；实验室间相对标准偏差为 5.2%。B. 仪器与化学试剂 50ml 酸式滴定管 250ml 锥形瓶9水产养殖与水域生态实验室实验方法- 水

27、化学沸水浴、调温电炉定时钟高锰酸钾贮备液（1/5KMnO 4=0.1mol/L ）：溶解 3.2g 高锰酸钾于 1200ml 水中，煮沸 0.51h，使体积减少到 1000ml 左右，放置过夜。用 G-3 号玻璃砂芯滤器过滤，滤液贮存于棕色试剂瓶中避光保存（贮备液） 。贮备液使用前用 0.1000mol/L 的草酸钠标准液标定浓度。高锰酸钾标准溶液（ 1/5KMnO 4=0.01mol/L）：吸取 100ml 的高锰酸钾贮备液，用水稀释至 1000ml（标准溶液），标准溶液浓度为 0.01mol/L，贮于棕色瓶中，使用当天标定。草酸钠标准贮备液 （ 1/2Na2C2O4=0.1000mol/L

28、）：在 105110烘优级纯无水草酸钠 1h 后冷却，准确称取 0.6705g，溶于水中，在 100ml 容量瓶中定容（贮备液） 。草酸钠标准使用液（ 1/2Na2C2O4=0.0100mol/L）：吸取 10.00ml 草酸钠贮备液于 100ml 容量瓶中，用水稀释至标线。（ 1+3）硫酸：按体积比配制，趁热滴加高锰酸钾溶液至呈微红色。C.步骤（ 1）将水样摇匀， 取 100ml 水样（如高锰酸钾指数高于10mg/L，则应进行稀释） 于 250ml的锥形瓶中。注：水样有机质较多时，如稀释倍数太小，加热后溶液可能失去淡红色（高锰酸钾被消耗完），这时无法继续测定。（ 2）加入 5ml（ 1 3）

29、硫酸，混匀。（ 3）加入 10.00ml 0.01mol/L 高锰酸钾溶液，摇匀，立即放入沸水浴中加热30min（沸水浴液面要高于反应溶液的液面，从水样沸腾起计时）。注：在水浴中加热完毕后水样应保持淡红色，如颜色变浅或全部褪去说明高锰酸钾用量不够。此时，应将水样稀释倍数加大后再测定，使加热氧化后残留的高锰酸钾应为其加入量的 1/21/3。（ 4）取下锥形瓶，趁热加入 10.00ml 0.0100mol/L 草酸钠标准溶液， 摇匀。立即用 0.01mol/L高锰酸钾溶液滴定水样至微红色，记录高锰酸钾溶液消耗量。注：（1）在酸性条件下，草酸钠和高锰酸钾的反应温度应保持在 6080，所以滴定操作必须

30、趁热进行，若溶液温度过低，需适当加热。（ 2）用 0.01mol/L 高锰酸钾溶液滴定水样时颜色突变不很明显，因此要特别注意颜色变化。（ 5）高锰酸钾溶液浓度标定：将已滴完的水样溶液加热至约70，准确加入10.00ml 草10水产养殖与水域生态实验室实验方法- 水化学酸钠标准溶液 （0.0100mol/L ），再用 0.01mol/L 高锰酸钾溶液滴定至显微红色，记录高锰酸钾溶液的消耗量，按下式求得高锰酸钾溶液的校正系数（K）K 10.00/V式中： V 高锰酸钾溶液消耗量（ ml）若水样需要稀释时，应取 100ml 水作为空白，空白测定步骤与水样测定步骤相同。注：高锰酸钾标准溶液视水样有机物

31、含量而定，高锰酸钾溶液的浓度不能太高或太低。（ 6）计算水样不经过稀释时：高锰酸盐指数（ O2，mg/L ）=(10+V1)K-10 M××8×1000/100 式中： V1 滴定水样时，高锰酸钾溶液的消耗量 (ml) ；K校正系数；M 草酸钠溶液浓度（ mol/L ）；8氧（ 1/2O）摩尔质量。水 样 经 过 稀 释 时 ： 高 锰 酸 盐 指 数 （ O2 ， mg/L ） = (10+V1)K-100(10+V ) K-10 ×C ×M×8×1000/ V2式中： V0 空白试验中高锰酸钾溶液的消耗量(ml) ；2

