虫草液体菌种制作及质量检验方法

1、虫草液体菌种制作及质量检验方法（上）2010年4月13 口 来源：食用菌市场2009年第六期 字号大中小虫草液体菌种制作及质量检验方法（上）井大鹏王明辉/文摘要：液体菌种是指菌丝体的纯培养完全在液体培养基中进行培养而成的菌种。应 用液体菌种进行虫草生产能显著提高产量和质量，便于工厂化和标准化生产。本文综述 了虫草液体菌种的优势，制作及质量检验方法。关键词：虫草液体菌种培养液检验方法随着国内外市场对虫草产品需求的増加，虫草牛产方式由小户型、季节性生产的模 式逐渐向工厂化、标准化、周年化、规模化生产发展。伴随新技术、新工艺、新设备的 研发问世，采用深层培养工艺制备虫草液体菌种已应用于生产中。由于液

2、体菌种具冇成 本低、生产周期短、菌龄一致、接种简便快捷、便于管理等优点，因而深受虫草栽培者 的欢迎。一、虫草液体菌种的生产方式一般可分为电磁搅拌法、摇瓶机法、简易深层发酵（吹氧）法、发酵罐法。1、电磁搅拌法。设备技术比较简单，投资较少，但生产量小，生产的液体菌种是 菌丝团。2、摇瓶机法。摇瓶机培养投资少，设备技术简单，管理方便，适合一般菌种厂生产使用，生产出来的液体菌种是菌球。3、简易深层发酵(吹氧)法。制作工序繁琐、配套设备要求较髙、各部件必须 在无菌条件下进行组装，住产的液体菌种是菌球。4、发酵罐法。需要一整套的发酵设备，投资大，技术要求严格，只适用于工厂 化的人规模生产，生产出來的液体菌

3、种是菌球。二、虫草液体菌种的培养方法通常采川摇瓶机法和简易深层发酵(吹氧)法來牛产培养液体菌种。若小规模牛产, 一般可采用摇瓶机法培养液体菌种。本文主要介绍摇瓶机振荡培养技术。1、液体培养基配方(1) 土豆20% (煮汁)、葡萄糖2%、酵母膏0. 5%、磷酸二氢钾0. 05%、硫酸镁0. 05%、 维生素b1 2片、水looomh ph值日然。(2) 土豆30% (羔汁)、蚕蛹粉2%、蔗糖1%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、 维生素b1 2片、水1000ml. ph值自然。(3) 土豆20%、葡萄糖2%、玉米粉2%、黄豆粉1%、酵母膏0. 2%、磷酸二氢钾0. 15%、 硫酸镁0.05

4、%、水looomk ph值自然。(4) 葡萄糖1%、蛋0 1%、酵母膏0.1%、磷酸二氮钾0.1%、硫酸镁0.05%、牛 长素5ml、水looomk ph值自然。(5) 葡萄糖2%、蛋白月东0.2 %、磷酸二氢钾0. 046 %、硫酸镁0.05 %、磷酸氢二钾0. 1 %、水1000ml. ph值自然。（6）葡萄糖2%、蛋白j东0.4%、牛肉膏0.4%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05 %、 维生素2片、水1000ml、ph值自然。（7）葡萄糖3%?、豆粉2%、玉米粉1%、硫酸镁？ 0.05%、磷酸二氢钾0. 1%.酵母 粉0.5%、水looomk ph值自然。（8）葡萄糖2%、蛋口腺1%、

5、酵母粉0.5%、玉米粉2%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁 0.05%、水 looomk ph 值自然。（9）葡萄糖2%、黄豆粉1%、磷酸二氢钾0. 3%、硫酸镁0. 04%、氯化钠（食盐）0. 03%、 味精0.01%、维生素微量、水1000ml. ph值自然。（10）蔗糖3%、天门冬酰胺0.1%、磷酸二氢钾0.125%、硫酸镁0.03%、氯化钠 （食盐）0. 05 %、水loooml ph值自然。2、液体培养基的制作（1）按配比精确称取各种营养物质。（2）配制溶液。为避免发生沉淀，可将各种营养成分单独溶解分别制成母液，加 入的顺序一般是先加缓冲化合物，溶解后加入主耍元素，然后是微量元素，再加入

6、维生 素等。最好是每种成分完全溶解后，再加入第二种营养成分。若各种成分均不发牛沉淀, 也可以一起加入。若用马铃蒋、玉米粉、黄豆粉等原料时，应先制取这些原料煮汁，然后再把煮汁与 其它成分混合。例如：配方一液体培养基的配制。土豆20% （点汁）、葡萄糖2%、酵母膏0. 5%、磷酸二氢钾0. 05%.硫酸镁0.05%、维生素b1 2片、水1000ml、ph值口然。（3）将新鲜土豆洗净去皮、挖掉芽眼的土豆切成小块放入小锅或大烧杯中，加入 一定量的水，用文火煮沸30分钟左右，至土豆软而不烂时，用68层布过滤，取滤汁 于锅中。（4）补水。加水至10001200 mlo（5）按配方顺序加入需加的其他营养物质

