叶绿素的柱色谱分离

1、1/8在线答疑：在线答疑： S 大大学学通通用用化化学学实实验验技技术术叶叶绿绿素素的的柱柱色色谱谱分分离离实验实验10 10 叶绿素的柱色谱分离叶绿素的柱色谱分离10.1 10.1 实验目的与要求实验目的与要求 （1 1）掌握柱色谱）掌握柱色谱(LCC)(LCC)分离叶绿素的原理。分离叶绿素的原理。 （2 2）掌握几种常见的装柱技术。）掌握几种常见的装柱技术。（3 3）写出从白菜叶中提取叶绿素的工艺流程。）写出从白菜叶中提取叶绿素的工艺流程。2/8在线答疑：在线答疑： S 大大学学通通用用化化学学实实验验技技术术叶叶绿绿素素的的柱柱色色谱谱分分离离（4 4）了解几种常见吸附剂（固定相）的性能

2、和适用范）了解几种常见吸附剂（固定相）的性能和适用范 围，了解选择洗脱剂（流动相）的原则和方法。围，了解选择洗脱剂（流动相）的原则和方法。（5 5）要用试管按洗脱先后收集洗脱液，约每）要用试管按洗脱先后收集洗脱液，约每5mL/5mL/支，支， 并记录各有色组分的洗脱时间（并记录各有色组分的洗脱时间（minmin），通过改变），通过改变 洗脱剂的极性，使各组分间要能较好的分离。洗脱剂的极性，使各组分间要能较好的分离。3/8在线答疑：在线答疑： S 大大学学通通用用化化学学实实验验技技术术叶叶绿绿素素的的柱柱色色谱谱分分离离10.2 10.2 实验原理实验原理 绿色植物的叶和茎中含有胡萝卜素绿色植

3、物的叶和茎中含有胡萝卜素( (C C4040H H5656) )、叶黄素、叶黄素( (C C4 04 0H H5 65 6O O2 2) )、叶绿素、叶绿素a a( (C C5 55 5H H7 27 2MgNMgN4 4O O5 5) )和叶绿素和叶绿素b b ( (C C5555H H7070MgNMgN4 4O O6 6) )。这些色素易被。这些色素易被80%80%丙酮或石油醚乙醇混丙酮或石油醚乙醇混合液萃取，从植物茎、叶中浸提出来。对于浸提出来的合液萃取，从植物茎、叶中浸提出来。对于浸提出来的色素混合物，我们可以借助柱色谱色素混合物，我们可以借助柱色谱( (LCCLCC) )进行粗分离

4、；若进行粗分离；若要研究洗脱的色素是否存在同分异构体，则可用要研究洗脱的色素是否存在同分异构体，则可用HPLCHPLC法法进一步分离、分析。在柱色谱中，氧化铝对青菜叶中各进一步分离、分析。在柱色谱中，氧化铝对青菜叶中各色素的吸附能力不同，故各组分在流动相里向下移动的色素的吸附能力不同，故各组分在流动相里向下移动的速率不同，各组分随溶剂以不同的时间从柱的下端流出。速率不同，各组分随溶剂以不同的时间从柱的下端流出。4/8在线答疑：在线答疑： S 大大学学通通用用化化学学实实验验技技术术叶叶绿绿素素的的柱柱色色谱谱分分离离10.3 10.3 操作流程操作流程取青菜叶取青菜叶过滤过滤用用20mL95%

5、乙醇浸泡乙醇浸泡8h静置分层静置分层放出水层放出水层加加10mL石油醚石油醚加加50mLH2O 水水 洗洗 醚醚 层层加无水硫加无水硫酸钠干燥酸钠干燥湿法湿法装柱装柱加样品加样品加石油醚加石油醚-丙酮溶液洗脱丙酮溶液洗脱收集洗脱液收集洗脱液提取液置于提取液置于分液漏斗分液漏斗5/8在线答疑：在线答疑： S 大大学学通通用用化化学学实实验验技技术术叶叶绿绿素素的的柱柱色色谱谱分分离离10.4 10.4 注意事项注意事项（1 1）柱色谱用氧化铝以通过）柱色谱用氧化铝以通过8080120120目筛孔的颗粒为宜。目筛孔的颗粒为宜。（2 2）填充柱要均匀，要赶走气泡。）填充柱要均匀，要赶走气泡。（3 3

6、）操作全过程）操作全过程( (装填、加样、洗脱分离装填、加样、洗脱分离) )都要防柱身干都要防柱身干 裂。裂。（4 4）加样时，样品不要被溶剂或洗脱剂稀释。）加样时，样品不要被溶剂或洗脱剂稀释。（5 5）洗脱剂和氧化铝要分类处理。）洗脱剂和氧化铝要分类处理。6/8在线答疑：在线答疑： S 大大学学通通用用化化学学实实验验技技术术叶叶绿绿素素的的柱柱色色谱谱分分离离10.5 10.5 问题讨论问题讨论（1 1）装柱不均匀或者有气泡、裂缝将会造成什么后果？）装柱不均匀或者有气泡、裂缝将会造成什么后果？ 为什么？为什么？（2 2）极性大的组分为什么要用极性较大的溶剂洗脱？）极性大的组分为什么要用极性

7、较大的溶剂洗脱？7/8在线答疑：在线答疑： S 大大学学通通用用化化学学实实验验技技术术叶叶绿绿素素的的柱柱色色谱谱分分离离1010. .6 6 参考答案参考答案（1 1）装柱不均匀或者有气泡、裂缝将会造成什么后果？装柱不均匀或者有气泡、裂缝将会造成什么后果？为什么？为什么？ 答：答：造成沟流现象（谱带前沿一部分向前伸出的现造成沟流现象（谱带前沿一部分向前伸出的现象），结果显色不均匀，也产生不规则的谱带。象），结果显色不均匀，也产生不规则的谱带。 8/8在线答疑：在线答疑： S 大大学学通通用用化化学学实实验验技技术术叶叶绿绿素素的的柱柱色色谱谱分分离离（2 2）极性大的组分为什么要用极性较大的溶剂洗脱？极性大的组分为什么要用极性较大的