第七章平面色谱

1、1第六章第六章 色层分离法色层分离法19世纪中叶已有人做过这世纪中叶已有人做过这样或那样的色层分离实验样或那样的色层分离实验,但系但系统地研究和介绍色层分离法的统地研究和介绍色层分离法的,一般公认最早的为俄国植物学一般公认最早的为俄国植物学家家M茨维特。茨维特。2叶绿素的石油叶绿素的石油醚溶液醚溶液19061906年年俄国植物学家俄国植物学家Michael Tswett洗脱洗脱3气 -液气 液 色 层 分 离 法气 -固气 固 色 层 分 离 法气 相 色 谱液 -液液 液 色 层 分 离 法液 -固液 固 色 层 分 离 法液 相 色 谱色 层 分 离 法按流动相分类按流动相分类4分 配 色

2、 谱 法吸 附 色 谱 法离 子 交 换 色 谱 法色 谱 法按原理分类按原理分类纸色层：纸色层：滤纸吸附的水作固定相，有机溶剂作流动相。滤纸吸附的水作固定相，有机溶剂作流动相。薄层色谱：薄层色谱：把吸附剂粉末舖成薄层作为固定相。把吸附剂粉末舖成薄层作为固定相。本章仅讨论本章仅讨论纸色层、薄层色谱法纸色层、薄层色谱法。5一、纸色层一、纸色层 微量操作技术，简单、分离效率高、微量操作技术，简单、分离效率高、但分离速度慢但分离速度慢、基本原理、基本原理纸色层纸色层纸上萃取色谱，它和萃取一样，纸上萃取色谱，它和萃取一样，它也是根据不同物质在两相间的分配比不同它也是根据不同物质在两相间的分配比不同而进

3、行分离的（相当于逆流萃取）。而进行分离的（相当于逆流萃取）。61.层析缸 2.滤纸 3.原点 4.展开剂 5.前沿 6.7.斑点123456737xy2. 比移值比移值Rf组份分离后组份分离后,它们在滤纸上它们在滤纸上的位置用比移值的位置用比移值Rf表示表示.定义定义:yx8 Rf Rf的大小取决于溶质在二相间的分配系数及滤纸的的大小取决于溶质在二相间的分配系数及滤纸的性质性质. . 不同的组分具有不同的分配系数不同的组分具有不同的分配系数, , 因而也就有不因而也就有不同的同的RfRf. . 这就是定性的依据这就是定性的依据. .3. 影响影响Rf的因素的因素(1). (1). 欲分离物的本

4、性欲分离物的本性: :物质在两相的分配系数物质在两相的分配系数, ,决定了它决定了它 的的RfRf大小大小; ;(2). (2). 层析溶剂层析溶剂: :同一组分在不同溶剂中同一组分在不同溶剂中RfRf不同。通常应选不同。通常应选这样的层析剂，使溶质的这样的层析剂，使溶质的RfRf在在0.05 0.05 0.85 0.85之间之间, ,不同不同组分的组分的RfRf差值差值0.05.0.05.9(3). (3). pHpH: :影响它们的存在状态影响它们的存在状态 (4). (4). 滤纸滤纸: :质地均一、厚薄适当、具有一定机械强度、质地均一、厚薄适当、具有一定机械强度、 不含杂质不含杂质(5

5、). 5). 温度温度: :在层析缸中用红外灯照射。温度会影响溶质在层析缸中用红外灯照射。温度会影响溶质 的分配系数及流动相的扩散速度。层析操作应在恒的分配系数及流动相的扩散速度。层析操作应在恒 温下进行，温度不超过温下进行，温度不超过 0.5 0.5o oC C(6). (6). 展开方式展开方式: :展开方式不同展开方式不同, ,RfRf也不同。下行法的也不同。下行法的RfRf最最 大，上行法的大，上行法的RfRf较小，环行法的较小，环行法的 RfRf也不大。也不大。104. 操作技术操作技术(1). 滤纸滤纸(担体担体)滤纸的选择滤纸的选择 a. 要求滤纸质地均匀、平整无折痕边缘整齐要求

