肝癌细胞凋亡调控的研究进展

1、肝癌细胞凋亡调控的研究进展【摘要】 肝癌(hepatocellular carcinoma, hcc )为我国常见恶性肿瘤之一。 体内的动物实验以及未经治疗的hcc均存在细胞凋亡现象。细胞凋亡是一个复杂 的网络系统，受多系统、多水平、多因素共同调控。诱导其细胞凋亡的各种方法 在理论上来说就可以治疗肝癌。本文综合论述了有关参与肝癌细胞凋亡的一些因 素如p53, bcl-2, survivin, caspase, trail, cox-2在调整细胞增殖与细胞凋 亡平衡中的相互作用，以及某些抗肿瘤治疗的可能机制。【关键词】细胞凋亡；p53; survivin; caspase; trail; cox

2、-2abstract hepatocellular carcinoma ( hcc) is one of the most lethal malignancies, and is also one most prevalent malignant disease of adults in china. several molecules including p53, bax, bcl-xl, fas/ fas 1igand, survivin, nf- k b and caspase are strongly associated with the pathway of apoptosis a

3、nd affect the chemosensi t ivi ty of tumor cel is to ant icancer agents this review article wi 11 update the role of surviving, p53, survivin, caspase, trail and cox-2 in apoptosis, and cancer therapeuticslkey words apoptosis; p53;survivia; caspase; trail; cox-2肝癌(hepatocellularcarcinoma, hcc )有原发性肝

4、癌和继发性肝癌之分，原 发性肝癌为我国常见恶性肿瘤之一。体外培养的肝癌细胞，体内的动物实验以及 未经治疗的hcc均存在细胞凋亡现象，凋亡指数的高低直接关系到肝癌患者的预 后。细胞凋亡是机体清除衰老、异常细胞，维持内环境稳定的重要生理功能。免 疫应答、造血系统的调控、胚胎的发育、肿瘤的形成都与细胞凋亡息息相关。肿 瘤的发生、发展与正常的细胞凋亡过程被抑制，破坏了细胞增殖与凋亡之间的平 衡有一定关系。现在广泛认为细胞凋亡是一个复杂的网络系统，受多系统、多水 平、多因素、多基因共同调控。诱导其细胞凋亡的各种方法在理论上来说就可以 治疗肝癌。本文简单介绍有关参与肝癌细胞凋亡的一些特异性(p53, fa

5、s, bcl-2/bax基因等)和非特异性信号分子以及其他因素在调整细胞增殖与细胞凋 亡平衡中的相互作用，以及某些抗肿瘤治疗的可能机制。1肝癌细胞凋亡通路的基因调控细胞凋亡是一个多基因调控的复杂过程，主要是由诱导基因、抑制基因和双向 控制基因相互作用的结果。调控肝癌细胞凋亡的基因分为两大类，一类是抑制肝 癌细胞凋亡的基因，主要有bcl-2和生存素(survivin );另一类是促进肝癌细胞 凋亡的诱导基因，有p53、fas/fasl. trail等。通过这些基因的表达和相互作用， 对肝癌细胞凋亡的调控起着重要的作用。1.1 p53基因1)53基因是目前为止发现的最重要的抑癌基因，1)53全长2

6、0kb,位 于人染色体17ql3l,由11个外显子构成，是细胞生长周期中的负调控因子，对 细胞周期的调控、dna的修复、细胞分化、细胞凋亡等有重要生物学作用。目前研究表明，1)53促凋亡的途径有两条，一条是转录依赖途径(transcription dependent pathway ),通过抑制抗凋亡蛋白bcl-2的活性，诱导促凋亡蛋白bax、 胰岛素样生长因子结合蛋白 3 ( insul in-1 ike growth factor-bindingprotein3, igf-bp3 )的表达和上调fas受体。另一条是转录非依赖途径途径，p53蛋白与涉 及dna合成、修复和细胞凋亡的蛋白结合形

