阿昔洛韦乳膏体外透皮吸收实验

1、不同软膏基质对阿昔洛韦透皮吸收效果的影响药学院09级06班黄小玉 09206060193戴贝萱 09206060198 周秀琼 09206060199 吕台中 08206060185 谭圣斌 08206060178 颜可立 082060601741、实验目的：比较不同软膏基质对阿昔洛韦透皮性能的影响。2、实验依据：阿昔洛韦（acyclovir, acv）为核昔类抗病毒药，目前广泛用于皮肤科的各种 疱疹病毒感染。除口服、注射给药外，皮肤局部用药仍为低毒、有效的给药途径, 尤其作为非处方药物，其应用前景较为广泛。阿昔洛韦乳膏为皮肤科用药，本实 验采用离体乳猪皮肤作为渗透屏障，采用高效液相色谱测定的

2、方法，设计四种不 同基质的处方，测定acv从处方中的释放与经皮渗透性质，并与商品acv软膏 进行比较。通过对比来研究阿昔洛韦乳膏的体外透皮吸收效果。3、仪器设备和实验材料：3.1仪器knauer高效液相色谱仪；改进franz扩散池（扩散面积4.52 cm2,接受室体 积13 ml）；超级恒温水浴装置及磁力搅拌器。3.2试药阿昔洛韦（浙江武义制药厂提供，批号931202）；月桂氮卓酮（azone福建寿宁 美菲思生物化学品厂，批号960606）；乙醇、丙二醇为分析纯，软膏基质、薄荷 油为药用标准。阿昔洛韦软膏（市售，上海申光制药厂生产批号950401）。3.3动物实验用小型乳猪（巴马香猪，体重68

3、kg）o4、实验方法与步骤：4.1色谱条件：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂流动相：甲醇：水=10： 90检测波长：254nm柱温：室温 进样量20ul4.2溶液的制备4.2.1对照品溶液的制备:精密称取阿昔洛韦对照品适量，置50ml量瓶中，加0.4% 氢氧化钠溶液5ml使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml,置looml量 瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，制成每iml中含20µg的溶液，即为对照品 溶液。4.2.2样品溶液的制备：取阿昔洛韦乳膏适量，均匀涂布于fnmz扩散池的猪皮上, 10h后取接收液适量，孔径为0. 45p,m的滤膜滤过，取续滤液作为样品溶液。 4

4、.2.3空白基质液的制备：取空白基质适量，均匀涂布于franz扩散池的猪皮上， 10h后取接收液适量，孔径为045 m的滤膜滤过，取续滤液作为空白基质液。 4.3专属性试验分别取上述对照品溶液、样品溶液、空白基质液20ul进样，记录色谱图。 结果表明在此色谱条件下，空白基质及皮肤不干扰测定。4.4阿昔洛韦标准曲线精密称取干燥至恒垂的阿昔洛韦对照品100 mg,用生理盐水于100 ml量瓶中 配成1 mgmll的储备液，分别精密吸取储备液0.2、0.4、0.8、1.0及2.0 ml于 100ml量瓶中，用生理盐水定容，摇匀，即得质量浓度(p)为2.0、4.0、8.0、 10.0及20.0ugml

5、1的标准液。分别进样20ul,以峰面积a为纵坐标、浓度c( g /ml)为横坐标，得标准曲线方程，r=0.9999,表明阿昔洛韦浓度在2.0-20.0 ng ml1范围内线性关系良好。4.5精密度和回收率实验分别吸取高、中、低3个浓度的阿昔洛韦对照品液，分别于id内重复进样5 次，连续进样测定5d,日内精密度rsd为1.23% ,日间精密度rsd为2.04%。取 3份阿昔洛韦溶液，分别加入等量的阿昔洛韦对照品贮备液，摇匀后，各进样 20ul,测定峰面积，连续5次，代入标准曲线，换算成实际测定浓度，计算回收率，低、中、高3种浓度的回收率分别为(97.5±0.9)%> (9&

6、;8±21)%、 (98.0±1.5)%o 4.6处方的制备4.6.1乳膏基质(1)处方：acv3g,硬脂酸18 g,凡丄林32 g,丙三醇15 g,三 乙醇胺1.8 g,月桂氮卓酮5 g,丙二醇5 g,薄荷油0.5 g,蒸憾水加至100.0 go (2) 制备方法：将硬脂酸，凡士林，月桂氮卓酮水浴加热熔融。另将丙三醇、三乙醇 胺、丙二醇、水加热至同温，细流加入上述熔融物中，搅拌至冷，加acv、薄 荷油搅匀，即得白色乳膏。462 peg基质 (1)处方：acv3g, peg400 4.5 g, peg4000 12 g,月桂氮卓酮5 g,丙二醇5g,薄荷油05g。(2)制备

