贝克曼血凝仪基础知识3

1、5353、做凝血因子的检测时应注意什么问题？、做凝血因子的检测时应注意什么问题？与常规试验相比，区别最大的是定标血浆的配置和定标方法：（1）定标血浆的配置：所有因子的定标都需要二个不同浓度的定标血浆，一个是原浓度，即1ML复溶水稀释定标血浆干粉；另一个是在原浓度的基础上再作1：15稀释的低浓度定标血浆（20微升原浓度定标血浆，加300微升水） ，按照机器的要求放置；（2）定标血浆的参数输入后，定标的选项不在通常的Calibration中，而是直接将定标血浆、试剂、标本按机器要求放好后，按RUN即可。机器会先定标，然后作标本。（3）二个浓度的定标血浆做出三条定标曲线。（4）一旦机器中有定标曲线，

2、下次再做该因子时，不放定标血浆机器也照做标本。（5）由于因子的活性不稳定，所以最好在采血后二小时内完成试验。（6）由于因子的活性不稳定，所以下次定标的时间最好不要超过5天。5454、因子检测的成本较高，如何才能节省成本？、因子检测的成本较高，如何才能节省成本？批量做才能节省成本。需要注意的是病人血浆不能放置在4冰箱，必须放置在-20保存二周，-60保存三个月。解冻时要放置在37水浴迅速解冻，否则因子的活性会大大降低，从而得出假阳性结果。5555、因子检测如何实行质量控制？、因子检测如何实行质量控制？完整的质量控制推荐同时使用正常对照和异常对照。正常对照和特殊测试对照水平1和2(IL Coagu

3、lation)以及分析用正常和异常参考血浆(ELECTRA)均被设计在本程序中。每个实验室均应建立他们自己的平均值和标准差,并必须建立一套质量控制程序来监测实验室的测试。根据良好实验室操作规程(GLP)的要求,质量控制测试至少应该在每8小时内进行一次。5656、因子检测对标本血浆的要求是什么？、因子检测对标本血浆的要求是什么？过渡溶血、黄疸以及高脂血症的样品不要使用。5757、乏因子血浆在配置时应注意什么问题？、乏因子血浆在配置时应注意什么问题？（1）将每管中的冻干粉溶解于 1 毫升 NCCLS 标准的 II 型水或相近的水中3。塞紧塞子,并缓慢蜗旋混匀。确保本品完全溶解,并将血浆置于 15-

4、25,30min。用前倒转几次,混匀。不要震荡,并避免形成泡沫。（2）溶解后的稳定性:在原始储存管中于 2-8下稳定 24 小时,或者在 ACL Futura/ACL 高级系统和 ACL TOPTM中,可以在 15下储存 24 小时。（3）本品最好的储存方法为:从系统中移出的乏因子 X 血浆,保存在原保存管内,于 2-8放置。5858、vWFvWF抗原检测的原理是什么？抗原检测的原理是什么？免疫比浊法：向待检血浆中加入包被抗vWF的单克隆抗体的乳胶试剂，血浆中的vWF抗原与之结合形成大分子物质。波长405nm投射比浊测定，透光量与抗原含量成反比。5959、vWFvWF抗原检测对标本血浆的要求如

5、何？抗原检测对标本血浆的要求如何？ 当血色素在80mg/dL、胆红素10mg/dL、甘油三酯1000mg/dL时，不影响其在ACL-Futura/ACL-Advanve系统上的结果； 当血色素在90mg/dL、胆红素15mg/dL、甘油三酯750mg/dL时，不影响其在ACL-Family系统上的结果； 类风湿因子存在可能是检测结果过高。 当血色素在120mg/dL、胆红素14mg/dL、甘油三酯1500mg/dL时，类风湿因子750IU/mL时，不影响其在ACL-TOP系统上的结果。6060、vWFvWF活性的检测原理是什么？活性的检测原理是什么？ vWF活性检测是利用乳胶颗粒增加免疫浊度测

6、定法，测定血浆中的vWF活性。由于乳胶试剂凝集使浊度增加，测定增加的浊度可检测vWF活性。特异性抗vWF单克隆抗体被吸附到乳胶颗粒上，并定向于血小板的结合位点vWF(糖蛋白IB受体)上，从而与患者血浆中的vWF反应，凝集的程度与样本中vWF活性呈正比，通过测定凝集引起的传输光光线的减少可确定vWF活性。6161、vWFvWF抗原检测与抗原检测与vWFvWF活性的检测在临床上有何意义？活性的检测在临床上有何意义？ 血管性血友病（VWD）在我国是最常见的先天性出血性疾病，对VWD的实验室诊断要求进行多个特异性检验。测定并比较血浆中的血管性血友病因子抗原（VWF：Ag）VWF活性和因子水平有助于区别

7、VWF数量上的缺陷（1型或3型）或质量上的缺陷（2型）,从而对不同类型的VWD进行诊断。 当得到的VWF：Ag水平极低或检测不出来时，预计是3型VWD。如果得到的VWF：Ag水平是中等甚至是正常时，必须测定VWF活性和因子，并于VWF：Ag结果比较，如果这三个值在正常范围内，可以排除VWD和血友病A。如果至少存在一个参数为异常低值，必须计算VWF活性/ VWF：Ag和因子/ VWF：Ag，如果这二个比值都接近1（有些作者建议以0.7为临界值） ，诊断为1型VWD。6262、在做、在做VWFVWF抗原检测和活性检测时应注意哪些问题？抗原检测和活性检测时应注意哪些问题？ （1）在结果判定上要注意，