6、滤纸质地均匀、平整无折痕边缘整齐 b. 要求滤纸的纤维松紧适宜要求滤纸的纤维松紧适宜 c. 滤纸的杂质含量少滤纸的杂质含量少11B.层析滤纸的性能与规格层析滤纸的性能与规格型号纸重g /m2厚度(mm)吸水性( 30min内水上升mm)灰分g /m2性能1900.17150 1200.08快速2900.17120 900.08中速3900.1590 600.08慢速41800,34151 1210.08快速51800.32120 910.08中速61800.3090 600.08慢速12C.滤纸的处理滤纸的处理 以以0.1 0.4 mol/L HCl (或或 2 mol/L HAc)浸泡浸泡数

7、小时数小时, 除去无机杂质后除去无机杂质后, 取出用蒸馏水洗净取出用蒸馏水洗净, 再将滤纸放在丙酮再将滤纸放在丙酮-乙醇乙醇( 1 : 1 )中浸泡一周时间中浸泡一周时间, 除去有机杂质除去有机杂质, 再取出风干备用再取出风干备用.13 固定相固定相 纸层析纸层析以吸着在纤维素上的水作固定相。以吸着在纤维素上的水作固定相。反相纸层析反相纸层析用甲酰胺、二甲基甲酰胺、用甲酰胺、二甲基甲酰胺、 丙二醇等作固定相。丙二醇等作固定相。 若分离芳香油等非极性物，以石蜡油、若分离芳香油等非极性物，以石蜡油、 硅油作固定相。硅油作固定相。(2). 试样试样 A.试样的溶解试样的溶解 ：尽量避免用水。一般用乙

8、醇、尽量避免用水。一般用乙醇、 丙酮、氯仿等，最好采用与展开剂极性相丙酮、氯仿等，最好采用与展开剂极性相 似的溶剂。液体样，直接点样。似的溶剂。液体样，直接点样。14点样方法点样方法a先用铅笔在距纸条一端先用铅笔在距纸条一端2 3 cm处划一条直线（起始线）并处划一条直线（起始线）并在线上隔一定距离划一在线上隔一定距离划一“x”号表示点样位置；见下示意图：号表示点样位置；见下示意图：15b.点样工具：点样工具：微量注射器、毛细滴管（微量注射器、毛细滴管（0.5 mm) ；c.点样方法：点样方法：用点样工具吸取试液轻轻与用点样工具吸取试液轻轻与“x”号接触，号接触，使点样的斑点直径为使点样的斑点

9、直径为0.2 0.5 cm, 每次点样每次点样2 20 l于滤纸于滤纸上，以冷风吹干；上，以冷风吹干；d. 干后干后，将纸的两边用线缝好，以圆筒形式置于层析缸将纸的两边用线缝好，以圆筒形式置于层析缸中展开。中展开。16C. 展开展开 a. 展开剂展开剂v 展开剂的选择：展开剂的选择： 欲分离物在两相中的溶解度；欲分离物在两相中的溶解度； 展开剂的极性展开剂的极性 展开剂与欲分离物间应无化学反应展开剂与欲分离物间应无化学反应 欲分离物在展开剂中的分配系数最好不受温度欲分离物在展开剂中的分配系数最好不受温度的影响的影响 欲分离物在两相间的分配平衡瞬间达到欲分离物在两相间的分配平衡瞬间达到17v 展

10、开剂展开剂 水饱和的正丁醇、正戊醇、水饱和的正丁醇、正戊醇、酚酚、四氯化碳、氯仿、苯、四氯化碳、氯仿、苯、丁酮、丁酮、丙酮、有机酸、有机碱，有时也加入一定比例的无丙酮、有机酸、有机碱，有时也加入一定比例的无机酸、无机碱、甲醇、乙醇等机酸、无机碱、甲醇、乙醇等b.展层方法展层方法：展层前，层析缸与已点样滤纸必须予先经水：展层前，层析缸与已点样滤纸必须予先经水蒸汽、溶剂蒸气饱和。方法：将溶剂和水置于分液漏斗中充蒸汽、溶剂蒸气饱和。方法：将溶剂和水置于分液漏斗中充分振荡，分层后，将水层放入小烧杯内，置于层析缸中平衡分振荡，分层后，将水层放入小烧杯内，置于层析缸中平衡一段时间，使滤纸吸饱蒸汽，然后移去

