土壤过氧化氢酶的测定方法

1、T/NAIA XXXX2020B10团体标准T/NAIA XXXX2020土壤过氧化氢酶活性的测定（高锰酸钾滴定法）2020-XX-XX发布2020-XX-XX实施宁夏化学分析测试协会发 布T/NAIA XXXX2020前 言本标准按照GB/T 1.1-2009标准化工作导则第 1 部分：标准的结构和编写规定编写。本标准由宁夏昊标检测服务研究院（有限公司）提出。本标准由宁夏化学分析测试协会归口。本标准起草单位：宁夏昊标检测服务研究院（有限公司）、宁夏大学、宁夏农林科学院荒漠所、银川能源学院、宁夏化学分析测试协会。本标准主要起草人：任亚丽、白玲、张亮亮、卜姣姣、杨洁、季波、鲁静、张小飞、刘娜娜。

2、本标准于 2020 年 XX月 XX 日首次发布。T/NAIA XXXX2020土壤过氧化氢酶的测定（高锰酸钾滴定法）1 范围本标准规定了土壤过氧化氢酶的测定方法（高锰酸钾滴定法）。本标准适用于各类土壤过氧化氢酶的测定（高锰酸钾滴定法）。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的应用文件， 仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 601 化学试剂标准滴定溶液的制备GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法NY/T 1121.1土壤检测第一部分：土壤样品的采集、处理和贮存3 原理在 4 条件下，土

3、壤过氧化氢酶酶促分解过氧化氢，用高锰酸钾标准溶液滴定反应剩余过氧化氢，所消耗的高锰酸钾标准溶液体积数来表示过氧化氢酶的活性。4 试剂和溶液除非另有说明外，本方法均使用符合国家标准的分析纯试剂，分析用水为规定的三级水。GB/T 66824.1甲苯 （C7H8）。4.2浓硫酸（H2SO4）。4.3过氧化氢（H 2O2）。4.44高锰酸钾（K 2MnO）。4.5硫酸溶液（ 0.2mol/L ）准确移取 5.43mL浓硫酸， 缓缓注入400 mL水中，冷却后用水定容至 500 mL。置于 4 冰箱贮存。4.6高锰酸钾标准溶液c（1/54）=K2MnO0.1 mol/L称取 3.3 g（精确至0.000

4、1g ）高锰酸钾，溶于1050 mL 水中，缓缓煮沸15 min，冷却，于暗处放置两周，过滤。贮存于棕色瓶中，并按照GB/T 601 对其进行标定。4.7过氧化氢水溶液（3%）准确量取 30 % 过氧化氢溶液25 mL，用水定容至250 mL，配成 3%过氧化氢水溶液，置T/NAIA XXXX2020于 4冰箱贮存，临用时用0.1 mol/L 高锰酸钾标准溶液（ 4.6 ）标定。准确吸取1.00 mL3 %过氧化氢溶液于 50mL三角瓶中，加入 5 mL水，5 mL 0.2mol/L 的硫酸溶液（ 4.5 ），用 0.1 mol/L 的高锰酸钾标准溶液（ 4.6 ）标定，所消耗的体积数为16.

5、51 mL。备注：由于不同批次的过氧化氢浓度存在差异，因此需要每次滴定前标定， 若消耗高锰酸钾标准溶液（ 4.6 ）的体积大于或小于16.51 mL时，说明过氧化氢的实际浓度大于或小于3 %，这种情况就要重新配制过氧化氢溶液重新标定，直到过氧化氢实际浓度等于3 %时才能使用。5 仪器设备5.1电子天平:感量 0.0001g 。5.2冰箱 （4 ）。5.3酸式 滴定管。6 操作步骤分别称取 5 g（精确至0.0001g ）土壤（如含量高可适当减少称样量）样品于具塞三角瓶中（用不加土样的作空白对照） ，加入 0.5 mL甲苯（4.1 ），摇匀，于 4 冰箱中放置30 min。取出，立刻加入 25

6、mL4 冰箱贮存的3 %过氧化氢水溶液 （4.7 ），充分混匀后， 再置于 4 冰箱中放置 1 h。取出，迅速加入 25mL贮存于4 冰箱的 0.2 mol/L 硫酸溶液（ 4.5 ），摇匀后过滤。准确吸取1.00 mL滤液于 50 mL 三角瓶中，加入5 mL水和 5 mL 0.2 mol/L硫酸溶液（ 4.5 ），用 0.1 mol/L 高锰酸钾标准溶液（ 4.6 ）滴定，滴定至紫色褪去出现浅粉色为终点。 根据空白和样品的滴定差，求出相当于分解过氧化氢的量所消耗的高锰酸钾标准溶液（ 4.6 ）。7 结果计算过氧化氢酶活性以1 h，1 g 风干土壤所消耗0.1mol/L 高锰酸钾标准溶液的体积数来表示，按式（ 1）计算：(V0 V)T(1)Xfm高锰酸钾滴定度的矫正值，按式（2）计算：c（1/ 5KM nO4 )T( 2)0.025式中：X 过氧化氢酶活性，单位为毫升每克每小时（ mL/g·h） ；V0空白所消耗的高锰酸钾标准溶液的滴定体积，单位为毫升（mL）；V 样品所消耗的高锰酸钾标准溶液的滴定体积，单位为毫升（mL） ；T 高锰酸钾滴定度的矫正值；