8、VWF属于体内的急性时相反应物，当机体处于应激、妊娠，炎症等情况下会影响的血浆浓度，所以利用取自不同时间的其它样本进行重复分析是可取的。 （2）按照国际临床生化联盟（IFCC）推荐的对范围进行计算，试剂说明书给定的结果是使用特定的试剂批次获得的。由于许多变量可能会影响到结果，每个实验室都应建立自己的参考范围。 （3）如果结果超出线性范围，样本应当用因子稀释液按1：4进行手动稀释（100微升样本加300微升因子稀释液） ，然后重新检测，其结果应乘以稀释倍数。 （4）乳胶试剂在配置时应注意：将1小瓶的缓冲也全部倒入1小瓶的乳胶试剂中，使乳胶试剂完全溶解，悬浮液必须均匀并呈轻微乳状。使用前将该试剂在

9、15-25下保持30分钟，然后翻转混匀，不要振摇，避免泡沫形成。液体顶部的泡沫可能会干扰仪器的液体传感器。 （5）乳胶试剂溶解后，在原小瓶中2-8贮存时稳定时间为1个月，15贮存在ACL-FAMILY上为3天，在ACL-FUTURA，ADVANCE、TOP上为1天，不要冷冻。 （6）血浆标本在采集后应在2小时内检测。6363、临床常用的诊断血栓性疾病的试验有哪几个？、临床常用的诊断血栓性疾病的试验有哪几个？ 抗凝血酶（AT） 、蛋白C、蛋白S、D-二聚体、狼疮抗凝物（LAC）检测。6464、抗凝血酶（、抗凝血酶（ATAT）检测的原理是什么？）检测的原理是什么？ 将待测的血浆中加入过量的凝血酶，

10、在37条件下孵育一定时间，使血浆中的AT与凝血酶结合，形成1：1的复合物。然后加入显色底物并继续孵育，剩余的凝血酶作用于显色底物，裂解出显色基团对硝基苯胺（pNA） 。反应体系的显色强度与剩余凝血酶的活性呈正相关，与待测血浆中的AT活性呈负相关。 在 405nm 的波长上进行动态监测对硝基苯胺，其水平与样品中的抗凝血酶呈反比。IL 抗凝血酶试剂盒应用发色底物法。该方法特异性高，不会受肝素辅因子 II 的影响。抗凝血酶（AT）或肝素辅因子 I 是主要的凝血抑制剂，同时也是肝素治疗的有效组成成分。通过抑制凝血蛋白酶，尤其是凝血酶，Fxa 和 FIXa。AT 能够预防无法控制的凝血和血栓形成。抗凝血

11、酶缺陷是血栓形成的高风险因素。6565、抗凝血酶（、抗凝血酶（ATAT）检测对标本血浆的要求如何？）检测对标本血浆的要求如何？ IL凝血系统上，抗凝血酶的结果不会受到多达2U毫升肝素（UF或LMW肝素） ，2毫克/分升1抗胰蛋白酶， 7毫克分升2巨球蛋白，3IUmL肝素辅因子，200毫克分升血红蛋白，20毫克分升胆红素以及1000毫克分升甘油三酯的影响。6666、抗凝血酶（、抗凝血酶（ATAT）检测的临床意义如何？）检测的临床意义如何？ 主要用于诊断由AT缺乏而引起的血栓性疾病。AT缺乏可由获得性或遗传性引起。（1）获得性：生成减少严重肝病（肝硬化、重症肝炎） 消耗增加DIC、大手术等 排出增

12、加肾病综合症等 药物口服避孕药、L-门东酰胺酶、凝血酶原复合物等 其它原因血管炎、感染、血液透析、血浆置换等。 （2）遗传性AT缺乏。 常见临床表现有：严重的静脉血栓； DVT and PE；症状出现在10-25岁之间；外伤、手术、怀孕、感染可诱发血栓形成。6767、蛋白、蛋白C C的检测原理是什么？的检测原理是什么？ 将待测血浆中加入蛋白C激活剂（铜斑蛇的蛇毒） 。活化的蛋白C（APC）可水解随后加入的发色底物，释放出显色剂pNA，pNA的量与血浆中APC的量成正比。6868、蛋白、蛋白C C（PCPC）的生理功能是什么？）的生理功能是什么？ PC是体内重要的抗凝蛋白，其主要功能是通过水解活

13、化的因子（Fa）和活化的因子（Fa）而下调凝血级联。PC在血浆中以无活性的酶原形式存在，当其的重链氨基端上一个小肽被切下时，就变成有活性的丝氨酸蛋白酶活化的蛋白C（APC） 。这一活化作用是凝血酶在钙离子存在下与磷脂表面的凝血酶调节蛋白所构成的复合物对PC催化作用而达到的。蛋白C的活化发生在内皮细胞表面，需要有： 凝血酶 血栓调节蛋白 凝血酶/血栓调节蛋白复合物6969、检测蛋白、检测蛋白C C的临床意义是什么？的临床意义是什么？ PC缺乏的临床主要表现为静脉血栓，发病部位以下肢深静脉与肺栓塞常见；浅表性血栓性静脉炎、肠系膜静脉及脑静脉血栓也较多见。PC缺乏症可由获得性或遗传性原因引起。 （1

14、）获得性PC缺乏症： 血浆蛋白C活性和水平降低可以由PC的生成减少、消耗过多、辅因子PS活性下降、以及药物、炎症、肿瘤、狼疮抗凝物等不同原因引起。（2）遗传性PC缺乏症7070、蛋白、蛋白S S的检测在的检测在ILIL的机器中有几种方法？的机器中有几种方法？二种，分别是ProS和Free Protein S 。7171、二种方法有何区别？、二种方法有何区别？一、ProS检测（用于检测蛋白用于检测蛋白S S的功能的功能）：（1）检测原理：通过测定组织因子，磷脂，钙离子，和活化蛋白C存在情况下凝血酶原时间的延长程度进行S蛋白检验，以测定游离S蛋白的功能活性。S蛋白的活性和加入稀释剂的S蛋白缺乏的样

