绿原酸对Aβ引起小脑颗粒细胞损伤保护作用

1、绿原酸对ab引起小脑颗粒细胞损伤保护作用【摘 要】目的：探讨绿原酸对淀粉样b蛋白(amyloid beta-protein, ab)引起的小脑颗粒细胞损伤 的保护作用。方法：体外培养小脑颗粒细胞和腹腔巨噬细胞, 将经过10umol/l ab预处理48h的巨噬细胞上清液移入神 经细胞中，同时加200 umol/l的绿原酸。培养2天后，采 用mtt法、western bolt和乳酸脱氢酶检测试剂盒检测细胞 活性、微管相关蛋白 -2 ( microtubule- associated protein-2 , map-2 )表达水平和乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase, ldh)漏出

2、量。结果：将ab预处理的巨 噬细胞上清液移入到单独培养的小脑颗粒细胞48h后，可使 小脑颗粒细胞活性明显降低，仅为正常的28. 35%,加入绿原 酸后，细胞活性明显增加达到正常的75. 82%(p2. 3乳酸脱氢酶检测在正常培养的神经细胞中，乳酸脱氢酶的量 只有802nkat/l,但在正常培养的神经细胞+巨噬细胞上清液 组中，乳酸脱氢酶漏出量显著升高，达到3046 nkat/l,说 明神经细胞在加入经ab诱导后的巨噬细胞的培养上清液 后，大量的神经细胞受损，导致大量的乳酸脱氢酶的漏出， 而同时加入绿原酸后，在很大程度上可以减少由巨噬细胞上 清液引起的神经细胞膜的损伤，对神经细胞起到明显的保护

3、作用（表2）。3讨论阿尔茨海默病是以进行性痴呆为主要临床特征的神经 系统退行性疾病，其病理特征是大脑皮质和海马区域出现神 经元缺失、神经炎性斑块和神经原纤维缠结。阿尔茨海默病 造成神经元丧失的主要机制是细胞凋亡。许多学者研究表 明，ab对神经细胞没有直接毒性作用，在纯海马神经细胞 培养中加入ab,并未出现对神经细胞的杀伤作用4。作者 对此也进行了初步研究，单独培养的神经细胞中加入ab, 只见少量的神经细胞死亡，而经ab孵育的巨噬细胞的上清 液能引起大量的神经细胞凋亡。这些结果表明，ab通过激 活巨噬细胞，使其释放一些细胞因子，进一步导致神经细胞 的凋亡。在单独培养的神经细胞中也出现少量的细胞凋

4、亡， 因为在培养神经细胞的过程中即使加入阿糖胞昔，以抑制胶 质细胞的生长，但神经细胞不能达到完全纯化，胶质细胞仍 存在一定的活性。因此实验中采用ab预处理巨噬细胞，再 将上清液加入神经细胞培养基中用以模拟体内的生理状态。绿原酸是从中药杜仲中提取出来的主要活性成分。具有 抗炎、抗氧化、抑制氨基酸代谢等药理作用5。它能直接 对抗炎症介质的作用，降低炎症组织中前列腺素e2的释放 量，抑制炎症渗出，从而抑制随后产生的炎症反应。有研究 报道，绿原酸的抗炎作用的位点可能是小胶质细胞。本实验 结果显示，加入绿原酸组的乳酸脱氢酶漏出量较ab预处理 巨噬细胞上清组明显减少，对ab引起的神经细胞膜损伤具 有保护作

5、用；map-2是细胞骨架中微管的重要组成成分之一, 是神经细胞中的标志性微管相关蛋白，分布于胞体、树突及 轴突中。map-2可反映神经细胞的存活状态和功能，其变化 可代表神经细胞病变。应用经ab预处理的巨噬细胞上清可 引起神经细胞的微管相关蛋白-2表达明显减少；但在加入巨 噬细胞上清液的同时加入绿原酸后，小脑颗粒细胞map-2表 达明显增加，说明绿原酸能够抑制ab引起的神经细胞膜损 伤和神经细胞的死亡，对神经细胞具有保护作用。参考文献：1 王抒，孙兰，杜冠华.p38mapk-控制阿尔采末病进 程的新靶点j.中国药理学通报，2004； 20 (5)： 595-8.2 刘军，刘岚，曹志中，等.肿瘤坏死因子对创伤后 牙髓组织修复的调节作用j.中国临床康复，2004. 8 (5)： 860-1.3 乌兰，张泽生.金银花中绿原酸的提取及检测j. 食品科学，2011, 29 (6)： 130-134.4 戚向阳，张声华，陆彩玲等杜仲叶中绿原酸的提 取分离研究