7、成蛋白复合物，调节凋亡。)53的生 物活性与细胞凋亡的速率有直接的关联，与抑制肿瘤细胞增生、介导凋亡密切相 关，与ras基因表达的控制相关时，肿瘤细胞倾向于转为fas配体旁路介导的凋 亡1。1)53分为野生型和突变型，野生型1)53极不稳定，半衰期仅几分钟，野生型p53 在细胞dna损伤时，可使细胞停滞于g1/s期，在dna合成前进行修复。野生型i)53 可提高hcc细胞对化疗药物，如5-氟尿囉唳的敏感性，起到协同作用。野生型p53 基因导入细胞，可显著恢复hcc对化疗的敏感性。研究表明，p53促进凋亡使其 独立上调了内源性p21 ( cipl/wafl )和bax蛋白，同时激活了 p34 (

8、 cdc2 )激酶, 增加了小2蛋白的水平和磷酸化作用2。几乎所有的肿瘤都存在p53的突变，p53的突变不只是引起野生型p53蛋白的失 活，还可能产生功能不同的突变p53蛋白。突变的p53具有促进细胞转化，引起 肿瘤细胞的大量增殖，抑制细胞的凋亡。据统计p53在hcc中的突变率在(69.37 ±18.81)%,分化越差，突变率越高3,由此产生的大量突变1)53蛋白将影响 下游基因的调控，如bcl-2、bax等。lee等4 用阿霉素在含有p53三种不同状态(野生型p53、突变型p53和剔除 p53 )的肝癌细胞中做凋亡诱导实验和药物敏感实验，发现含有野生型p53的肝癌 细胞株(hepg

9、2 )的g1期阻滞发生在d0x治疗后的24h且伴随着p53蛋白的水平 随时间的上升，而剔除p53的肝癌细胞(hep3b) g2/m期的阻滞发生在用药不久 且伴随着非p53依赖性的细胞凋亡。含突变型p53的肝癌细胞(huh-7 )无论是在 g1还是g2期对d0x都是最不敏感的。可见p53通过促进细胞凋亡，对肝癌耐药 性也有逆转作用。staib等5研究发现，在hcc中高表达的hbx可抑制由p53 介导的细胞凋亡。人巨细胞病毒增强剂(adcmv-p53w)不论对全身或局部治疗hccs 突变p53的表达均有效6 。人参皂昔(ginsenoside-rs4, g-rs4 )引起的凋亡 主要是选择性地升高

10、了人类肝sk-hep-1细胞中p53蛋白的水平和p21waf1 (野生 型p53激活片段)的水平的结果7p73蛋白是第一个证明与p53同源的抑癌基因，多变量解析显示p73表达状况与预后在统计学上有明显的相关性，即阳性 者预后较差8。1. 2 fas基因fas/fasl系统是机体重要的细胞凋亡系统，它包括fas、fasl及 它们的可溶性形式sfas、sfasl。fas蛋白为i型跨膜蛋白，属于肿瘤坏死因子家 族,分为胞外区、跨膜区和胞浆区。胞外区的n端有一个约含80个氨基酸的死亡 域，与凋亡信号传导有关。fas主要以膜受体形式存在，可通过转录水平的不同 剪接产生多种可溶性fas分子(sfas),它

11、与fas较相似，但缺少跨膜结构域，与fasl结合后可对fas介导的细胞凋亡起重要的负调节作用。一般认为导致肝癌细 胞凋亡是由于fas受体的激活和之后的caspase-8的激活，或者通过fasl的上 调9,10 。部分抗肝癌药物（如干扰素）即是通过该途径11 。fas在hcc中 表达明显减少，甚至完全丧失，而且fas的表达与hcc的分化程度有关，分化程度 愈低，fas表达愈少。多数hcc对fas/fasl介导的细胞凋亡耐受，可能是hcc上 的fas表达较少，或者sfas竞争性地与fasl结合，阻断了 fas/fasl介导的细胞 凋亡。有报道hcc表达高水平的fas和fasl在同一个区域，且对fa

12、s/fasl介导 的细胞凋亡耐受12,认为可能是hcc上的fasl与抗肿瘤淋巴细胞fas结合，引 起淋巴细胞的死亡，逃脱免疫监视；fas介导的细胞凋亡受多种蛋白及酶类影响， 如肿瘤细胞上的 fas 相关磷酸脂酶-1、 flip（flice/caspase-8inhibi toryprotein ）可与 fas 受体结合，抑制 fas 介导的信 号传导。bcl-2、p53以及一些癌基因对fas也具有重要的调节作用13。1. 3bcl-2基因原癌基因bcl-2是抑制细胞凋亡的重要基因，根据在细胞凋亡 中的作用分为两大类，一类是抑制细胞凋亡（bcl-2.bcl-w.bcl-xlbfl-bbrag-b