15、本的凝血时间的延长是成比例的。（2）试剂：蛋白S试剂盒组成:蛋白蛋白S S试剂试剂(P/N 0020002810): 3瓶干冻制剂，制剂中含有重组兔组织因子、合成磷脂、钙离子、激活蛋白C、聚凝胺、 缓冲剂、稳定剂和防腐剂。 蛋白蛋白S S 缺乏血浆(P/N 0020002820): 5 瓶干冻的人类血浆，血浆中人工去除S蛋白。 蛋白蛋白S S 质控血浆(P/N 0020002830): 2 瓶干冻的人类血浆，血浆中S蛋白水平低。（3）试剂的稳定性： 蛋白S试剂-溶解后的稳定性：- ACL-FAMILY Systems:2-8环境下保存3天, 原装瓶内-20环境下保存15 天或在系统中15保存2

16、天。- ACL Futura and ELECTRA Systems: 2-8保存16 小时, -20在原装瓶内保存7天或15在系统中保存8 小时。蛋白S缺乏血浆-溶解后的稳定性:15-25原装瓶内保存4小时或 -20保存7 天。蛋白S质控血浆-溶解后的稳定性: 15-25原装瓶内保存4 小时或 -20保存7 天。注意注意: :使用前，冰冻试剂和血浆应在37下解冻并轻轻混匀。冰冻前应用塑料管和塞子分装。不要重新冰冻。 为确保稳定性，应将试剂从系统中取出，置于原装小瓶中，2-8储存。 （4）对血浆标本的要求： S 蛋白的结果在以下情况不受影响：肝素水平低于 2IU/ml（普通肝素或低分子肝素）

17、，胆红素低于 150mg/dl，凝血酶低于 200mg/dl，甘油三酯低于 1000mg/dl。溶血和浑浊的样品不应分析。S 蛋白实验结果可被激活因子 VII（FVIIa）和因子 V Leiden 突变（活化蛋白C抵抗 APC-C）所抑制活性。特别是纯合子基因缺陷的患者。为避免活化蛋白 C 影响 S 蛋白值的可能性，超过正常范围的患者样本应用 S 蛋白缺乏血浆 1:2 人工稀释后重新分析。最终结果需加倍（以校准稀释的影响） 。二、Free Protein S 检测（用于检测蛋白用于检测蛋白 S S 的量的量）： （1）检测原理： 免疫比浊法： 第一步先向待检血浆里加入吸附了乳胶的纯化 C4B，

18、在钙离子存在的情况下，血浆中的游离 PS 与 C4B 结合；第二步再加入抗 PS 的单克隆抗体乳胶试剂，使其血浆中 PS-C4B 复合物结合成大复合物。待检血浆中大分子复合物的浓度与游离 PS 的量成正比。 （2）试剂： C4BP 缓冲液、C4BP 乳胶试剂、标记抗蛋白 S 单克隆抗体的乳胶试剂。试剂贮存时均不能冷冻。 （3）对血浆标本的要求： 肝素（普通肝素、低分子肝素）1.5IU/ml、溶血素 200mg/dl、胆红素 18mg/dl、甘油三酯 1280mg/dl、血小板 1011 /L、类风湿因子 350IU/ml 时结果不受影响。7272、蛋白、蛋白 S S 缺乏的临床意义如何？缺乏的

19、临床意义如何？ PS 缺乏的主要临床表现为静脉血栓形成，包括反复的深静脉血栓、肺栓塞、脑或肠系膜血栓形成。主要发生在年轻人。 （1）获得性 PS 缺乏症： 促使 C4B 增加，降低 FPS 的原因：妊娠、口服避孕药、糖尿病、炎症、系统性红斑狼疮、肾病、吸烟等； 促使 PS 降低的疾病：早产儿、维生素 K 缺乏、香豆素类药物治疗、乳腺癌化疗、肝病等； PS 与细胞结合增多的疾病：真性红细胞增多症、原发性血小板增多症等。（2）遗传性 PS 缺乏症。7373、狼疮抗凝物的检测原理是什么？、狼疮抗凝物的检测原理是什么？ 包括二个试验内容 LAC-S（狼疮抗凝物筛选试验） 、LAC-C（狼疮抗凝物确认试

20、验） 。 第一步是 LAC-S，试剂中含有与蝰蛇毒结合的稀释磷脂，该试验对 LAC 非常敏感。蝰蛇毒可直接激活因子，在因子的辅助下可激活凝血酶，最终形成纤维蛋白，引起血浆凝固。如果待测血浆中含有 LAC（抗磷脂抗体） ，则凝固时间明显延长。 如果 LAC-S 结果明显延长，则必须做 LAC-C。 第二步 LAC-C：试剂中含有高浓度的磷脂，如果检测结果恢复正常，则证明血浆中确有磷脂抑制物存在。 第三步按下式计算结果： LAC-SLAC-S 值值/LAC-S/LAC-S 正常人均值正常人均值=LAC-S=LAC-S 比率比率 LAC-CLAC-C 值值/LAC-C/LAC-C 正常人均值正常人均

21、值=LAC-C=LAC-C 比率比率注：注：LAC-SLAC-S、LAC-CLAC-C 正常人均值来源于该试剂说明书，各实验室应建立自己的正常值。正常人均值来源于该试剂说明书，各实验室应建立自己的正常值。 LAC-SLAC-S 比率比率/LAC-C/LAC-C 比率比率= =标准化标准化 LACLAC 比率比率 结果解释： 标准化比率2.0 有大量 LAC 存在 标准化比率在 1.5-2.0 之间 中等量 LAC 存在 标准化比率在 1.2-1.5 之间 少量 LAC 存在本试验无需定标本试验无需定标7474、血浆标本对狼疮抗凝物检测的影响如何？、血浆标本对狼疮抗凝物检测的影响如何？黄疸、脂血