11、小烧杯，将溶剂倒入一段时间，使滤纸吸饱蒸汽，然后移去小烧杯，将溶剂倒入溶剂槽中，立即将点好样的滤纸的一端浸入溶剂槽内展层。溶剂槽中，立即将点好样的滤纸的一端浸入溶剂槽内展层。18上行法上行法将点有试样的滤纸条的将点有试样的滤纸条的下端浸入溶剂（但不能浸没下端浸入溶剂（但不能浸没点样处）上端固定在层析缸点样处）上端固定在层析缸的上部，保持垂直，将缸密的上部，保持垂直，将缸密闭，使溶剂沿下端上升而展闭，使溶剂沿下端上升而展层。待溶液上升到距离纸上层。待溶液上升到距离纸上端端3 4 cm 3 4 cm 时，将滤纸取出，时，将滤纸取出，用铅笔在溶剂前沿处画线作用铅笔在溶剂前沿处画线作记号（见右图）记号

12、（见右图）19玻片玻片玻璃棒玻璃棒原点原点玻皿玻皿剪成锯齿状，便于溶剂滴下剪成锯齿状，便于溶剂滴下下行法下行法 溶剂自纸的溶剂自纸的上端向下降（借上端向下降（借助于重力的作助于重力的作用），具有分离用），具有分离速度快及连续挥速度快及连续挥发色谱的优点。发色谱的优点。20 环行法环行法 又叫径向色谱法。这是一种既快又方便的方法。取一张圆形又叫径向色谱法。这是一种既快又方便的方法。取一张圆形滤纸在直径的两边各画两根平行线，用剪刀沿这两根线剪至圆滤纸在直径的两边各画两根平行线，用剪刀沿这两根线剪至圆心处，在纸的中央滴上试液，干后，将滤纸夹在两个大小相同心处，在纸的中央滴上试液，干后，将滤纸夹在两个

13、大小相同培养皿之间，使剪开的纸条的尾端浸入流动相。培养皿之间，使剪开的纸条的尾端浸入流动相。21 双向展开法双向展开法有时用一种溶剂不能将样品中组份分开时，可以试用双向展有时用一种溶剂不能将样品中组份分开时，可以试用双向展开法。该法是用正方形或长方形滤纸，在纸的一角上点样，先用开法。该法是用正方形或长方形滤纸，在纸的一角上点样，先用一种展开剂朝一个方向展开，展开完毕，待溶剂挥发后，再用另一种展开剂朝一个方向展开，展开完毕，待溶剂挥发后，再用另一种展开剂朝与原来垂直的方向进行第二次展层。一种展开剂朝与原来垂直的方向进行第二次展层。若前后二次展若前后二次展开剂选择适当，开剂选择适当，可使各种组份完

14、可使各种组份完全分离。例如，全分离。例如，氨基酸的分离可氨基酸的分离可用此法。双向展用此法。双向展开法也可以二次开法也可以二次使用同一种展开使用同一种展开剂展层。剂展层。22D. 显色显色展层后，将滤纸从层析缸中取出，用铅笔在溶剂展层后，将滤纸从层析缸中取出，用铅笔在溶剂前沿作记号前沿作记号a. 有色物有色物：直接观察各个色斑：直接观察各个色斑b. 无色物无色物： 物理法显色：物理法显色：用紫外灯照，观察有无吸收或发用紫外灯照，观察有无吸收或发出各种不同颜色的荧光斑点，并用铅笔画下斑出各种不同颜色的荧光斑点，并用铅笔画下斑点的位置及大小。点的位置及大小。23. 分析分析a. 定性定性：实验条件

15、，各物质有各物质的：实验条件，各物质有各物质的Rf。为。为了查明未知物的组成，最好是在同样条件下与已了查明未知物的组成，最好是在同样条件下与已知的纯物质做对照实验知的纯物质做对照实验化学法显色化学法显色：利用各种物质的特性反应，喷洒适：利用各种物质的特性反应，喷洒适当的显色剂，若被分离的物质含有羧酸，可喷酸当的显色剂，若被分离的物质含有羧酸，可喷酸碱指示剂溴甲酚绿，当斑点呈黄色，说明羧酸确碱指示剂溴甲酚绿，当斑点呈黄色，说明羧酸确实存在；若被分离的物质含有氨基酸，则可喷茚实存在；若被分离的物质含有氨基酸，则可喷茚三酮，多数氨基酸呈紫色，个别氨基酸呈黄色。三酮，多数氨基酸呈紫色，个别氨基酸呈黄色