13、 mcl-1 和 al 等），另一类为促进细胞凋亡（bax、bak、bik、bad、bcl-xs、bid 和hrk等）14 。bel-2、bcl-xl确切抗凋亡机制尚未完全明了，其可能机制：（1 ） 抑制线粒体释放促凋亡蛋白；（2）抑制促凋亡蛋白bax的细胞毒性；（3）直接的 抗氧化作用；（4）影响细胞的跨膜转运，改变钙离子分布，调节钙离子激活内切 酶和谷氨酰转移酶；（5 ） bcl-2阻止p53诱导的细胞凋亡。在多数hcc中bcl-2 高表达，其阳性率明显高于癌前组织，且hcc分化越低，bcl-2表达越高15。 chang等16 用pcdna3-bcl-2转染fas表达阳性的bcl-7404

14、肝癌细胞,过度 表达的bcl-2抑制了 fas介导的细胞凋亡，同时发现，高表达的bax并不能对抗 bcl-2对fas介导的细胞凋亡的抑制，bid是bel-2与fas凋亡途径的一个重要调 节物。bax和bid都是凋亡促进剂，bid只有bh3结构域，bax有所有的4个bii结 构域，bid和bax的bh3都能与bcl-2的bh1、bh2结合形成二聚体，但bid的c 末端与bcl-2的结合能力更强，因此bid对抗bcl-2的功能更强。其在人肝癌细 胞中保护一些特定的肿瘤细胞（如hepg2 ）免受fas介导的凋亡、抑制c-myc介 导的肝癌发生、干扰肝细胞增生17。bcl-2在急性肝炎的胆管中存在，在

15、肝癌中失表达。其高表达可导致肝癌细胞对 多种促凋亡因素如药物、y射线及cytokin等耐药，而诱导剂（天花粉、氧化碑） 通过下调肿瘤细胞bcl-2的表达诱导肝癌细胞的凋亡。bax高表达能增强由 adriamycin诱导的hcc-9204细胞的凋亡,增强细胞对凋亡的敏感性18 。1. 4 survivin基因survivin是新近发现的凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein, iap ）的新成员，与其他iap成员不同，结构独特，只含有 一个杆状病毒iap重复序列（baculovirus iap repeat ）和非锌指结构，survivin 位于人染色体17q

16、25,含有4个外显子和3个内含子，相对分子质量为25x10319 0研究发现survivin在肝癌中具有选择性表达的特性，这一特性为其在原 发性肝癌中治疗靶点作用提供了理论依据。survivin与凋亡抑制呈正相关，与预后密切相关。ikeguchi等20 对57例 hcc检测发现,41%的肝癌组织有survivin mrna的表达，其表达与年龄、性别、肿 瘤大小无关，在正常肝组织中没有检测到,survivin表达阳性的肝癌组织的凋亡 指数显著低于survivin表达阴性的肝癌组织。但是目前对survivin的功能尚存 争议。一些研究显示，survivin对细胞凋亡以及增殖并无明显影响。另外一些研

17、 究则显示，survivin具有抑制凋亡和调节细胞分裂的双重功能，有助于多种肿瘤 细胞低预各种凋亡刺激。survivin抑制凋亡的机制是通过bir功能区直接影响凋 亡信号传导通路的终末效应分子caspase-3或caspase-7的活化，从而抑制多种上 游信号所诱导的凋亡，也发现survivin抑制细胞色素c从线粒体释放，阻断上游 信号分子caspase-9的活化，从而阻断细胞凋亡信号的传导19, 27 。gaoyan等21 设计一对survivin-sirna,体外转录制备sirna,观察了应用rnai 技术靶向封闭survivin基因对肝癌细胞株hepg2增殖和凋亡的影响，细胞凋亡检 测发