22、和发生溶血的样品可能给出假阳性结果。在ACL Futura/ACL Advance Systems系统上测定，在血红蛋白不超过400 mg/dL，胆红素不超过20 mg/dL，及甘油三酯不超过295 mg/dL时，所得结果不受影响。在ACL Systems系统上测定，在血红蛋白不超过100 mg/dL，胆红素不超过21.7 mg/dL，及甘油三酯不超过329 mg/dL时，所得结果不受影响。在ACL TOP系统上测定，在血红蛋白不超过125 mg/dL，胆红素不超过13 mg/dL，所得结果不受影响。脂血样品和混浊样品不应测定。7575、狼疮抗凝检测的临床意义如何？、狼疮抗凝检测的临床意义如何

23、？ LAC阳性的患者在临床上并不出血，反而与血栓形成有关，LAC阳性患者中约有1/3发生血栓，最常见的是深静脉血栓、肺栓塞及大血管血栓。由于凝血和抗凝血过程均依赖磷脂的参与，因此LAC由于抑制磷脂的生物学特性，在体外产生抗凝效应，而在体内可促进血栓的形成。7676、什么情况下需要检测狼疮抗凝物？、什么情况下需要检测狼疮抗凝物？ 反复发生的习惯性流产 。15-20% RSA due to APA怀孕2-3个月发生胎儿宫内死亡胎儿生长延迟、早熟新生儿血栓症获得性血栓形成倾向：动脉:脑动脉血栓形成 50岁以下的中风占30%冠状动脉血栓、视网膜动脉血栓静脉:DVT & PE、肾静脉血栓、肠系膜

24、静脉血栓7777、普通肝素（、普通肝素（HepUFHepUF）和低分子肝素（）和低分子肝素（HepLMWHepLMW）检测的原理是什么？）检测的原理是什么？发色底物法：首先向待检血浆中加入AT，血浆中的肝素与AT结合成肝素-AT复合物。然后再向血浆中加入过量的因子a，肝素-AT复合物可以灭活因子a的活性。剩余的因子a可以水解随后加入的底物，释放出显色剂pNA。pNA的量与血浆中肝素水平呈反比。根据临床病人所使用的肝素种类不同，选择使用不同的定标物做定标曲线。7878、肝素的作用是什么？临床检测肝素的意义是什么？、肝素的作用是什么？临床检测肝素的意义是什么？ 肝素的抗凝作用是： （1）增强抗凝血

25、酶（AT）灭活凝血酶的作用；（2）灭活因子a、a、a、a；（3）降低血浆纤维蛋白原水平，而减轻高凝状态；（4）提高纤溶酶原激活剂的血浆浓度，增强纤溶活性，加速血栓溶解。检测肝素的临床意义在于：（1）检测血浆肝素浓度；（2）监测不良反应。7979、D-D-二聚体的检测原理是什么？二聚体的检测原理是什么？ 免疫比浊法：D-二聚体胶乳试剂是一种大小均一的聚苯乙烯胶乳颗粒悬浮液，这些胶乳颗粒上包被着对纤维蛋白降解产物 D-二聚体具有高度特异性的单克隆抗体，当含有 D-二聚体的血浆与 D-二聚体试剂盒中的胶乳试剂和试剂缓冲液混合时，包被的胶乳颗粒会产生凝集。凝集程度与样本中 D-二聚体的浓度成正比，并通

26、过测量于 405 nm 波长处由于凝集引起的透射光的减少（比浊免疫测定法）进行 D-Diemr 测定。8080、D-D-二聚体的试剂包括那些内容？二聚体的试剂包括那些内容？ D-二聚体试剂盒包括：（1）胶乳试剂（货号 0020008520）：43ml，包被有鼠单克隆抗体（MA-8D3 的聚苯乙烯胶乳颗粒冻干悬浮液，与含有牛血清白蛋白，缓冲液，稳定剂和防腐剂的D-二聚体直接对比。（2）反应缓冲液（货号 0020008521）：39m，磷酸缓冲液，其中含有牛血清白蛋白，稳定剂和防腐剂。（3）D-二聚体校准品（货号 0020008522）：21ml，从人纤维蛋白（经人纤溶酶酶切）中部分纯化的 D-二

27、聚体冻干溶液，含有牛血清白蛋白，缓冲液，稳定剂和防腐剂。8181、D-D-二聚体试剂的贮存条件是什么？二聚体试剂的贮存条件是什么？ 未开封的试剂如果贮存在 2-8下，在瓶上标明的失效期前保持稳定。（1）胶乳试剂 复溶后的稳定性：2-8下在原包装瓶中 1 个月，15下在 ACL 9000/10000 上 1 天，15下在 ACL 6000/7000 上 6 小时，15下在 ACL Futura /ACL Advance 系统上 1 周内保持稳定。不要冷冻。（2）反应缓冲液：已开封的试剂保存在原瓶中 2-8下 1 个月内保持稳定，15下在 ACL 9000/10000 上 1 天，15下在 ACL

28、 6000/7000 上 6 小时，15下在 ACL Futura /ACL Advance 系统上 1 周内保持稳定。（3）D-二聚体定标品 复溶后的稳定性：贮存在原包装瓶中，15-25下 3 天，2-8下 1 个月或-20下 2 个月保持稳定。使用前必须将冷冻的校准品于 37下融化并轻轻混合。不要再次冷冻。8282、血浆标本质量对、血浆标本质量对 D-D-二聚体试验的影响有哪些？二聚体试验的影响有哪些？在ACL and ACL Futura/ACL Advance系统上D-二聚体检测结果在血红蛋白小于50mg/dl，甘油三脂小于1000 mg/dL 或者 胆红素小于5mg/dL，类风湿因子

29、小于60IU/ml时，结果不受影响。在ACL TOP上D-二聚体检测结果在血红蛋白小于100 mg/dL，胆红素小于10 mg/dL及甘油三脂小于 1500 mg/dL时不受影响。类风湿因子的存在会提高样品结果，D-二聚体乳胶试剂采用特异性针对交联的纤维蛋白的降解产物D-二聚体片段的单克隆抗体(MA-8D3) ，纯化的D及E片段血浆浓度在20ug/ml以上，交叉反应仍极低。8383、D-D-二聚体结果报告时应注意什么？二聚体结果报告时应注意什么？ 在ACL Family上不超过 20000 ng/mL和ACL Futura/ACL Advance/ACL TOP上不超过100000 ng/mL