32、分取水样量 (ml) ；VC 稀释的水样中含水的比值，例如，10.0ml 水样，加 90ml 水稀释至 100ml，则C= 0.90。6 生化耗氧量 稀释接种法A. 方法原理生化需氧量（ BOD）指在规定条件下（ 20±1培养 5d），微生物分解水中的某些可氧化物质，特别是有机物所进行的生物化学过程中消耗溶解氧的量。此生物氧化全过程进行的时间很长，如在20下培养时完成此过程需100 多天。目前国内外普遍规定是在20±1下培养 5d，分别测定样品培养前后的溶解氧，二者之差即为 BOD5 （毫克氧 /升）。B. 仪器和试剂恒温培养箱（ 20±1） 520L 细口玻璃瓶

33、 10002000ml 量筒玻璃搅棒：棒底端固定一个直径比量筒底小，并带有几个小孔的硬橡胶板，棒长度应比11水产养殖与水域生态实验室实验方法- 水化学所用量筒高度长200mm。 250300ml 溶氧瓶：带有磨口玻璃塞并具有供水封用的钟形口。虹吸管，供分取水样和添加稀释水用。稀释水： 向 520L 玻璃瓶内加入一定量的稀释水， 控制水温 20左右， 用无油空气压缩机或薄膜泵将吸入的空气先后经活性碳吸附管及水洗涤管后， 导入稀释水内曝气 28h（曝气亦可导入适量纯氧），使稀释水中溶氧近饱和。稀释水的 pH 值应为 7.2，BOD 5 应小于0.2mg/L。将瓶口盖两层洗涤晾干的纱布，置于 20培

34、养箱中放置数小时，使水中溶氧含量达 8mg/L 左右。C. 步骤（ 1）水样预处理水样 pH 若超出 6.57.5 时，可用稀盐酸或氢氧化钠溶液调节pH 近 7，但盐酸或氢氧化钠溶液用量不要超过水样体积的0.5%。若水样的酸度或碱度很高， 可改用高浓度的碱或酸液进行中和。从水温较低的水域或富营养化湖泊中采集的水样，可能含过饱和溶氧，此时应将水样迅速升温至 20左右，在不满瓶的情况下充分振摇，并时时开塞放气，以赶出过饱和的溶氧。从水温较高的水域或废水排放口取得的水样， 应迅速使其冷却至 20左右并充分振摇，使与空气中氧分压接近平衡。（ 2）水样不需稀释时测定BOD：溶解氧较高、 有机物含量较少的

35、地表水， 可不经稀释而直接以虹吸法将约 20的混匀水样转入两个溶氧瓶内，转移过程中应注意不产生气泡。以同样的操作使两个溶氧瓶充满水样后溢出少许，加塞。瓶内不应产生气泡。其中 1 瓶随即测定溶氧，另 2 瓶的瓶口水封后放入培养箱中， 在 20±1培养 5 天。培养过程中注意添加封口水。从开始放入培养箱起算，经过5 昼夜后，弃去封口水，测定溶氧瓶内的溶氧。（ 3）水样需稀释时测定 BOD ：稀释倍数的确定：根据实践经验提出下述计算方法，供稀释时参考。稀释操作：直接稀释法：直接稀释法是在溶解氧瓶内直接稀释。 在已知两个容积相同 （其差 <1ml）的溶解氧瓶内，用虹吸法加入部分稀释水（

36、或接种稀释水）使刚好充满，加塞，勿留气泡于瓶内。其余操作与上述一般稀释法相同。12水产养殖与水域生态实验室实验方法- 水化学（ 4）计算不经稀释直接培养的水样：BOD5(mg/L) =C1 -C2式中：C1 水样在培养前的溶解氧浓度（mg/L ）；C2 水样经 5d 培养后，剩余溶解氧浓度（mg/L ）。经稀释后培养的水样：BOD512121 /f2(mg/L) =( C-C )-(B -B )f式中：B1 稀释水（或接种稀释水）在培养前的溶解氧浓度（mg/L ）；B2 稀释水（或接种稀释水）经培养后的溶解氧浓度（mg/L ）；f1 稀释水（或接种稀释水）在培养液中所占比例；f2 水样在培养液