18、现细胞凋亡率并无变化。而王颖等22发现不同浓度survivin sirna转 染能下调survivin蛋白和mrna表达，诱导肝癌细胞凋亡，抑制细胞增殖，增 加肝癌细胞对化疗药物的敏感性，提示采用基因技术封闭survivin蛋白表达，可 以解除survivin对凋亡的抑制作用，诱导肿瘤细胞凋亡，从而达到治疗的目的。 另外据文献报道，survivin反义核酸能够明显诱导肿瘤细胞凋亡和抑制增值，是 肿瘤反义期治疗的较理想的靶基因。chen等23发现，在smmc-7721细胞中 caspase-3的活性水平极低。这有利于肝癌细胞逃避凋亡，维持较高的增殖活性。 而在survivin as0dn转染后，

19、caspase-3活性水平呈剂量依赖性升高，说明在 smmc-7721细胞中caspase-3的低活性状态可能是由于survivin表达所致；以 as0dn封闭survivin基因表达导致的caspase-3活化，是其诱导肝癌细胞凋亡过 程中的关键环节。cheng等24发现rnai能降低smmc-7721细胞中survivin 基因表达，从而诱导细胞凋亡和抑制肿瘤细胞的生长。尽管survivin对细胞凋亡以及增殖的影响目前还存在争议，已有结果显示 survivin机制的研究有助于对肝癌细胞凋亡的认识，为抗癌治疗提供有效靶点有 着重要的意义。2调控肝癌细胞凋亡的其他因素除基因外，很多酶、信号分子

20、等参与凋亡的启动和调节，如caspase家族,tgf/tgf 受体，tnf家族，c0x-2等，调整着细胞增殖与凋亡的平衡。2.1半胱天冬酶（caspase）家族细胞凋亡的核心成分是半胱氨酸蛋白酶家族, 凋亡可能就是蛋白酶级联切割的过程。其中研究最多，功能相对较明确的为 caspase-3,是哺乳动物细胞凋亡的关键蛋白酶之一，为凋亡的效应分子，被称为 凋亡的“执行者” 25。经典的细胞凋亡途径有两条，分别是细胞外途径（细胞 表面死亡受体途径）和细胞内途径（线粒体引发途径）。在细胞外途径中，死亡信号的传导依赖于死亡配体与受体（如tnf-cx和tnfr, fasl和fas ）的结合，接着死亡受体的死

21、亡结构域（dd ）与信号传导分子（如fadd ） 结合，而fadd又可与caspase-8酶原的ded相连接，形成死亡诱导信号复合物（disc）,随之caspase-8被激活，它通过裂解bid使线粒体释放细胞色素c,或 直接作用caspase-3及其他下游的caspase。有研究显示激活的caspase-3可裂 解相应的胞核内底物dna修复酶(poly adp-r ibose polymerase, parp ),使parp 失去对dna的修复功能，导致细胞转向凋亡26。研究发现在fas介导肝癌细胞系凋亡过程中，caspase-3活性增高，使用 caspase-3抑制剂devdch0能显著抑制

22、caspase-3的活化，藉此抑制fas介导的 细胞凋亡。而ice抑制剂yvadch0则不能抑制fas介导的细胞凋亡。提示在fas 介导的人肝癌细胞系凋亡过程中，主要起作用的是caspase-3,而不是icea。于 合成紫花茄皂贰诱导人肝癌细胞株bcl-7402凋亡的体外实验中发现，紫花茄皂贰 通过上调细胞内细胞色素c的表达水平而激活caspase-3,从而导致细胞凋亡17 l nk-104是日本新近研制的第三代hmg-coa还原酶抑制剂，研究结果表明 10 pmol/lnk-104能够增强caspase-3的活性,加入mev能够消除nk-104的这 种诱导作用27。caspase可被多种物质

23、激活，一般认为化疗药物以及高渗引 起细胞凋亡大多通过激活caspase-3起作用28。低浓度的谷胱甘肽-阿霉素(gsh-dxr )比dxr更有效地引起鼠肝细胞(ah66 )的凋亡，并能提高caspase-3 大约100倍。两种药物处理12和15h后可见caspase-3的活性增加和dna的断裂29可见凋亡前各种强信号激活caspase-3是凋亡突增的必经途径。在细胞内途径中，细胞内的死亡信号，如dna损伤、毒素、bax、癌基因抑制剂、 紫外照射和atp耗竭等均可诱发线粒体释放细胞色素c( cyt c)到胞质，随即atp 依赖性激活凋亡蛋白水解酶活化因子t ( apoptot ic protea