30、的条件下没有发生前带反应。结果高于1050 ng/mL的样本应使用因子稀释液以1:5的比例（50l样本200l因子稀释液）进行稀释。如果结果仍然高于1050 ng/mL，需要重复上述步骤（即稀释比例为1:25或1:125） 。结果必须乘以5.25或125（取决于稀释步骤数量）作为稀释校正。具有自动重复运行供能的仪器可自动进行1:5稀释和结果校正，因此检测范围扩大至5250 ng/mL。在标准检验中，高于5250 ng/mL的样本必须以1:25或1:125的比例手工稀释，报告结果根据稀释系数进行校正。8484、什么是、什么是D-DHSD-DHS试验，与试验，与D-DimerD-Dimer有何不同

31、？有何不同？ D-DHS是ACL-TOP上新开发的试验，其原理是：D-二聚体胶乳试剂是一种大小均一的聚苯乙烯胶乳颗粒悬浮液，这些胶乳颗粒上包被着单克隆抗体的 F(ab)2 片断，这种单克隆抗体对纤维蛋白可溶衍生物中所含的 D-二聚体高度特异。F(ab)2 片断的使用使得该 D-二聚体的检测特异性更高，有效地避免了某些如类风湿因子等的内源因子的干扰。把含有 D-二聚体的血浆和本试剂盒中的乳胶试剂及反应缓冲液混合，包被的乳胶颗粒就开始凝集。凝集程度和样品的 D-二聚体浓度呈正相关，可通过测量凝集物透射光的减少量确定 D-二聚体浓度。D-DHS 的线性范围远高于 D-Dimer，为 150-3680

32、ng/mL，自动重稀释后可达到 150-69000 ng/mL；而 D-Dimer 的结果未稀释时为 1050ng/ml,自动重稀释后为 5250ng/ml。D-DHS当仪器自动再检功能开启时，检测范围上限达69000 ng/mL。如果结果仍然超过检测范围，样品可手工稀释达100倍(20L 样品 + 1980L 因子稀释剂)，重新测定后结果应乘以100。在含量高达197000 ng/mL情况下，试验仍无出前带效应。8585、D-DHSD-DHS检测时的血浆标本影响有多大？检测时的血浆标本影响有多大？ 在ACL TOP上测定D-二聚体含量，当含有的血红蛋白不超过500 mg/dL、胆红素不超过1

33、8 mg/dL、甘油三酯不超过1327 mg/dL，及类风湿因子不超过1400 IU/mL，FDP含量小于10g/mL时，结果不受影响。接受过鼠单克隆抗体诊断或治疗的患者的血浆样品可能会含有人抗鼠抗体（HAMA） 。由于这项免疫测定使用鼠单抗，HAMA的存在可能会导致测定结果偏高。HemosIL D-二聚体HS试剂盒的反应缓冲液含一种HAMA的阻抑剂，以把干扰降到最低。8686、D-DHSD-DHS的试剂包括哪些内容？的试剂包括哪些内容？（1） 乳胶试剂（目录号 0020007720）：3 小瓶 x 2 mL；小鼠单克隆抗体(MA-8D3)，包备 F(ab)2 片断的聚苯乙烯乳胶颗粒的低压冻干

34、品，其中还含有缓冲剂、稳定剂及防腐剂。（2）反应缓冲液（目录号 0020007721）：3 小瓶 x 2 mL；含牛血清白蛋白、稳定剂和防腐剂的磷酸缓冲液。（3）D-二聚体校准物 (目录号 0020007722)：2 小瓶 x 1 mL；部分纯化的 D-二聚体的低温冻干溶液，其中含有牛血清白蛋白、缓冲剂、稳定剂和防腐剂。8787、D-DHSD-DHS 试剂的贮存条件如何？试剂的贮存条件如何？（1）乳胶试剂-复溶后的稳定性：在原瓶中 2-8可存放 1 月；或者在 ACL TOPTM 系统中 15存放 4 天。不可冷冻。（2）反应缓冲液-已开封的试剂稳定：在原瓶中 2-8可存放 1 月，或者在 A

35、CL TOPTM系统中 15存放 4 天。（3）D-二聚体校准物-复溶后的稳定性：在原瓶中15-25可保存3天，2-81个月，或者-202个月。冷冻的校准物可以在37化冻，用前轻轻摇匀。不可再次冷冻。8888、D-D-二聚体在血栓性疾病中的诊断意义何在？二聚体在血栓性疾病中的诊断意义何在？D-二聚体的存在并不是确诊血栓症的指标 阳性预期值阳性预期值D-Dimer的缺失却可以排除血栓症 阴性预期值阴性预期值8989、D-D-二聚体水平升高的临床意义如何？二聚体水平升高的临床意义如何？ 血栓形成时，在凝血酶激活下，纤维蛋白原形成可溶性纤维蛋白单体，这些单体经过聚合，通过被激活的因子X IIIa 的

36、作用交联成网，形成稳定的聚合体，并网罗血细胞形成红血栓。与此同时，体内的纤溶系统被激活，纤溶酶激活了纤维蛋白和纤维蛋白原的组成的纤维蛋白聚合体，生成纤维蛋白和纤维蛋白原降解的多种降解产物碎片（FDP）。其中，D-二聚体（DD）是交联纤维蛋白的特异降解产物。只有血栓中的纤维蛋白降解才能形成DD，而纤维蛋白原不能形成DD，它是体内血栓降解的特异产物。D-二聚体的生成及水平的提高，反映了凝血及纤溶系统的激活。DD 升高的疾病包括：静脉血栓栓塞（DVT)，肺栓塞（PE），DIC 的早期诊断和治疗、预后评估，各种术后、创伤后，急性心梗，不稳定心绞痛，脑血管疾病，恶性肿瘤，重症肝炎，先兆子痫，长期卧床，口