16、。其它化合物所用显色剂可从手册里查阅。其它化合物所用显色剂可从手册里查阅。24b. 定量定量 剪洗法：剪洗法：将斑点剪下，用适当的溶剂洗脱，然后将斑点剪下，用适当的溶剂洗脱，然后用各种仪器方法（如红外、紫外、原子吸收、发用各种仪器方法（如红外、紫外、原子吸收、发射光谱），也可将斑点剪下灰化，再用适当的溶射光谱），也可将斑点剪下灰化，再用适当的溶剂溶解，测之。剂溶解，测之。 比较法比较法：经纸色谱将各种组份分开后，可在相同：经纸色谱将各种组份分开后，可在相同条件下，制得标准系列图谱，与待测斑点颜色、条件下，制得标准系列图谱，与待测斑点颜色、面积进行比较，确定其可能的含量。面积进行比较，确定其可能

17、的含量。 反射散射光谱法反射散射光谱法： 25F. 应用应用例氨基酸的分离（固定相为水）例氨基酸的分离（固定相为水）流动相流动相分离情况分离情况正丁醇：正丁醇：2 mol/L HAc = 1 : 1酪氨酸、二碘酪氨酸酪氨酸、二碘酪氨酸用水饱和的苄醇用水饱和的苄醇亮氨酸、异亮氨酸亮氨酸、异亮氨酸叔丁醇：甲乙酮：甲酸：叔丁醇：甲乙酮：甲酸：水水16 : 16 : 0.1 : 3.9亮氨酸、异亮氨酸亮氨酸、异亮氨酸26流动相流动相分离情况分离情况丁醇：醋酸：水丁醇：醋酸：水32 : 2 :22甲状腺素、二碘酪氨酸甲状腺素、二碘酪氨酸流动相：丁醇：流动相：丁醇：HAc :H2O = 4 : 1 :5流

18、动相：流动相：M甲酚甲酚酚：酚：pH = 9.33硼酸硼酸缓冲液缓冲液 = 1 : 1亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、酪色氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、酪氨酸、丙氨酸、脯氨酸、谷氨酸、氨酸、丙氨酸、脯氨酸、谷氨酸、苏氨酸、门冬氨酸、谷氨酰酸、苏氨酸、门冬氨酸、谷氨酰酸、门冬酰氨、精氨酸、组氨酸、赖门冬酰氨、精氨酸、组氨酸、赖氨酸、胱氨酸等氨酸、胱氨酸等27例例2. 糖的分离糖的分离(固定相为水固定相为水)流动相流动相分离情况分离情况醋酸乙脂醋酸乙脂:吡啶吡啶:水水= 2 : 1 : 1 木糖、阿拉伯糖、甘露木糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖糖、葡萄糖丁醇

19、丁醇:吡啶吡啶:水水= 45 : 25 : 40乳糖、半乳糖、葡萄糖乳糖、半乳糖、葡萄糖丁醇丁醇:乙醇乙醇:水水: NH3 = 40 : 10 : 49 : 1尿中葡萄糖尿中葡萄糖丁醇丁醇:乙醇乙醇:水水= 10 : 1 : 2蜜二糖、果糖、葡萄糖蜜二糖、果糖、葡萄糖28流动相流动相分离情况分离情况流动相：酚流动相：酚流动相：丁醇流动相：丁醇:醋酸醋酸:水水= 1 : 1 : 1鼠李糖、核糖、阿拉伯鼠李糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、乳糖、葡萄糖、乳糖、半乳糖醛酸半乳糖醛酸丁醇丁醇:乙醇乙醇:水水= 4 : 1 : 5低聚糖低聚糖75% 2丙醇：醋酸

20、丙醇：醋酸9 : 1 直链淀粉直链淀粉丁醇丁醇:吡啶吡啶:水：苯水：苯= 50 : 30 : 3 : 45棉子糖棉子糖29例脂肪酸的分离（固定相为水）例脂肪酸的分离（固定相为水）流动相流动相分离情况分离情况95%乙醇：浓氨水乙醇：浓氨水100 : 1同系的直链脂肪酸同系的直链脂肪酸正己醇：正己醇： 1.5 mol/L 氨水氨水1 : 1烷氧基酸烷氧基酸流动相流动相1:乙醇：浓氨水乙醇：浓氨水 : H2O = 80 : 5 : 15流动相流动相2：乙二醇乙醚：桉树：乙二醇乙醚：桉树脑：脑：88%甲酸甲酸 = 5 : 5 : 2草酸、酒石酸、柠檬酸、苹草酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸、羟基醋酸、顺丁烯

