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1、第一部分 意识的培养 我们的发酵属于纯培养，是由单一菌种接种以后进行的培养，其中不可以有任何杂菌，否则会影响发酵的成败及产品的使用效果，所以为了确保每一批发酵的成功，在生产过程中菌种、发酵人员必须具备以下两种意识：1.无菌意识 由于微生物个体小、分布广泛等特性，发酵染菌的途径有很多，而且如果染菌的话，我们无法及时做出判断，必须培养一段时间才能看出来，发现以后的结果只能是重消、提前放罐或倒罐，造成不小的损失，所以生产过程中每一个环节都必须具备无菌意识，每一步操作都按照操作规程进行，抓住每一个细节，才能确保不会染菌。无菌意识是每一个菌种、发酵、生测人员具有的意识。第1页/共28页2、安全意识空气压

2、力能达到0.250.3MPa；正常供气压力0.15-0.2MPa，（仪表用空气注意减压）；空气温度：50+5蒸汽压力0.4-0.6MPa以上，防止压力过高击穿垫片、阀门等设备用电；（本岗位熟练人员操作、防水.维修必须专业电工进行）机械搅拌；（设备检修必须切断电源且有明显的标识牌、高速离心设备注意平衡及紧锁装置）酸碱、易燃易爆、粉尘：防护措施及应急措施。 进罐检查：切点电源、明显标识牌、有人值守 人员着装 发酵罐：空消、实消等加热状态打开夹套排污阀，防止夹套或内壁损毁；移种、放罐升高压力后，不能同时关闭进气、排气阀门，防止罐内产生负压。第2页/共28页第二部分、发酵罐罐体管道结构介绍 空气路：培

3、养过程中向罐内通无菌空气 蒸汽管路 物料管路：配料管路、补料管路 取样路：培养过程中取样监控菌体生长情况 尾气路：排气（大排气、小排气） 出料路：移种、放罐 夹套进水路：冷冻水、循环水、热水（蒸汽） 夹套回水路：冷冻水、循环水、热水（蒸汽） 排污管路第3页/共28页第4页/共28页各种图形、颜色代表的意义截止阀、球阀、隔膜阀电磁阀止回阀第5页/共28页空气管道排污管道水管道物料管道蒸汽管道第6页/共28页第三部分、发酵基本操作过程罐检空消电极标定配料实消接种中控培养放罐洗罐检修第7页/共28页第一：罐检目的：快速检查发酵罐，确保发酵罐正常，可以上罐。检查项目：1.阀门：所有阀门是否能正常使用、

4、是否处于正确的位置。2.压力表：压力表是否归零。3.PH和溶氧电极：电极是否拔出并正确保养。4.罐体：罐内是否清洗干净。5.搅拌电机：点动电机，看电机运转是否正常。6.搅拌叶轮、消泡装置是否紧固，有无松动等。第二：空消 空消主要目的是在进罐生产前对设备清洁和杀灭其他微生物，防止因设备清洁不彻底或设备停用时间过久，微生物滋生，从而对生产造成影响。1、放罐后及时清洗空消。2、长期不用罐或更换品种、染菌罐需空消。3、空消之后无菌空气保压待用。第8页/共28页空消操作流程升温 从空气路、取样路和出料路进蒸汽 排净罐内的冷空气后关小排气阀，节省蒸汽灭菌 调节空气一阀、取样一阀、出料一阀和排气阀控制压力

5、压力0.140.16MPa,温度126128，时间30分钟降温 排空罐内冷凝水 自然冷却第9页/共28页第三、电极标定目的：为了确保电极准确测量，必须在使用前对电极进行标定。注意事项：1. 新电极或放置很久的电极必须激活以后才可以进行标定和使用。PH电极用3moL/L的KCl溶液浸泡6小时激活，溶氧电极通电6小时激活。2. PH电极标定的时候需要将接地电极放入盛放标准液的烧杯内。3. 接种以后设定好发酵参数，然后进行溶氧电极百分百标定。第10页/共28页PH电极 利用6.86的标准液进行电极零点标定，电压值在3000左右； 利用4.0的标准液进行电极斜率标定，斜率在260左右；溶氧电极 利用饱

6、和NaSO3溶液进行电极零点标定，电压值在1300左右； 百分百标定。电极标定参数：第11页/共28页第四：配料增容： 实消过程中部分蒸汽会冷凝形成冷凝水进入培养基中，从而导致培养基体积变大，变大的部分即为增容。不同的地区，不同的气候，不同的产品品种及原料增容量都会不同的，需要通过多次实消灭菌总结才能得到一个经验值。10-30%领料：正确填写领料单，从仓库领料，并从领料单签字确认。溶料：按工艺要求顺序溶解各种原料； 原料全部溶解，无杂质、无硬块。投料：确认电极已经安装上，出料一阀已经关闭。 考虑增容和种子体积，定容到发酵消前体积。 第12页/共28页 第五：实消 发酵罐实消是对发酵培养基进行彻

7、底的灭菌处理, 利用高温过饱和蒸汽的强穿透能力使各种细菌、真菌蛋白质凝固而死亡。实消结束以后罐内是无菌的环境，需通入无菌空气进行保压直到培养结束。实消操作流程预热：打开夹套排污，用蒸汽进行预热 当温度达到90度以上停止预热，关闭搅拌。升温：三路进汽；当压力升到0.05MP a时打开所有 和罐体连接的排汽阀门，消毒过程不得有消毒死角。保压：调节三路进气及排汽，常规灭菌保压过程：温度121 压力0.12 30分钟灭菌结束：保压结束先关闭各小排气及取样、放料管路进汽，待罐压低于精过滤器压力后，快速关闭空气管路蒸汽阀门，打开空气阀门，调整进气、排气阀门，保持罐压0.05-0.1MPa；降温：开启冷却水

8、降温至工艺要求温度，降温过程注意罐压，防止罐压掉零。第13页/共28页第14页/共28页第15页/共28页第16页/共28页第七、工艺控制与记录1、记录每间隔1小时记录一次参数；主要参数有PH值、风量、转速、溶氧值、温度、压力和、补料量、备注等。2.取样 依据工艺要求按时取样送交化验部并做好镜检工作。 取样前后的消毒、废液的收集处理3.工艺控制 根据工艺参数（如溶氧、PH）的变化和检测（糖、氮、OD、目的产物等）结果，对工艺参数进行调整控制。3.设备巡查检查搅拌电机，看电机有没有异响、过热等； 检查酸碱罐、消泡罐和补料罐装液量，及时补充； 检查管道、阀门，看有无外漏。第17页/共28页第八：放

9、罐 达到工艺放罐标准条件即可放罐，放罐操作流程如下：1.提前通知后提取车间准备放罐2.取样（常温保存和低温保存）3.蒸汽消毒放罐管道4.检查管道阀门5.升压6.放罐7.吹洗放料管道内残余料液。8.填写记录表格（放罐体积、工艺技术指标等）第九：洗罐放罐结束以后立即进行洗罐，洗罐流程如下：1.卸压：打开罐盖前要先卸掉罐压；2.电极保养：拔出电极清洗干净以后进行正确保养；PH电极用3摩尔每升的KCl溶液浸泡电极头；溶氧电极直接通电。3.冲洗罐壁：用高压水枪冲洗罐壁，如果罐壁培养基冲洗不掉则考虑碱煮（5%的碱液用夹套升温到80以后保温30分钟）；4.排污：排掉污水。第18页/共28页第十、检修 目的：确保阀门、法兰、机械密封和试镜灯等不会泄漏，以备下批生产使用； 方法：罐体通入空气保压