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文档简介

1、姜振玲一、基因芯片概念基因芯片（gene chip）又称DNA芯片，是指将许多特定的寡核苷酸片段或基因片段有序地、高密度地排列固定于支持物上，待测样品核算分子经过标记，与固定在载体上的DNA阵列中的点按碱基配对原理同时进行杂交。杂交形式属于固液杂交。通过激光共聚焦荧光检测系统进行扫描以获取样品数量和序列信息。二、基因芯片的主要特征高通量提高信息量平行化提高信息的可比性微量化降低待测样本的用量自动化提高工作效率低成本可迅速普及推广三、基因芯片分类cDNA芯片寡核苷酸芯片 寡核苷酸芯片和cDNA芯片的比较比较内容比较内容寡核苷酸芯片寡核苷酸芯片cDNA芯片芯片DNA类型寡核苷酸cDNADNA长度小

2、于80碱基500-3000碱基DNA链单链双链DNA制备预合成或原位合成PCR产物连接方式共价键共价键或离子键应用基因表达谱、突变等基因表达谱四、寡核苷酸芯片的特点序列经过优化，减少非特异杂交，能有效区分有同源序列的基因；减少二级结构；杂交温度均一，提高杂交效率；合成产物浓度均一，避免因样品浓度差异而造成的点样量差异；无需扩增，防止扩增失败影响实验五、寡核苷酸芯片分类根据寡核苷酸应用方向的不同，可将其分为两类：表达谱芯片：用于检测基因的表达状况（我公司目前使用的illumina表达谱芯片即为此类）检测芯片: 用于检测特定基因是否存在（我公司使用的DRB检测芯片为此类）六、寡核苷酸芯片的技术原理

3、1.寡核苷酸表达谱芯片的技术方法流程：寡核苷酸探针的合成及纯化与载体基片通过化学反应连接对照组样本杂交 激光共聚焦扫描检测及数据统计 筛选不同处理后表达的差异基因 实验组样本 RNA分离RNA反转录扩增标记完整完整RNARNA检测检测: :直接杂交直接杂交探针Biotin 标记 cRNA地址序列*23 mer50 mer微珠50mer 50mer 基因特异性探针基因特异性探针每个微珠连接有近百万探针每个微珠连接有近百万探针 每种类型微珠每种类型微珠3030倍重复倍重复探针设计探针设计: :生物信息学分析挑选几个候选探针生物信息学分析挑选几个候选探针, ,动力学反应扫描确定动力学反应扫描确定( (专利专利) )Scanned Image and Data output analyzed with BeadStudio2、寡核苷酸检测芯片技术方法流程寡核苷酸探针的合成及纯化与载体基片通过化学反应连接杂交 检测及数据分析处理标本 （外周血或口腔粘膜）提取基因组DNAPC

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