37、中所占比例。注： f1， f2 的计算：例如培养液的稀释比为3%，即 3 份水样， 97 份稀释水，则 f1 =0.97，f2=0.03。注意事项：玻璃器皿应彻底洗净：先用洗涤剂浸泡，然后用稀盐酸浸泡，最后依次用自来水、蒸馏水洗净。在两个或三个稀释比的样品中，凡消耗溶氧大于 2mg/L 和剩余溶氧大于 1mg/L，计算结果时，应取平均值。若剩余溶氧小于 1mg/L，甚至为零时，应加大稀释比。溶氧消耗量小于 2mg/L，有两种可能，一是稀释倍数过大；另一种可能是微生物菌种不适应，活性差，或含毒物质浓度过大。这时可能出现在几个稀释比中稀释倍数较大的消耗溶氧反而较多的现象。水样稀释倍数超过 100

38、倍时，应预先在容量瓶中用水初步稀释后，再取适量进行最后稀释培养。7 悬浮物 滤膜法A. 方法原理悬浮物即不可滤残渣，指水样中不能通过滤器的物质。测定悬浮物的方法是将水样用0.45 m 滤膜过滤，将截留在滤器上的残渣在103105下烘干 2h 至恒重时的含量。B. 仪器 0.45 m 孔径的滤膜及相应的滤器。13水产养殖与水域生态实验室实验方法- 水化学称量瓶。C. 步骤（ 1）将 0.45 m 滤膜置称量瓶中，开盖在 103105下烘 2h，盖上盖子放冷称重，按以下操作再烘干、称重，直至恒重（两次称出的重量相差不超过0.005mg）。（ 2）将水样除去树枝、草、叶及其它明显的漂浮异物，摇匀。分

39、取适量水样（使不可过滤残渣大于 2.5mg），用已恒重的滤膜过滤，用纯水冲洗 3 次，如果残渣上有油脂，用石油醚冲洗 23 次。（ 3）将滤有残渣的滤膜小心取下，放入原称量瓶中，按（1）烘干、称重，直至恒重。（ 4）计算：悬浮物（ mg/L ） =(A-B) ×106/V式中：A残渣、滤膜及称量瓶总重量（g）；B滤膜及称量瓶重（ g）；V取样体积（ ml）。8 总氮、总磷 过硫酸盐氧化法总氮总磷测定（操作简易版本实验操作按照此步骤）该法 1983 年日本公布为测 TN， TP 的测定方法， Junko 等人又做了改进。参考文献： Junko Etina et al.，Water Re

40、s，.17(21),1721,1983.1） 原理：60° C2K2S2O8+2H2O 4KHSO4+02?1mol K2S2O8 与 1mol NaOH 混合，初 pH=12.57，反应后 pH=2.12，该法较凯氏法提高效率 27 倍。2） 试剂：a20g K2S2O8+3g NaOH，1L 蒸馏水溶解。b硝酸盐标准贮液： 0.7218g KNO3 1L 容量瓶中定容，浓度： 100 mg/L NO3 N。使用液： 10ml 贮液 100ml 容量瓶，浓度 10mg/L ，现用现配。c磷酸盐标准贮液： 0.4394g KH2PO4 1L 容量瓶，加 1：1H2SO4 后定容。浓度

41、：100mg/L PO4P。使用液： 10ml 贮液 100ml 容量瓶，浓度： 10mg/L，现用现配。14水产养殖与水域生态实验室实验方法- 水化学d混合试剂： 12.5g（NH4 ）6Mo7O24?4H2O 溶于 125ml 蒸馏水。0.5gK（ SbO）C4H4O6（常 1/2 H2O 或无水） 20ml 蒸馏水将钼酸盐溶液溶于350ml H2SO4 中（ 4.5M ），不断搅拌，再加入酒石酸溶液混匀，贮于玻璃瓶中，可稳定数月。e4.5M H2SO4： 250ml 浓 H2SO4 750ml 蒸馏水中，冷却后定容至1L。f 酸性抗坏血酸： 10g 抗坏血酸（ C6H8O6）50ml 蒸