21、二果酸、羟基醋酸、顺丁烯二酸、丙二酸、乳酸、琥珀酸、酸、丙二酸、乳酸、琥珀酸、乌头酸、己二酸、延胡索酸、乌头酸、己二酸、延胡索酸、葵二酸葵二酸30例例4无机应用（固定相为水）无机应用（固定相为水）流动相流动相分离情况分离情况12 mol/LHCl：甲醇：甲醇：丁醇：甲基异丁酮丁醇：甲基异丁酮55 : 35 : 5 : 5K+、Rb + 、Cs +乙醇：水乙醇：水80 : 20Li + 、Na + 、K +10% HCl的水饱和丁醇的水饱和丁醇Zn 2+Ga 3+In 3+ Al 3+苯酚：甲醇：苯酚：甲醇：HCl 5 : 3 : 2Al 3+ Ga 3+ In 3+ Tl 3+31流动相流动相

22、分离情况分离情况丁醇：丁醇：HAc：乙酸乙脂：乙酸乙脂：水水10 : 2 : 1 : 7从从Fe、Al、Ti中分离中分离出出Ga乙酸乙脂：水：乙酸乙脂：水：HNO385 : 10 : 5从稀土、从稀土、Zr、Ti、Th中分离出中分离出Sc乙醚：浓乙醚：浓HNO3 87.5 : 12.5HfZr4 mol/L HCl 饱和丁醇饱和丁醇UO2Th32例例5生物学应用生物学应用FeCuCoNiNiNiNiTiMo黑毛黑毛红毛红毛黄毛黄毛白白毛毛 兔毛的色谱图毛发是这样毛发是这样, ,皮肤是否是皮肤是否是这样这样 ? ? ?取不同颜色兔毛(300 500 mg), 干法灰化, 溶于稀HCl 中,用丙酮

23、 : 丁醇 : HCl = 10 : 4 : 2, 展开后,显色33用纸色谱法分离用纸色谱法分离A A、B B两种物质，在某条件下两物两种物质，在某条件下两物质的比移值质的比移值R Rf f分别为分别为0.360.36、0.400.40。设。设A A、B B两物质两物质斑点的直径分别为斑点的直径分别为0.2 cm,0.4 cm,0.2 cm,0.4 cm,当展开剂的前当展开剂的前沿达到沿达到10 cm10 cm时，时，A A、B B能否完全分离能否完全分离? ?设设A A、B B两物质色谱斑点的中心距原点分别为两物质色谱斑点的中心距原点分别为x x1 1, ,x x 2 2 cm,cm,则则

24、x x1 1/10 = 0.36 /10 = 0.36 x x2 2/10 = 0.40/10 = 0.40 x x2 2- -x x1 1 = (0.40-0.36)= (0.40-0.36) 10 = 0.4(cm)10 = 0.4(cm) 欲分离两物质，两斑点中心距离至少为欲分离两物质，两斑点中心距离至少为 (0.20+0.40)/2 = 0.30cm,(0.20+0.40)/2 = 0.30cm, 而实际两斑点中心距离为而实际两斑点中心距离为0.4 cm ,0.4 cm , 故在此条件下故在此条件下A BA B两物质可得到完全分离。两物质可得到完全分离。34用纸色谱法分离用纸色谱法分离

25、A A、B B两种物质，在一定条件下两种物质，在一定条件下A A、B B两物质的比移值分别为两物质的比移值分别为0.35,0.450.35,0.45，设，设A A、B B两物质色两物质色谱斑点的直径分别为谱斑点的直径分别为0.50cm0.50cm和和0.80cm,0.80cm,要求展开剂前要求展开剂前沿至少达到多少厘米时，沿至少达到多少厘米时，A A和和B B才能完全分离才能完全分离? ?设设x1, x2分别为分别为AB两物质斑点距原点的距离：两物质斑点距原点的距离：则则 x1/y=0.35 x2/y =0.45 x2-x1=0.40+0.25=0.65又又 x2-x1=(0.45-0.35)

26、y =0.65 y =6.5(cm)35纸色谱法分离混合离子纸色谱法分离混合离子,若混合离子极性大小若混合离子极性大小顺序为顺序为ABC,用弱极性有机溶剂展开后其用弱极性有机溶剂展开后其Rf值大小顺序为值大小顺序为_。 C, B, A 36二、薄层色谱法二、薄层色谱法1. 原理和特点原理和特点原理原理: 当展开剂从薄板上固定相的空隙中通过时当展开剂从薄板上固定相的空隙中通过时, 由于各由于各组分的组分的K的不同和足够多次的分配的不同和足够多次的分配. 特点特点:装置简、操作方便装置简、操作方便; 展开时间短展开时间短;样品负荷量大、样品负荷量大、斑点扩散少斑点扩散少;同一张色谱图可用不同的试剂