7、方法:将peg400、peg4000置于蒸发皿中, 水浴加热熔融，加入月桂氮卓酮、丙二醇混合搅拌至冷，加入药物、薄荷油混合 均匀，即得白色软膏。4.6.3 i号凝胶基质(1)处方：acv3g,卡巴浦3g,三乙醇胺3g,乙醇20g, 月桂氮卓酮5 g,丙二醇5g,薄荷油0.5 g,蒸憾水加至100.0 go (2)制备方法:将 卡巴浦均匀撒布于适量水中，放置使充分溶胀，加入药物搅匀。取乙醇、丙二醇、 月桂氮卓酮、薄荷油混合均匀，搅拌下加入。另取三乙醇胺溶于适量水屮，搅拌 下加入，加水至足量，搅拌均匀，即得白色凝胶。4.6.4 ii号凝胶基质 处方：各成份同463,另加辅助促透剂2 g。制备方法同

8、 4.6.3。4.7离体猪皮的制备巴马香猪处死后立即用电动剪毛刀剪去腹部皮肤毛，剥离去毛部位皮肤，去 除皮下组织后用生理盐水冲洗干净，置于生理盐水中浸泡约30rain,取出，用滤 纸吸干，备用。4.8离体皮肤渗透试验采用改进fnmz扩散池。取制备好的离体猪皮放人fnmz扩散池中，皮肤角质 层朝上，扩散池的有效面积为4.52cm。取乳膏适量均匀涂布于皮肤上，在接受池 中加生理盐水14ml, 37c恒温水浴，用磁力搅拌器不断搅拌，使药物自然释放。 分别于涂布后1、2、4、6、8、10、12h各取接受液iml,(取样后即向接受室内 补充im生理盐水)。用0451m微孔滤膜过滤，取续滤液进样测定。5、

9、实验数据处理5.1按下列公式计算单位面积累积滲透量（q）：qn 二 v。x qn/v + f 5i 1式屮vo为接收液总体积，v为取样量，q为第n次实测单位面积渗透量（q二 样品峰面积x对照品浓度x接收液取样量/（对照品峰面积x释放面积），qi为n 次前每次测得的单位面积渗透量。5.2各时间点药物单位面积累计渗透量见表一。以qt作线性回归，得回归方程, 所得直线斜率即透皮速率。表一药物累积渗透量项目lh 2h 4h 6h 8h 10h2h商品软膏乳膏基质peg基质i号凝胶基质ii号凝胶基质5.3根据文献1,药物阿昔洛韦从处方中的释放速率大小呈以下顺序：i号凝胶 >peg基质>11号

10、凝胶乳膏基质商品软膏。acv的透皮速率分别为：商品软 w 1.1 ±0.3,乳膏基质3.0±05, i 号凝胶5.6±0.8, peg基质 14.4± 1.1, ii 号凝 胶20.2±2.1 ug -cm.h-k在商品软膏中，acv的透皮速率最小，acv累积渗 透量也较低，后四种处方基质的药物透皮速率分别为它的2.47、4.98、12.79与17.85 倍。6、本实验的创新点体外经皮渗透研究最好用人的皮肤，但人的皮肤难于得到，本试验所选用的 体外经皮渗透屏障是与人体皮肤最接近的乳猪皮肤，有关文献报道，在体外和同 的条件下，用猪皮肤预测人皮肤的

11、通透性数据是相似的。一些化合物体内皮肤穿 透证明，刚断奶的猪背部皮肤与人的前臂皮肤最相近，而小型猪的皮肤与人的皮 肤穿透性特征最接近。故我们选用乳猪模拟人体皮肤。本实验采用经典的franz试验扩散装置考察喷昔洛韦乳膏体外透皮量，操作 简便，重复性好。由于猪皮含有丰富蛋白质和脂质等大量生物大分子，在进行 hplc检测之前必须对接收液进行过滤，防止带人较多杂质影响检测结果、污染 色谱柱。本实验采用检测灵敏度较高的hplc测定透皮接收液中的阿昔洛韦的含量， 结果准确可靠，满足透皮吸收制剂研究的要求，为阿昔洛韦乳膏的体外研究奠定 了基础。7、参考文献1马晓微，何飞燕*,梁文权.五种阿昔洛韦软膏释放与透皮性质比较j中国医