37、服避孕药，遗传性抗凝系统缺陷，糖尿病，肾病综合症等。健康成人正常上限值为230ng/ml (ACL TOP)影响D 二聚体检测水平的因素包括：血栓发生的时间，过早检测或陈旧性血栓其D 二聚体水平不高。凝块的大小，纤溶能力以及正在进行抗凝治疗等特定VTE 高危人群，如骨关节置换，需要做特定的针对此类人群的上限值（CUTOFF）值，因为此类人群的DD 水平远高于健康人群，为900ng/ml。9090、什么是纤溶酶原（、什么是纤溶酶原（PLGPLG）？检测原理是什么？）？检测原理是什么？PLG是由血管内皮细胞合成并释放的一种单链糖蛋白，血浆浓度约为210mg/L。PLG在血浆中是没有活性的，必须在纤

38、溶酶原激活剂的作用下，单链的纤溶酶原转变成双链的有活性的纤溶酶。PLG的检测使用的是发色底物法：首先将链激酶（纤溶酶原激活剂）加入待检血浆，使纤溶酶原活化成纤溶酶；然后再向血浆加入显色底物。纤溶酶可以水解底物释放出显色剂PNA，PNA的量与血浆中纤溶酶原的量成正比。9191、血浆标本质量对、血浆标本质量对PLGPLG检测的影响是什么？检测的影响是什么？纤溶酶原的结果在ACL、ACL8/9/10000、ACL Futura、ACL Advance上不会受到，纤维蛋白原水平升高，低于2Uml肝素（UF或LLMW肝素） ，低于200mg/dl血红蛋白，低于20mgdl胆红素，低于30mgdl的FDP

39、以及低于1000mgdl甘油三酯的影响。纤溶酶原的结果在ACL TOP上不会受到，低于4Uml肝素（UF或LLMW肝素） ，低于500mg/dl血红蛋白，低于27mgdl胆红素，低于10ugml的FDP以及低于2320mgdl甘油三酯的影响。9292、PLGPLG的试剂如何贮存？的试剂如何贮存？（1）发色底物复溶后的稳定性：在原瓶中，贮存于 15为 7 天，在 2-8中为 3个月，在-20中为 6 个月。在 ACL Futura/ACL Advance/ACL TOP 系统上，贮存于 15C中为 5 天。（2）链激酶试剂复溶后的稳定性：在原瓶中，贮存于 15中为 7 天，在 28中为 3 个月

40、。在20中为 6 个月。在 ACL Futura/ACL Advance/ACLTOP 系统上，贮存于15中为 5 天。9393、PLGPLG 检测的临床意义是什么？检测的临床意义是什么？ 纤溶酶原活性减低，表明其激活剂的活性增强，见于原发性纤维蛋白溶解、重症肝炎、肝硬化、肝移植、大型手术、前置胎盘、胎盘早剥，严重感染、DIC 等。纤溶酶原活性增加提示纤溶激活能力不足，可见于某些血栓前状态和血栓性疾病。9494、什么是纤溶酶抑制物（、什么是纤溶酶抑制物（PIPI）？检测原理是什么？）？检测原理是什么？纤维蛋白酶抑制物是由肝脏细胞产生的一种糖蛋白，血浆中浓度约为 70ug/L。PI 检测采用发色

41、底物法：待检血浆中加入过量的纤溶酶，经过孵育后，再加入显色底物。加入的纤溶酶与血浆中的纤溶酶抑制物结合，剩余的纤溶酶水解显色底物，释放出显色剂。显色剂的量与血浆中纤溶酶抑制物的量呈反比。9595、PIPI 检测的临床意义是什么？检测的临床意义是什么？ （1）水平升高：多见于高凝状态和血栓性疾病，如动脉和静脉血栓形成，孕妇（正常妊娠后期 PI 水平可明显升高） 、恶性肿瘤（患者腹水肿的 PI 含量明显升高）等；（2）水平降低：见于原发性和继发性纤溶症，如肝病、大手术后、DIC、先天性缺乏症等。9696、IL 血凝定标品的溯源性文件有哪些？血凝定标品的溯源性文件有哪些？一IL 血凝定标品中的下列相

42、关项目溯源于英国国家生物标准及控制研究所(NIBSC)所提供的标准品：FACTOR II2ND I.S.Lot Number 94/746FACTOR VII2ND I.S.Lot Number 94/746FACTOR VIII4th I.S.Lot Number 97/586FACTOR IX3rd I.S.Lot Number 99/826FACTOR X2ND I.S.Lot Number 94/746ANTITHROMBIN2ND I.S.Lot Number 93/768PROTEIN C1ST I.S.Lot Number 86/622PROTEIN S1ST I.S.Lot N

43、umber 93/590Von WILLEBRAND FACTOR4TH I.S.Lot Number 97/586FIBRINOGEN2nd I.S.Lot Number 98/612二. IL 血凝定标品中的下列项目溯源于超过 100 例献血员的正常混合血浆得到的大样品标准FACTOR VFACTOR XIFACTOR XIIPROCOMPLEXHEPATOCOMPLEXPLASMINOGENPLASMIN INHIBITOR三PT INR 可溯源的国际标准由于 WHO 的国际参考品（IRP）- BCT/253 几乎用完，WHO 选用 X/95 做为国际标准品。IL 的 PT INR 值溯

44、源至 X/95。各个试剂厂家应用国际参考品确定其所生产的 PT 试剂的 ISI值（国际敏感度指数） ，得到国际标准化比值（INR） 。四D-Dimer 目前没有可溯源的国际标准由于各厂家采用的 D-Dimer 抗体各不相同，很难统一，所以目前没有可溯源的国际标准。FDA 510K 认证认证：IL D-Dimer 不仅得到 FDA 510K 关于可以用于 D-Dimer 定量测定的认证，而且得到 FDA 510K 关于可以用于 DVT/PE 血栓性疾病排除诊断的认证。五APTT，TT 无需定标，没有溯源标准97、凝血试验的标本采集应注意哪些问题？、凝血试验的标本采集应注意哪些问题？凝血试验的标本