27、显斑，也可用同一张色谱图可用不同的试剂显斑，也可用浓硫酸等强氧化剂或在浓硫酸等强氧化剂或在400 500 加热碳化检出加热碳化检出.缺点：缺点：Rf值的重复性差值的重复性差克服办法克服办法：标样和试样在同一块板上展开：标样和试样在同一块板上展开372. 吸附剂（固定相）吸附剂（固定相）决定吸附性能的因素：吸附剂的化学组成、活性、表面积决定吸附性能的因素：吸附剂的化学组成、活性、表面积要求：要求：合适的吸附力合适的吸附力;与展开剂、被吸附物质均不起化与展开剂、被吸附物质均不起化学反应学反应;粒度细小而且均匀（范氏方程，减少涡流扩散项）粒度细小而且均匀（范氏方程，减少涡流扩散项）(1). 氧化铝氧

28、化铝氧化铝呈微弱碱性，酸性较强的化合物在氧化铝上氧化铝呈微弱碱性，酸性较强的化合物在氧化铝上吸附的很牢（所以，酸性物质分离不好），故通常用于分吸附的很牢（所以，酸性物质分离不好），故通常用于分离碳氢化合物、生物碱类和对碱性物质比较稳定的中性物离碳氢化合物、生物碱类和对碱性物质比较稳定的中性物质、碱性物质。质、碱性物质。38一般要求薄板用的活性为一般要求薄板用的活性为 级级氧化铝的活性与含水量密切相关（含一定量的水份时，吸氧化铝的活性与含水量密切相关（含一定量的水份时，吸附剂表面的吸附中心回被水分子占据）附剂表面的吸附中心回被水分子占据）活性活性 含水量（）含水量（） 市售的供薄层色谱用的市售的

29、供薄层色谱用的Al2O3有有:Al2O3 H：氧化铝中无粘合剂：氧化铝中无粘合剂Al2O3 G：氧化铝中含煅石膏（一般：氧化铝中含煅石膏（一般5煅石膏）煅石膏） 煅石膏煅石膏CaSO4，作为粘合剂，作为粘合剂Al2O3 HF254：氧化铝中不含煅石膏，仅含荧光指示剂：氧化铝中不含煅石膏，仅含荧光指示剂 （在（在254 nm下呈黄绿色荧光）下呈黄绿色荧光）Al2O3 GF254：氧化铝中既含煅石膏又含荧光指示剂：氧化铝中既含煅石膏又含荧光指示剂 （在（在254 nm下呈黄绿色荧光）下呈黄绿色荧光）上述商品可以直接调料涂敷（上述商品可以直接调料涂敷（1份料，份料，2份水调合）份水调合）39（）硅胶

30、（吸附性较（）硅胶（吸附性较Al2O3弱）弱）硅胶是微酸性吸附剂，且适用于酸性、中性物质的分离硅胶是微酸性吸附剂，且适用于酸性、中性物质的分离（如有机酸、氨基酸、萜类、甾体）碱性物质则能与硅胶作用（如有机酸、氨基酸、萜类、甾体）碱性物质则能与硅胶作用（当用中性溶剂展层，碱性物质有时停留在原点不动，或者得（当用中性溶剂展层，碱性物质有时停留在原点不动，或者得到拖尾的斑点，而不能很好的分离）到拖尾的斑点，而不能很好的分离）薄层用商品硅胶有：硅胶薄层用商品硅胶有：硅胶H H（不含粘结剂）、硅胶（不含粘结剂）、硅胶G G（含粘（含粘结剂煅石膏）、硅胶结剂煅石膏）、硅胶HFHF254254（含荧光物质的

31、硅胶）硅胶（含荧光物质的硅胶）硅胶GFGF254254（含（含有煅石膏和荧光剂）有煅石膏和荧光剂） 此外，硅藻土、硅酸盐、杂多酸盐、聚酰胺、纤维素也此外，硅藻土、硅酸盐、杂多酸盐、聚酰胺、纤维素也可用作吸附剂。可用作吸附剂。活性活性 含水量（）含水量（） 0 5 15 25 3540(3). 选择吸附剂的规律：选择吸附剂的规律：v极性物质被极性表面的吸附剂吸附；极性物质被极性表面的吸附剂吸附；v亲水性的吸附剂适用于在非水溶液中吸附物质亲水性的吸附剂适用于在非水溶液中吸附物质v疏水性的吸附剂适用于在水溶液中吸附物质疏水性的吸附剂适用于在水溶液中吸附物质展开剂（流动相）展开剂（流动相） 展开剂的洗