42、馏水中，加 4.5M H2SO4 50ml，贮于冰箱中，稳定一周，试剂无需重配。3） 测定步骤：a按下步骤依次取N，P 标准液，加入 50ml 比色管中，用蒸馏水稀释至25ml，再加25ml 氧化剂，加盖摇匀，放入高压锅中与水样一同消化。1234567氮使用0124681液.0.0.0.0.00.0浓 度0000112（mgN/L ）.2.4.8.2.6.0磷使用0001234液.25.50.00.00.00.00浓 度0000000（mgN/L ）.05.1.2.4.6.8b吸取摇匀水样 25ml加 25ml 氧化剂 高压锅中消化 （115° C 消化 30 分钟），冷却后取出测定

43、。c总 N：以 1cm 石英比色皿，在200-220nm（取入 =210nm）处测吸光度。d总 P：取消化后样品 25ml，加 1ml 抗坏血酸，摇匀。 1 分钟后，加混合试剂 1ml 摇匀， 20-40CF 显色 30 分钟，在 721（710nm）处测吸光度。（下述详细步骤仅供参考）B. 仪器与化学试剂15水产养殖与水域生态实验室实验方法- 水化学 751 型紫外 -可见光分光光度计 50ml 具塞比色管高压蒸汽灭菌器（可控温 120， 9.814.7 N/cm2 压力 ）或一般民用压力锅氧化剂：称取 20gK2S2O8 和 3gNaOH，溶于水中并稀释至 1000ml。氮标准溶液： 称取

44、 0.7218g KNO3（1051104h），加水溶解后稀释至 1000ml（贮备液），贮备液中含 100g/ml 的氮。取贮备液 10ml 稀释至 100ml（氮标准使用溶液），使用液中含10g/ml 的氮。磷标准溶液：准确称取0.4394g 经 105110干燥的磷酸二氢钾，溶于水后，加入1ml（ 1+1）H2SO4溶液，再用水稀释定容至 1000ml（磷贮备液），磷贮备液含 100g/ml 的磷。用时取此磷磷贮备液 10ml 准确稀释至 100ml（磷标准溶液），磷标准溶液中含 10g/ml 的磷。硫酸钼酸铵氧锑钾贮备液：量取194.6ml 浓硫酸，在连续搅拌下缓缓加到405ml 蒸馏

45、水中，冷却。称取钼酸铵 (NH 4724· 2溶于300ml蒸馏水中。将上述硫酸溶液Mo O4H O)20g在 连 续 搅 拌 条 件 下 缓 缓 加 入 钼 酸 铵 溶 液 中 ， 加 入 100ml 0.5% 的 酒 石 酸锑 钾 K(SbO)C 4H4O6·1/2H2O 溶液，摇匀（硫酸钼酸铵氧锑钾贮备液） ，保存于棕色瓶中。显色剂：量取 100ml 硫酸钼酸铵氧锑钾贮备液，加入 1.5g 抗坏血酸，溶解（显色剂） 。显色剂稳定 4h 左右，使用前配制。C. 步骤（ 1）氮、磷标准溶液：在 7 个 50ml 具塞比色管中，分别加入磷标准溶液 （10g/ml）0、 1.

46、0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml 和氮标准溶液（ 10g/ml ）0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0ml，加水至标线，摇匀，此标准系列中磷含量分别为 1、4、8、12、 16、20、24g；氮含量为1、8、16、 24、32、40、 48g。从上述每个标准溶液中分别吸取20ml 加入另外准备7 个50ml 具塞比色管，然后每个比色管中加入20ml 氧化剂溶液，立即加盖、摇匀。注：消化用玻璃器皿要洗净（不含氮、磷），新比色管应先用氧化剂溶液清洗一次，不要用含磷洗衣粉及洗涤剂洗涤玻璃仪器。（ 2）吸取摇匀后的水样 20ml 于 50ml 比色管中，加入 20ml