45、采集，必须按照规定的方法（详情请参照 NCCL H21-A2 文件，1991） ，以保存凝血因子的全部特性，严格防止凝血因子和血小板被激活。（1（ 请将第二管血液用于凝血项目的检验，第一管血可用于其他化学试验。（2（ 止血带不要扎得太紧，采血时间不要超过 5 分钟，如采血不顺利，血流速度缓慢或多次穿刺采血困难，会激活凝血机制，使凝血因子活性增高，血小板假性降低，也可导致产生微小凝块。（3（ 采用硅化或塑料注射器，针头必须采用 21（外径 0.80mm 以上）号以上，儿童可用 23 号。不能使用血气用注射器。（4（ 不要在输液的同时采血。否则会稀释血液，导致凝血时间延长。（5（ 采完血后，应拔掉

46、针头，沿管壁将血液缓缓注入试管，要避免产生气泡，因为泡沫的产生会使某些因子变性。（6（ 严格按照抗凝剂的比例要求的取血量，将全血加入试管，取血量的误差要求小于 10%。（7（ 血注入试管后，要立即轻轻颠倒混匀（完全颠倒 5 次以上） ，如混匀不完全，则会产生微小血凝块，导致错误的实验结果。避免用力震荡而破坏凝血蛋白。98、血凝标本的贮存应注意什么问题？、血凝标本的贮存应注意什么问题？（1）血液要求采集于带盖子的硅化玻璃试管中，或塑料试管中。因为无盖子会使血液中的 CO2 丢失，PH 值增高，使 PT 和 APTT 结果延长。（2）常规凝血试验应在 4 小时内完成（APTT） 。随着标本存放时间

47、的延长凝血因子会不断降解。不同凝血试验，对样本保存时间的要求也不同。（3）离心力为 1500g，将标本离心 15 分钟（大离心机 3000 转，离心 15 分钟） ， 以获得乏血小板血浆。（4）如要吸出血浆，应使用塑料吸管，不要用玻璃吸管，因为玻璃会激活凝血因子。（5）如需要保存样本，则应将血浆吸出，存放于塑料试管中，密封后快速冷冻，储存于-20 度，或-70 度冰箱中。（6）冷冻保存的样本，只可复融一次。（7）复融时，应将冷冻血浆置于 37 度水浴中，轻轻摇动，使其迅速融化。99、试验前准备试剂时应注意些什么问题？、试验前准备试剂时应注意些什么问题？（1）将试剂，质控，标准品从冰箱中取出。

48、-仅仅取出你所需要的； -立即将整盒包装放回冰箱； -复溶试剂时将日期标在试剂瓶上已备查看。（2）将需要的质控品和标准品倒入小杯子。 -将瓶内剩余物立即放回冰箱； -质控品和标准品在室温中放置时间越长，降解越快； -不要将已经使用过的质控品和标准品倒回原瓶。 （3）当复溶试剂时使用干净的吸管移液管。 -如果使用洗过的移液管，要保证不要残留清洗剂； -不要将移液管保存在盛有水的烧杯中，每次溶试剂时要使用一根新的移液管。 （4）复溶试剂时不要盖错试剂瓶的盖子。 （5）不要将用过的剩余试剂倒入一瓶新试剂内，否则会污染整瓶新试剂。 （6）当你收到一批新运来的试剂时： -在这批试剂盒上标注日期，并记录保

49、存温度； -需冷藏的试剂在运输时也需要有适当的温度，如果你收到这盒试剂时，试剂很热，那么将温度记录在试剂盒上。当使用这盒试剂时，如果出现问题，便于查找原因。 100、当血凝结果与临床不相符怎么办？、当血凝结果与临床不相符怎么办？首先检查质控结果及定标结果 区分问题原因：系统问题，样本问题 101、质控结果突然变化的原因有哪些？、质控结果突然变化的原因有哪些？（1）质控品问题，试剂问题： 是否换新批号？ 输入的值是否正确（ISI，定标靶值）？是否新的发货？ 有一些在不同时间运输过来的试剂也可能会产生问题。如果有可能，试用另一盒试剂，另一批运输的试剂或另一批号的试剂。 是否使用冻过的试剂？ 试剂配

50、制的问题：水的问题、吸液不准的问题、污染问题。 （2）质控结果有持续变化的倾向： 系统被污染：瓶子（用来稀释试剂的）污染、水、吸管( 清洗时残留清洁剂)、试剂池污染（ACL100-7000） 、开盖的试剂，试剂的蒸发浓缩。冲洗站污染 吸样针组件的问题： 脏，或有蛋白纤维的沉积； 稀释系统问题 漏夜试剂保存方法、试剂接近效期 102、如果总是发现第一个样本出问题，可能的原因有哪些？、如果总是发现第一个样本出问题，可能的原因有哪些？可能是吸样或流路问题，按下列流程检查： （1）.检查试剂瓶有无气泡； （2）检察管路，组件有无气泡； （3）冲洗，去除气泡； （4）执行 Cleaning proced

51、ure； （5）确定针位； （6）在第一，二个位置作质控； （7）如果问题依然存在，请工程师来检查流路。103、如果偶见或经常发现样本或质控重复性不好的原因是什么？、如果偶见或经常发现样本或质控重复性不好的原因是什么？（1）试剂瓶有无气泡； （2）检察管路，组件有无气泡； （3）针位是否正确，反应池内有无污迹； （4）反应杯（盘）是否重复使用； （5）请工程师。104、影响血凝试验结果的血浆标本质量有哪些原因？、影响血凝试验结果的血浆标本质量有哪些原因？（1（ 这个样本是否有凝块?（2（ 样本放置了多长时间?（3（ 样本的离心（4（ 抗凝剂（ Sodium Citrate）的浓度 ? (3.2