24、se-activating factorl, apaf-1 )o在这一途径中，cyt c的释放是该调节通路中的关键事件, 它可导致由 cyt c, apaf-1 和 procaspase-9 构成的"凋亡体” (apoptosome) 形成，从而激活caspase-9。活化的caspase-9从“凋亡体”中释放出来，进 而引发caspase级联放大反应，最终导致细胞凋亡。以往研究中已证实氟尿喀唳 可诱导肝癌细胞凋亡，并有外源性通路上的相关基因参与调控。最近研究显示在 氟尿喀唳诱导肝癌细胞凋亡过程中caspase-9被活化，活性明显增强,caspase-9 抑制剂可阻断这一过程。表明c

25、aspase-9参与了氟尿喀唳诱导的肝癌细胞凋亡30。 cyt c由核基因编码，在核糖体中合成前体物阿朴细胞色素c (apocytochrome c )后转运入线粒体。diekert 等31 发现，在 apocytochrome c转运进入线粒体时需要tom复合体，并认为tom复合体是包括 apocytochrome c在内的细胞凋亡相关蛋白进入线粒体的共同通路。在三氧化二 碑(as2o3 )诱导肝癌细胞凋亡的基因分析中显示线粒体外膜受体tom20基因表达 上调。综上所述,caspase-3. caspase-9的活化被认为是细胞凋亡机制中的重要环节。 目前的关键问题是caspase-3、 c

26、aspase-9等在多种因素诱导的肝癌细胞凋亡中 是否起独立作用，其表达与肿瘤细胞的凋亡是否存在必然关系，另外，其激活机 制及联系尚未清楚，有待于我们进一步的深入研究。2. 2 坏死因 子相关 凋亡诱 导配体(tumornecrosisfac tor-re la ted apoptosis-inducing 1igand, trail ) trail 是肿瘤坏死因子(tumornecrosisfamily, tnf)家族成员,可与tnf受体超家族成员类似的胞浆 死亡结构域结合，通过死亡结构域激发和传导死亡信号，激活caspase蛋白酶级 联反应，导致细胞凋亡。trail的一个显著特点就是能在各

27、种转化细胞中选择性 导致凋亡，但在正常组织中却无此作用。在对肝癌的研究中发现，尽管大部分的人类肿瘤对trail诱导的凋亡敏感，但 hcc对trail诱导的细胞凋亡明显耐受32 otrail可以诱导nf-k b表达的增高, 后者可抗细胞的凋亡。有学者用特异性的nf-kb抑制剂sn50作用于trail诱导 的hcc细胞凋亡，发现该抑制剂对trail诱导的细胞凋亡没有多大影响，表明 trail诱导的nf- k b活性升高与trail对hcc诱导的细胞凋亡耐受并不相关联。 认为hcc对trail诱导的细胞凋亡耐受可能是肿瘤细胞内存在凋亡抑制剂，如 cfilp ( caspase8/fliceinhib

28、i tory protein, cfilp )、bcl-xk bax、bid 等33 。 也有研究发现经trail处理后，肝癌细胞出现了凋亡的同时bcl-2, bcl-xl抗凋 亡蛋白的表达均呈上升趋势，而促凋亡蛋白bax的表达却呈现出下降的趋势。深 入研究发现经trail处理后细胞的nf- k b活性明显升高，提示肝癌细胞经trail 刺激后，细胞内的n f-kb被激活，进而后者又导致了抗凋亡蛋白表达上调，促凋 亡蛋白表达下降，使得细胞具有药物抵抗性。nf-kb的蛋白酶抑制剂mg-132与 trail联合应用后细胞凋亡程度明显高于单独使用trail组，而mg-132本身并无 明显诱导凋亡的作

29、用；同时，两者联合应用后，mg-132也显著抑制了 trail刺激 细胞nf-kb活性增高的现象。进一步证明nf-kb参与了 trail诱导细胞凋亡过 程中所同时激发的细胞抵抗作用34。另外，trail在肝癌的基因治疗中可以起到旁观者效应，即可使转导目的基因的 肿瘤细胞死亡，同时又可使临近没有转导目的基因的肿瘤细胞死亡，可在相同转导 效率的情况下提高目的基因对肿瘤细胞的杀伤，在一定程度上解决目的基因转导 效率低的问题。zhang等35 发现人端粒酶逆转录酶htert干扰明显增加trail 诱导的肝癌细胞凋亡，其机制可能与procaspase-8表达增加，端粒酶活性降低和 端粒酶长度短有关，而与

