血红蛋白电泳及临床意义

1、血红蛋白电泳及临床意乂咎昕(黑龙江省鹤岗市人民医院154101)【关键词】血红蛋白 电泳 临床意义【中图分类号】r443+.8【文献标识码】a【文章编号】2095-1752 (2013) 30-0164-01血红蛋白电泳可以将血红蛋白中各正常成分或异常成分分离，以便进一 步鉴定或定量测定。用等电聚焦毛细管电泳(cief)和区带电泳(cze)可分离出十几 种hb变异链，有作者釆用cze法对正常人和地中海贫血患者血液样品在ph 11.8 碱性磷酸盐缓冲液(pbs)中进行分离，分离的速度很快(<8分钟)，两者的电泳图 谱明显不同。对胎儿红细胞处理后，分离其血红蛋白，可分离dj&

2、alpha;> β 和γ几种球蛋白链，如采用低ph 3.2的缓冲液，虽然分析时间延长，但变 异体的分辨效果更佳。显然ce技术对鉴别诊断血红蛋白病起重要作用。1材料与方法1.1检测对象 收集2011年1月2012年12月受检300例均为门诊 进行婚前检查或前前检查人员。其中男60例，女240例，年龄2235岁，平均 为29岁。1.2方法 电泳槽中的阳极注入ph9.1的tris缓冲溶液，阴极注入 ph8.6的巴比妥缓冲溶液，要求两极液面尽量成同一水平。把醋酸纤维素薄膜裁 成4cm×12cm大小，浸入薄膜浸泡液中lomin左右，取出，用

3、滤纸吸去多 余浸泡液，把薄膜粗面朝上，贴在电泳槽支架上，用两层纱布搭桥，不接通电源， 自由平衡5mino用血红蛋白吸管吸取23μ浓度为1 80100g/l的血红蛋白 溶液，放在盖玻片边缘(盖玻片长约lcm),把血红蛋白液用盖玻片印在醋酸纤维 素薄膜靠阴极一端约1.5cm处(薄膜下衬一片干燥滤纸,吸去多余的血红蛋白液), 同时用正常人血红蛋白液作对照。接通电源，平衡5min,电压调至150v,电流 量约为0.2ma/cm簿膜宽，电泳1520mino电泳完毕后，取下薄膜条，置于氨 基黑10b染色液里染色lomin,取出，用漂洗液漂洗，换液数次，直至薄膜条洁 白为止。2结果在ph 8.

4、6或ph 8.8电泳吋，正常人的血红蛋白a及血红蛋白a2都向正 极方向泳动，血红蛋ha在前，血红蛋白a2在后。但血红蛋hf与血红蛋ha 的位置很靠近，难以准确地分离和定量，可作lmin碱变性试验，来测定血红蛋 白f。300例血红蛋白电泳结果中检验异常96例，hba2的平均值为2.3%；范围 在1.1%3.2%之间。hba2增高是β轻型地中海贫血的一个重要特征。缺铁 性贫血及其他血红蛋白合成障碍性疾病。3讨论异常血红蛋白分子的结构改变使其等电点发生变化，在电泳吋其泳动速 度与正常血红蛋白不同。一般用以检出各种异常血红蛋白的主要电泳方法是在 ph 8.6或ph 8.8条件下进行，

5、有吋需要用ph 7.0、6.8、6.5或6.25的条件作进一 步的鉴别。作为电泳支持物可采用层析滤纸、醋酸纤维素薄膜、淀粉胶、淀粉板 或琼脂胶，不同支持物的电泳各有其特点，可根据需要选择。在ph 8.6或ph 8.8碱性缓冲液中电泳时，各种血红蛋白都向阳极泳动， 按其泳速可大致分为6组。血红蛋白e：血红蛋白e泳速与血红蛋白a2相等。 在患者的血红蛋白中血红蛋白e的含量超过20%。虽然血红蛋白c的泳速与血 红蛋白a2很接近，在此电泳中不能分离，但可进一步作ph 6.25琼脂电泳加以 区别，这吋血红蛋白e与血红蛋a a2电泳位置相同，而与血红蛋白c分离。血 红蛋白s在碱性条件下，电泳速度与异常血红

6、蛋白s相同或接近的异常血红蛋白 有血红蛋白d、血红蛋白g以及某些不稳定血红蛋白（如zürich等），但它 们的镰变试验阴性及还原血红蛋白溶解度正常，而血红蛋白s的镰变试验阳性及 还原血红蛋白溶解度降低，可加以区别2。血红蛋白g的泳速较血红蛋白d快。 不稳定血红蛋白可进行热不稳定试验加以确诊。测定血红蛋白f是诊断重型和中 间型地中海贫血的重要依据。淀粉板电泳可以分清血红蛋白f与血红蛋白a两条 区带，定量测定结果与抗碱血红蛋白测定结果相似。血红蛋白h：进行电泳时, 可以出现一条快速的异常血红蛋白区带，在ph 6.5淀粉胶电泳中该区带仍向阳 极移动，结合h包涵体阳性，可以确诊为血红蛋白h病。血红蛋白h的等屯点 是ph5.6o在ph 6.5或ph 6.8的条件下，血红蛋白h向正极泳动，而其他血红 蛋白则向负极泳动，这对进一步鉴定血红蛋白h有特定意义。血红蛋白m经转 变为氧化高铁血红蛋h m后，在ph6.8条件下可与血红蛋白a分开。利用ph 6.8 电泳，还可以分离血红蛋白e与血红蛋白a2及过筛不稳定血红蛋白。在ph 8.6 条件下，有几种异常血红蛋白的泳速相同或接近。在ph 6.25吋，可进一步区 分。例如，将血红蛋h s与血红蛋白d及血红蛋白g分开；将血红蛋hc与血 红蛋白0、血红蛋白e及血红蛋白a2分开；又可将血红蛋白0与血红蛋白c、 血