32、脱作用实质是展开剂分子与欲分离组分竟争展开剂的洗脱作用实质是展开剂分子与欲分离组分竟争占据表面吸附中心的过程。占据表面吸附中心的过程。 强极性展开剂分子占据吸附中心的能力强，所以，有强强极性展开剂分子占据吸附中心的能力强，所以，有强的洗脱作用，非极性展开剂分子占据吸附中心的能力弱，所的洗脱作用，非极性展开剂分子占据吸附中心的能力弱，所以，有弱的洗脱作用。以，有弱的洗脱作用。（1）常用展开剂的极性：）常用展开剂的极性： 石油醚石油醚环己烷环己烷二硫化碳二硫化碳四氯化碳四氯化碳三氯乙烯三氯乙烯苯苯甲苯甲苯二氯甲烷二氯甲烷氯仿氯仿乙醚乙醚乙酸乙酯乙酸乙酯丙酮丙酮乙醇乙醇甲醇甲醇吡啶吡啶酸酸41（2）

33、欲分离组分的极性：）欲分离组分的极性：v饱和碳氢化合物系非极性化合物，不被吸附或吸附不牢。饱和碳氢化合物系非极性化合物，不被吸附或吸附不牢。在其结构中引进某些功能团则极性增加。取代基团极性越在其结构中引进某些功能团则极性增加。取代基团极性越强，整个分子极性越强。常见功能团按其极性增加的顺序强，整个分子极性越强。常见功能团按其极性增加的顺序是：是： 烷烃烷烃烯烃烯烃醚类醚类硝基化合物硝基化合物二甲胺二甲胺酯类酯类酮类酮类醛类醛类硫醇硫醇胺胺类类酰胺酰胺醇类醇类酚类酚类羧酸类羧酸类 v当有机分子的基本母核相同时，极性基团越多，整个分当有机分子的基本母核相同时，极性基团越多，整个分子的极性越大子的极

34、性越大v分子的双键越多，吸附能力越强；共轭双键越多，吸附分子的双键越多，吸附能力越强；共轭双键越多，吸附能力越强能力越强v分子中取代基团的空间排列对吸附性也有影响，如同一分子中取代基团的空间排列对吸附性也有影响，如同一母核中羟基处于能形成内氢键位置时，其吸附能力弱于不母核中羟基处于能形成内氢键位置时，其吸附能力弱于不能形成内氢键的化合物能形成内氢键的化合物42（3）展开剂的选择）展开剂的选择434. 操作技术操作技术（1）制板）制板玻璃板玻璃板: a .平整、去油、去污（可用浓平整、去油、去污（可用浓H2SO4-K2CrO7洗液浸洗液浸洗，或丙酮擦洗，自来水洗净后，烘干）洗，或丙酮擦洗，自来水

35、洗净后，烘干）b. 玻璃板的尺寸根玻璃板的尺寸根据自己的需要自由选择，小的可用据自己的需要自由选择，小的可用2.5 7.5cm的载玻片的载玻片, 大大的可用的可用20 20cm的玻片。的玻片。涂布液涂布液:取一定量的吸附剂放入研钵中，加入需要的水或适取一定量的吸附剂放入研钵中，加入需要的水或适当的溶剂，研磨时间以调成稀糊状为度，当浓度均一后，即当的溶剂，研磨时间以调成稀糊状为度，当浓度均一后，即成胶状物，色泽洁白为最佳，立即倾入玻璃板上，用下述方成胶状物，色泽洁白为最佳，立即倾入玻璃板上，用下述方法涂布。法涂布。涂布方法涂布方法:玻棒涂布玻棒涂布;玻片刮涂玻片刮涂;倾斜涂布倾斜涂布;涂布器涂布