7、，文火煮510分钟。（6）充分搅拌均匀，并调ph。一般用10%hcl或10%na0h调ph,用ph试纸（或ph检测仪）进行测试。（7）沉淀分装。培养液配制好示，沉淀1小时取上清液，分装入500ml容量的三 角烧瓶中,每瓶装量为100ml;750ml的瓶装量为200ml;1000ml的瓶装量为300ml,在 配制培养液时，可加入0.02%的植物汕或0. 06%的泡敌（聚环氧丙烷廿汕酬）作为消泡 剂消泡，防止在培养过程中培养液产生气泡。为了击碎菌丝每瓶内加入510粒小玻璃 珠。（8）塞棉塞。棉塞松紧适度，不宜过紧。加棉塞后再包扎牛皮纸封口，这样既可 过滤空气，避免杂菌侵入，乂可减缓培养基水分的蒸发

8、。（9）用记号笔注明培养液的名称和ii期。（10）灭菌 首先将内层灭菌筒収出，再向外层锅加入适量的水，使水面与三角搁架和平为宜。 放回灭菌桶，将包扎好的三角瓶直立放入灭菌桶内，盖上牛皮纸，三角瓶不要 与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。 加盖，将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时 旋紧相对的两个螺栓。 通电加热，并同时打开排气阀，使水沸腾排除锅内的冷空气。待冷空气完全排 尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升，在1.01. ikg/cm2压 力下，灭菌30分钟。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。 灭菌所帝时间到后，切断

9、电源，让灭菌锅内温度口然下降，当压力表的压力降 至0时，缓慢打开排气阀，旋松螺栓，打开盖了，取出灭菌物品。如果压力未降到0 吋，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养液山于内外压力不平衡而 冲出三角瓶，造成棉塞沾染培养液而发生污染。三、摇瓶机振荡培养技术火菌结束后，取出培养液冷却到30c以下时，在无菌条件下接入一块约2厘米的 斜面菌种，菌丝面向上悬浮于培养液液面。在20°c22°c条件下避光静置培养48小时, 再置往复式摇瓶机上振荡培养，振荡频率为80120次/分，振幅6厘米10厘米。如 果用旋转式摇瓶机，振荡频率为200220转/分。摇瓶机察温控制在22

10、76;c25°c,冬 季室内温度低，可将摇瓶机放入恒温箱内培养。培养吋间一般是在57天左右。四、虫草液体菌种的检验方法虫草液体菌种进行质量检验nj采川感官检查、显微镜检查、空白培养基检查和取样 测验等方法。采用电磁搅拌法培养或摇瓶机法培养液体菌种，终止培养后，常用h测法检验，将 三角瓶摇晃静止后，如菌丝球均匀地分布于三角瓶中，培养液清澈、无界味，液体中悬 浮着大量均匀的小菌丝球，并伴冇蛹虫草特冇的香味，表示符合质量要求。简易深层发酵（吹氧）法或发酵罐法人量生产液体菌种，为了更好地控制培养条件, 达到优质高产的日的，就需要对培养液中的污染情况、菌丝活力、菌丝体含最、菌丝球 数量、ph值

11、、总糖及还原糖、氨基酸、溶氧系数等的变化进行检测。现将有关的检测 方法介绍如下。（一）感官检查。可采用“看、旋、嗅”的步骤进行检查。看：将样品静置桌上观察。一看菌液颜色和透明度，正常发酵醪液（培养液）一般 呈口色或黄褐色，清澈透明，菌丝颜色因菌种的不同或菌种见光程度而界，老化后颜色 变深；染杂菌的醪液则混浊不透明。醪液变混，有两种可能性，一是细菌污染应予以淘 汰；二是由于菌丝生长粘稠过人所致。若难以判断，可进行镜检。二看菌丝形态和人小, 正常的菌丝大小一致,呈球状、片状、絮状,菌丝粗壮,线条分明;而染杂菌后,菌丝 纤细，轮廓不清。三看上清液与沉淀的比例，菌丝体占比例越大越好，较好的液体菌种, 在瓶中所占比例可达80%左右。四看ph值指标是否变色，在培养液中加入甲基红或复 合指标剂，经35天颜色改变，说明培养液ph值到达5.0左右，为发酵点；如果在 24小时内即变色，说明因杂菌快速生长而使培养液酸度剧变。五看有无酵母线，如果 在培养液与空气交界处的瓶壁上有灰色条状附着物，说明为酵母