期叶皂苷对大鼠体外培养神经元影响和其和TGF—β1关系

1、期叶皂昔对大鼠体外培养神经元影响和其和tgf p 1关系【摘要】目的：探讨七叶皂昔对sd大鼠大脑皮 质体外培养神经元生长的影响及其与转化生长因子 （transforming growth factor bl, tgf-bl）的关系。 方法：取新生sd大鼠胚胎大脑皮质进行神经元原代培养， 随机分为正常组（a组）、对照组（b组）、七叶皂昔组（c组）, c组加入20 mg/ml七叶皂昔（生理盐水稀释），b组加入等 量生理盐水，a组不作任何处理，各组又分为24 h、48 h亚 组。采集各时间点图像后采用rt-pcr检测tgf-b 1 mrna的 表达。采用mtt检测细胞活力。结果：a、b组各时间点细胞

2、 数、胞体面积、突起长度及细胞活力无明显差异（p>0.05）, 但a、b组均有随时间点延长，四个指标上调的时间点（p< 0. 05）, c组四个指标均较a、b组升高（p<0. 05）o rt-pcr： tgf-bl mrna在a、b组各时间点之间无差异（p>0. 05）, c 组各时间点较a、b组上调（p<0. 05）,但随时间延长，组 内比较无统计学意义（p>0. 05）.结论：七叶皂昔可促进 sd大鼠脑源性神经元的存活、生长，其机制可能是通过上调 tgf-b 1的表达.【关键词】七叶皂昔；大鼠；神经元；转化生长因子b 1 【中图分类号】r651【文献标识

3、码】a【文章编号】10047484 （2013） 11005402中药是祖国传统医学中的瑰宝，在各种临床治疗中起到 了极大的作用。研究发现，七叶皂昔对中枢及外周神经系统 疾病有治疗的作用，本实验拟通过体外原代培养sd大鼠大 脑皮质神经元，采用七叶皂昔进行干预，同时调查tgf-b1 的变化及变化。1材料与方法1. 1所需的试剂注射用七叶皂昔钠（批号：1302014,公司：山东绿叶 制药股份有限公司）。mtt （货号:11684817910, roche）o revertaidtm first strand cdna synthesis kit、pcr master mix kit （货号：k16

4、21, fermentas 公司）。dna marker dna 上样缓冲液.trizol （molecular reseach center）等， 均由大连宝生物公司合成.1.2细胞培养及其分组怀孕sd大鼠购自昆明医科大学动物科，取其胚胎大脑 皮质，放入d12中，离心，弃上清。加500 ul木瓜蛋白酶 和500 ul dna酶，消化15 mine胎牛血清终止消化，离心 5 min。滤网过滤收集液，离心弃上清。换神经元培养液， 放入包被好的培养板中（24孔板及96孔板），37°c, 5%c02 培养。调整细胞密度为0.5x109/l,改加b27无血清培养液（含 98%neurobas

5、al+2%b27+0. 5 mmol/l l-谷氨酰胺+0. 1 u/l 青、链霉素）。1.3神经元生长情况观察随机抽取5孔，在leica倒置显微镜成像系统20倍镜 下采集图片，每孔采集左上、右上、中、左下、右下方5个 视野.计数每个视野中神经元数目。1.4 mtt法检测神经元生长活力96孔板每孔加入10 ul mtt溶液（5 mg/ml,用生理盐 水稀释），继续培养4 h。若药物与mtt能够反应，可先离心 后弃去培养液，小心用pbs冲2-3遍后，再加入含mtt的培 养液。终止培养，准备溶解结晶。同时设置调零孔（培养基、 mtt、dms0）,对照孔（神经元、七叶皂昔、培养液、mtt、 dms0）o1. 5 rt-pcr扩增目的基因采用triz0l消化神经元，用triz0l试剂盒提取总rna, 1. 5%甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测rna的完整性，紫外线透 射分析仪上观察电