30、bcl-2和bax无关，但是htert干扰后通过何种途径增 加trail抗癌活性仍然需要进一步的研究。2. 3环氧化酶-2(cycloxygenase-2, c0x-2 ) c0x-2对肿瘤的重要作用之一是抑制肿瘤细胞凋亡的发生，研究发现， c0x-2特异性抑制剂和非特异性抑制剂非辎体类抗炎药在多种肿瘤细胞包括结肠 癌、胰腺癌等均可引起凋亡36, 37 。nunez等38 也认为c0x-2促进肝癌 细胞增殖的作用是通过抑制凋亡来实现的，并指出用c0x-2抑制剂来预防和治疗 早期肝癌是有价值的，提示c0x-2在抑制肝癌细胞凋亡方面发挥重要作用。有资料表明，c0x-2的诱导和bcl-2表达增高有关

31、，用c0x-2抑制剂治疗可引起 bcl-2表达降低39 。但是kern等40 的cox-2抑制剂对人肝癌细胞凋亡诱 导的研究指出，cox-2抑制剂诱导的凋亡不依赖bcl-2, akt的磷酸化水平，而与 半胧氨酸蛋白酶caspase-9, caspase-3, caspase-6的活化有密切关系。park等41 则认为ns-398诱导hep3b肝癌细胞株的凋亡是不依赖半胱氨酸蛋白酶的 凋亡。c0x-2调节肝癌细胞凋亡的可能机制还与其下游各种前列腺素及血栓素结 合的相应受体有关，其中之一是ppar,有研究表明，ppar8的活化能诱导肝癌细 胞中cox-2基因的表达和细胞增殖，其主要机制可能是下调肿

32、瘤坏死因子。抑制 nf-kb活性，从而抑制肝细胞的凋亡42。用c0x-2抑制剂塞来西布(celecoxib)处理过的hcc细胞显示akt活性明显降 低，并且呈现出凋亡的形态和生物学特性，cox-2的过表达或外加pge1可以部分 阻止塞来考西导致的细胞凋亡43 。schmidt等44 体外实验研究中发现，联 合应用c0x-2抑制剂ns-398和mek抑制剂u0126可协同增强hep3b和hepg2肝癌 细胞的凋亡，并认为其机制是协同增加了抗凋亡蛋白bcl-xl的表达，增强了抗癌 抗菌素的作用。既往的研究普遍认为as可安全用于肿瘤的对症或辅助治疗。但流 行病学调查资料显示，as对肠道外肿瘤无明显的

33、抗癌作用。相反何志旭等45 发现，as可保护smmc7721肝癌细胞对抗过氧化物诱导的凋亡和坏死作用，其机 制与a s增加肝癌细胞铁蛋白表达有关。该结果显示as对肠道外肿瘤不但没有抗 癌功效，反而有可能对癌细胞具有保护作用，同时提示c0x-2的表达可能是该类 药物抗癌作用的前提。3结语化疗用于临床治疗肿瘤已50余年，取得了一定的疗效，但至今仍无突破性进展。 化疗作用及肿瘤耐药的分子机制至今仍不十分清楚。新近研究表明，大多数甚至 所有化疗药物均通过诱导肿瘤细胞凋亡发挥杀灭肿瘤细胞的效应。细胞凋亡对肿 瘤的发生、发展有着十分重要的作用。基因对细胞凋亡的调控是一个复杂、缜密 的系统，还有很多未知、未

34、解的机制需要进-步的探索和研究。肝癌的发生与耐药 均是因为细胞的内在凋亡机制缺陷所，肝癌细胞凋亡机制的阐明无疑会为克服化 疗耐药，改善疗效，寻找新的肿瘤治疗靶点和策略提供契机。究竟哪一条通路在 化疗诱导肝癌细胞凋亡中为主，是否两条通路都同时参与或者有其他重要的相关 因素，两条通路之间是否存在联系以及存在何种关系，均有待深入研究。随着细胞凋亡研究的深入，肝癌的发病机制将会逐步明朗，肝癌的治疗措施也 会更加完善。为研发新型肿瘤防治药物提供作用靶点和阐明药物的作用机制。从 分子水平阐明肿瘤发生，发展的机制，有助于开发完善新的检测与治疗手段。【参考文献】1 reiser m, neumann i, s