36、器.活化活化:44(2)(2)点样点样适当的点样量，集中的斑点是得到一个好的色谱的必要适当的点样量，集中的斑点是得到一个好的色谱的必要条件。如何才适当？不同的分离要求、不同的薄板（有厚有条件。如何才适当？不同的分离要求、不同的薄板（有厚有薄）、不同的吸附剂（性能不一），需要不同的点样量。从薄）、不同的吸附剂（性能不一），需要不同的点样量。从下图可见：点样量少了，不易检出；点样量多了，易拖尾或下图可见：点样量少了，不易检出；点样量多了，易拖尾或扩散，影响分离效果。扩散，影响分离效果。45纯物质的鉴定，若又有高灵敏度的显色剂，点样量只纯物质的鉴定，若又有高灵敏度的显色剂，点样量只需需 g或或ng；

37、若进行天然物或中间产物的分离时，点样量；若进行天然物或中间产物的分离时，点样量需需50 g几百微克；若进行制备色谱，进样量可达几百微克；若进行制备色谱，进样量可达1mg。点样时可用内径约点样时可用内径约1mm，管口平整的毛细管或微量吸管，管口平整的毛细管或微量吸管吸取试液后，轻轻接触板面，分数次滴加样品。吸取试液后，轻轻接触板面，分数次滴加样品。注意点：注意点：a.溶解试样的溶剂最好是挥发性的溶解试样的溶剂最好是挥发性的b.点样宜分几次点加点样宜分几次点加,即点一次后即点一次后, 用吹风机的冷风吹干用吹风机的冷风吹干, 再点再点, 再吹干再吹干, ., 反复反复,直到点完所要求的量直到点完所要

38、求的量c. 点样量的体积尽可能小些点样量的体积尽可能小些(2 10 L左右左右)d. 点样最好是在密闭的室中或比较干燥的环境下完成点样最好是在密闭的室中或比较干燥的环境下完成, 避避免薄板吸水降低活性免薄板吸水降低活性.4615cm2.5cm1.5cm溶剂前沿溶剂前沿47（）展层（）展层薄层的展开需在密闭的器皿中进行，密闭容器应用展开薄层的展开需在密闭的器皿中进行，密闭容器应用展开溶剂予先饱和。展开方式和纸层析相同。但不加粘合剂的薄板溶剂予先饱和。展开方式和纸层析相同。但不加粘合剂的薄板只能作近水平式（与平面成只能作近水平式（与平面成20 10oC角）的上行或下行的展层角）的上行或下行的展层而

39、不能垂直展层。而不能垂直展层。48 把点好样品的薄板浸入把点好样品的薄板浸入0.5cm深的适宜展开剂中，当展开剂深的适宜展开剂中，当展开剂移动至离起点约移动至离起点约10 20cm处处(约约30min)，将薄板取出放平，将薄板取出放平，用铅笔或小针记下溶剂前沿的用铅笔或小针记下溶剂前沿的位置后，在室温干燥或烘箱内位置后，在室温干燥或烘箱内干燥，测其干燥，测其Rf值。值。49注意：每次的展层距离要固定，以便注意：每次的展层距离要固定，以便Rf值的重复值的重复50（）检出（）检出 a.本身是有色物，可以直接观测斑点的位置和颜色本身是有色物，可以直接观测斑点的位置和颜色 b.本身无色但在紫外线的照射

40、下会发出不同颜色的荧光本身无色但在紫外线的照射下会发出不同颜色的荧光 c.薄板本身有荧光（硅胶薄板本身有荧光（硅胶HF254+366, 硅胶硅胶GF254, .), 欲测欲测物吸收紫外线物吸收紫外线, 在荧光背景下呈暗色在荧光背景下呈暗色 d.多数有机物多数有机物, 喷喷10 50% H2SO4(或铬硫酸或铬硫酸)并在并在100 120oC加热加热, 使有机物碳化使有机物碳化, 观察加热中有机物颜色变观察加热中有机物颜色变化及碳化斑点位置化及碳化斑点位置, 可以推断物质的化学性质可以推断物质的化学性质 e. 喷显色剂或荧光试剂（不含粘合剂的薄板不能喷，只喷显色剂或荧光试剂（不含粘合剂的薄板不能喷，只能浸，以免把吸附剂吹散）能浸，以免把吸附剂吹散）51主要显色试剂主要显色试剂试剂试剂配制及使用方法配制及使用方法检出范围检出范围浓浓H2SO4喷雾喷雾, 100 120oC , 观察颜色变化观察颜色变化高级醇、醛、酮、甾体高级醇、醛、酮、甾体H2SO4-K2Cr2O75g K2Cr2O7+100mL H2SO4, 喷雾喷雾,280oC观察颜色