47、氧化剂溶液，立即加盖摇匀。注：氧化剂中 K 2S2O8 和 NaOH 浓度分别为 0.074mol/L 和 0.075mol/L，这是根据氧化原理并经过反应动力学计算和反复试验得出的最佳浓度。 如果氧化剂中 NaOH 浓度增加，磷的氧化不完全；反之，如果 NaOH 浓度减少，则氮的氧化不完全。（ 3）将上述盛有标准系列和水样的比色管加塞，管口包一小块纱布并用线扎紧（以免加16水产养殖与水域生态实验室实验方法- 水化学热时玻璃塞冲出） ，放入高压灭菌器中，加热，放气几分钟后关上气阀，在120和10.78N/cm2 下氧化 30min（达到指定温度和压力时开始计时） ，停止加热，待压力表指针降至零

48、后取出比色管，冷却至室温。注：（1）一般民用压力锅在加热至顶压阀出气孔冒气时锅内温度为120（ 1.1kg/ cm2）。水样与标准系列在 120下高压氧化时，应在达到预定温度、压力时开始计时，以保证氧化完全。一定要待高压灭菌器冷却至室温后再慢慢开盖取出比色管，以免溶液冲开瓶塞溅出。（ 2）所有用水均为无氨蒸馏水。（ 3）必要时所用过硫酸钾需精制（否则空白值高） ；精制过硫酸钾时，往往需要溶解再结晶两次才能达到纯度要求。（ 4）每次测定水样时要做标准曲线。（ 4）总磷测定：分别取氧化过的标准系列和水样上清液10ml 于 50ml 的具塞比色管中，加入 1 滴二硝基酚指示剂， 用饱和碳酸钠溶液和

49、1mol/L 硫酸调至溶液呈浅黄色， 准确加入显色剂 2.5ml，加水至 25ml 刻度后摇匀，置于 2040温度下还原显色 30min，在 700nm 波长处用 3cm 比色皿在分光光度计上以无氨水为参比测定吸光度（用空白作对照） 。（ 5）总氮测定：由于氧化后水样及标准系列的 pH 值均在 2 左右，所以可直接取出上清液（少数不清洁水样氧化后有少许沉淀产生） ，用在波长 200210nm处用 1cm 的石英比色皿进行总氮的测定（用空白作对照） 。（ 6）分别根据氮、磷（ g）标准溶液的吸光度绘制氮、磷标准曲线。注：本方法如用 751、721 型光度计分别测定氮、 磷，在氮含量达 3.5mg

50、/L ，磷含量达 15mg/L 时，均在仪器测定范围内且回收率很好，一般湖泊水很少超过此测定范围，如氮含量超过3.5mg/L 而小于 20mg/L，磷含量超过3.5mg/L 时，可以用空白适当稀释氧化液后再进行测定，先稀释后氧化与先氧化后稀释测定的结果一致。（ 7）计算：用水样的吸光值代入所得的校准曲线方程直接求水样的磷营养盐浓度。或按以下公式计算：总氮（ N，mg/L ）=m1/20总磷（ P，mg/L ）=m2/20式中：m1从氮校准曲线上查得的总氮量（g）；m2从磷校准曲线上查得的总磷量（g）；20取样体积（ ml）。17水产养殖与水域生态实验室实验方法- 水化学9 总硬度 EDTA 滴

51、定法A. 方法原理在 pH=10 条件下，用 EDTA 溶液络合 Ca2+和 Mg 2+。以铬黑 T 为指示剂，铬黑 T 与 Ca2+和 Mg 2+形成紫红色或紫色溶液。滴定中，游离Ca2+和 Mg 2+首先与 EDTA 反应，然后与铬黑 T 结合的 Ca2+和 Mg 2+与 EDTA 反应，达到滴定终点时溶液颜色由紫色变为天蓝色。本方法适用于测定地下水和地表水中 Ca2+和 Mg 2+总量，但不适用海水等含盐量高的水。测定 Ca2+和 Mg 2+最低浓度为 0.05mmol/L 。本方法的重复性偏差为 ±0.04mmol/L，约相当于 ±2 滴 EDTA 二钠溶液。B. 仪器和化学试剂 50ml 酸式滴定管，分刻度至 0.10ml 250ml 锥形瓶氨性缓冲液：先称取 16.9g 氯化铵，溶于 143ml 氨水，再称取 0.78g 硫酸镁（MgSO4·7H2O）和 1.179gEDTA 二钠二水合物 （ C10H14N2O8Na2·2H2O）溶于 50ml 水，加入 2ml 配好的氯化铵