35、chmiegel w, et al. induct ion of cel 1 proliferat ion arrest and apoptosis in hepatoma cells through adenoviral mediated transfer of p53 genejournal of hepatology,2000, 32:771-782.2 hsu sl, chen mc, chon yh, et al. induction of p21 ( cipl/waf1 ) and activation of p34 (cde2 ) involved in retinoic aci

36、d induced apoptosis in human hepatoma hep3b cells. experimental cel 1 res,1999, 248: 87-96.3 xiao eh, li jq, huang jf. effects of p53 on apoptosis and prol iferat ion of hepatocellular carcinoma cells treated withtr an scatheter arterial chemoembol izat ion. world j gastroenterol, 2004, 10 ( 2 ): 19

37、0-194.4 terence kin-wah lee, tracy ching-man lau, irene oilinng. doxorubicin-induced apoptosis and chemosens i t ivi tyin hepatoma cel 1 1ines cancer chemother pharmacol,2002, 49:78-86.5 staib f, hussain sp, hofseth lj, et al. tp53 and 1 iver carcinogenesis.hum mutat, 2003, 21 ( 3) : 201-216.6 choi

38、jy, park ym, byun bh, et al. adenovirus mediated p53 tumor suppressor gene therapy against subcutaneous huh7 bepatoma cel 1 1 ine nodule of nude mice journal of korean medical science , 1999 , 14 ( 3 ) : 271-2767 kims e, lee yh, park j h, et al. ginsenoside rs4,a new type of ginseng saponin concurre

39、ntly induces apoptosis and selectively elevates protein levels of p53 and p21wafl in human hepatoma sk hep 1 cel is.eur j cancer, 1999, 35: 507-511.8 tannapfel a, wasner mk, rause k, et al. expression of p73 and its relation to histopathology and prognosis in hepatocellular careinoma. journal of the

40、 national cancer institute, 1999, 91: 1154-1158.9 castaneda f, kime rk. apoptosis induced in hepg2 cells by short exposure to mi 11imolar concentrations of ethanol involves the fas receptor pathway.j cancerres cl in oncol, 2001, 127:418-424.10 eichhorst st, muller m, li weber m. a novel ap-1 element

41、 in the cd95 ligand promoter is required for induction of apoptosis in hepatocellular carcinoma cel is upon treatment with anticancer drugs. mol cel 1 bio, 2000, 20: 7826-7837.11 shin ec, shin wc, choi y, et al. effect of interferon gamma on the susceptibility to fas ( cd95/apo 1 ) mediated cel 1 de

42、ath in human hepatoma cells. cancer immunology immunotherapy, 2001, 50 ( 1 ) : 23-30.12 patel t. i mm une escape in hepatocellular can cer: is a good offense the best defense hepatology, 1999, 30 ( 2 ): 576-578.13 shin ec, seong yr, kim ch, et al. human hepatocel lular carcinoma cel is resist to tra

43、il-induced apoptosis, and the resistance is abolished by cisplatin. exp mol med, 2002, 34 ( 2 ) : 114-122.14 power c,fanning n, redmond hp.cellular apoptosis and organ injury in sepsis:a r eview. shock, 2002,18 ( 3 ) :197-211.15 guoxz, shao xd, liu mp, et al. effect of bax, bcl-2 and bcl-xl on regul

44、ating apoptos is in tissues of normal 1iver and hepatocellular carcinoma. world j gastroenterol 2002, 8 ( 6 ) : 1059-1062.16 chang yc,xu yh. expression of bcl-2 inhibited fas-mediated apoptosisin human hepatocellular carcinoma bel-7404 cel is.cel 1 res, 2000,10(3 ) : 233-242.17马朋，曹同涛，顾国峰，等合成紫花茄皂贰诱导人

45、肝癌细胞株bcl-7402凋亡 的作用机制癌症, 2006, 25 ( 4 ) : 438-442.18 zheng jian-yong? li jiang, li kai-zong. bax over expression enhances apoptosis induced by adriamycin in hcc-9204 cel is. chinese journal of cancer research, 2004, 16 ( 3 ) : 157-161 19 kishi h, igawa m, kikuno n, et al. expression of the surviving

46、 gene in prostate cancer: correlation with clinicopathological characteristics, proliferative activity and apoptosisj urol, 2004, 171 ( 5 ) : 1855-1860.20 ikeguchi m, ueda t, sakatani t, et al. expression of surviving messenger rna correlates with poor prognosis in patients with hepatocellular carci

47、noma. diagn mol pathol, 2002, 11 ( 1 ) : 33-40.21 gao yan, du j i-hui, liang dan-long. the effect of surviving gene si lencing mediated by rna interferenee on apoptosis and proliferat ion in hepatoceellular carcinoma cell line hepg2.clin digest, 2007, 19 ( 3 ) : 8822 wang y, cai gx, wu l. sirna targ

48、eting survivin inducing liver cancer cel 1 apoptosis. herald of medicine, 2006,25 (7 ) :648-652.23 chen tao, tian fu-zhou, cai zhong-hong, et al. changes of hepatocellular carcinoma cel 1 structures during apoptosis induced by murvivinantisense oligonucleotide.chin j gen surg, 2003, 18 ( 11 ) : 676-

49、679.24 sheng-quan cheng, wen-1 iang wang, wei yan, et al. knockdown of survivin gene expression by rnai induces apoptosis in human hepatocellular carcinoma cell 1 ine smmc-7721. world j gstruenterol , 2005, 11 ( 5 ) : 756-759.25 hara a? yashimi n, yamada y, et al. effects of fas mediated 1 iver cel

50、1 apoptosis on diethylnieosamine-indueed hepatocarcinogenes is in mice. br j cancer, 2000,82:467-471 26 shin ec, shin wc, choi y，et al. effect of interferon gamma on the suseept ibi1i ty to fas ( cd95/apo1 ) mediated cel 1 death in human hepatoma cells.cancer immunology lmmunotherapy， 2001，50:23-30.

51、27 ju-yong wang, zhen-ye xu. effects of nk-104 on apoptosis and caspase-3 activity in hepatocellular carcinoma cel is. journal of chinese integrative medicine, 2007, 5 ( 3 ) : 298-301.28 chan wh, yu js, yang sd. pak2 is cleaved and activated during hyperosmotic shock induced apoptosis via a caspaac

52、dependent mechanism: evidence for the involvement of oxidative streas< journal of cellular physiology, 1999 , 178: 397-408.29 asakura t? sawai t? hashidume y, et al. caspase 3aet ivat ion during apoptosis caused by glutathione doxorubicin conjugate. br j cancer, 1999,80:711-715.30杨建青，黄柏英，吕新生，等.ca

53、spase-9在氟尿囉唳诱导的肝癌细胞凋亡中的 作用.中国普通外科杂志, 2003, 3: 173-175.31 diekert k, de kroon al, aht ing u. apocytochrome c requires the tom complex for translocation across the mitochondrial outer membrane. embo j, 2001, 20: 5626 - 5635.32 lee sh, shin ms, lee hs, et al. expression of fas and fas-related molecules

54、 in human hepatocellular carcinoma. hum pathol, 2001, 32 ( 3 ): 250-256.33 chen xp, he sq, wang hp, et al. expression of tnf related apoptosis-inducing ligand receptors and antitumor tumor effects of tnf-related apoptosis-inducing ligand in human hepatocel lular carci no ma. world j gastroenterol, 2

55、003, 9 ( 11 ): 2433-2440.34 yu m, li q, hao jh, et al. role of nf- k b in induction of apoptosis of hepatocellular caocinoma cel is wi th trail. chin j hepatobi 1 iary surg, 2006, 12 ( 12 ) : 850-853.35 zhang ru-gang, fang dian-chun, ning xiao-yan, et al. mechanism of human reverse transcriptase rnai which increases hepatocellular carcinoma cel 1 apoptosis induced by trail. chin j hepatol, 2007, 15 ( 1 ) : 32-36.36 sun y , tang x m, half e , et al. cyclooxygenase-2 over expression reduces a poptotic susceptibil