52、% citrate is the recommended by NCCLS Guidelines)（5（ 取血时血样是否被正确加入试管?（6（ 是否将足够的样本加入样本杯?（7（ 是否取血困难?（8（ 取血时患者是否在输液，是否从输液管旁边取血?（9（ 样本是否有黄疸，溶血，高脂血 ?（10（患者用了什么药?（11（患者患有何种疾病？（12（如果样本是外面送来的，确定是血浆还是血清?（13（加入样本杯时混有气泡吗？105、为什么有些试验要用乏血小板血浆？、为什么有些试验要用乏血小板血浆？（1）血小板的磷脂膜参与凝血过程（2）活化的血小板释放综合肝素的血小板 4 因子 （3）20% 的 Fact

53、or V 来自血小板 （4） 狼疮抗凝物可以被血小板释放的磷脂结合，导致假阴性（5）Heparin - 被血小板中和，结果假性降低（6）Factor V 测定 - 假性增高 （7）PT,APTT - 时间缩短。106、如果在一台仪器上，对于一个或多个项目分析，所有患者、如果在一台仪器上，对于一个或多个项目分析，所有患者/所有水平的质控都受影响，所有水平的质控都受影响，可能那些问题？可能那些问题？（1）仪器精密度差： 管路堵塞 ，管道被压紧， 管道连接不好，针堵或有沉积物。（2）放错试剂。（3）仪器被污染。（4）分析区脏。（5）光路问题。 （6）针的位置。 （7）需要系统保养。 107、IL 公

54、司的血凝试剂中有几种质控品？分别是用于哪些试验项目？公司的血凝试剂中有几种质控品？分别是用于哪些试验项目？常用的质控品有三种：常规试验质控（ASSAYED） ；特殊试验质控（Special Test Control Level） 、其它项目自带质控（FIB-C、D-D） 。（1）常规试验质控（三个水平）使用的血凝项目：PT、APTT、FIB、TT、AT、因子、vWF、PLG、PI、PC、PS 等项目的质控。（2）特殊试验质控（二个水平）使用的血凝项目：1 水平用于：AT、PLG、PI、PC、PS 等项目的异常低水平质控，以及 vWF 的正常水平质控。2 水平用于：AT、PLG、PI、PC、PS

55、 等项目的异常高水平质控，以及 vWF、因子的异常低水平质控。 （3）FIB-C 的质控品是试剂盒内自带，D-D 的质控品是专门的。108、在、在 ACL 机器上参比液（机器上参比液（Reference Emulsion） 、洗涤液（、洗涤液（Wash-R Emulsion） 、冲洗液、冲洗液（Rinse Solution）分别用在哪些型号机器上？）分别用在哪些型号机器上？ （1）参比液（Reference Emulsion）：ACL100-7000 （2）洗涤液（Wash-R Emulsion）：ACL8000、9000、ELITE、ELITE-PRO （3）冲洗液（Rinse Soluti

56、on）：2000ml 包装的用于 ACL-FUTURA、ADVANCE；4000ml 包装的用于 ACL-TOP。109、什么是凝固曲线？、什么是凝固曲线？凝固曲线是在试验时加入了“启动”试剂后，由仪器的分析模块进行数据读取后获得的。读取到的数据经过收集后被传输的控制模块，经过预定的数学法则处理后，最终的数据将以原始计数对时间的图形形式表现出来。原始计数减少表示光密度增加。110、哪些因素可以影响凝固曲线的形状？、哪些因素可以影响凝固曲线的形状？凝固曲线是整个试验过程的最终产物，在任意一个时期有任何的影响因素介入都有可能影响凝固过程，并由此影响到凝固曲线的形状。 （1）标本的质量与采集： 有凝

57、块、保存不当、过渡抗凝、过于陈旧的标本。（2）试剂：陈旧的试剂、复融不当、安放试剂的位置不当、在要求放搅棒的地方未放置搅棒、交叉污染。（3）机械原因：加样针损坏（包括样本与试剂加样针） 、读数区有液体溢、测试杯中有杂质、光路损坏。（4）病人临床状况：凝血因子缺乏、DIC、严重的脂血症、肝脏疾病、抗凝治疗。111、什么情况下需要查看凝固曲线？、什么情况下需要查看凝固曲线？ 检测结果报错（erro,fail）时均应查看凝固曲线，判断错误原因，找出解决的办法。（1（ 凝固曲线监测异常标本的凝固时间异常的原因，如低纤维蛋白，肝素的影响，DIC 特异的曲线图等。（2（ 反应曲线协助免疫比浊法/发色法的判

58、断本底干扰，浓度高低，免于反复检测浪费试剂及试剂。112、凝固曲线在、凝固曲线在 ACL 机器上都是一样的吗？机器上都是一样的吗？ 由于 ACL 系列血凝仪器检测标本所使用的光波长不同，检测原理各异，所以同一个项目的凝固曲线是不一样的： ACL8000、9000、ELITE、ELITE-PRO：凝固法光波长 660nm，散射比浊法。 ACLFUTURA、ADVANCE：凝固法波长 880nm，透射比浊法。 ACL-TOP：凝固法波长 671nm，透射比浊法。113：因子试验定标失败或结果不准确的原因是什么？：因子试验定标失败或结果不准确的原因是什么？114114、发色底物法定标失败或结果差的原

59、因是什么？、发色底物法定标失败或结果差的原因是什么？115115、血凝仪器的报警有哪几种？有什么不同？、血凝仪器的报警有哪几种？有什么不同？有三种，分别是：FAILURES（失败）, ALARMS（警报）， WARNINGS（警告） （1）Failures（失败）（失败）机器停机，不能操作。立即关机，等待 1 分钟后再开机。操作手册上的其它操作。如果问题仍存在，叫工程师。 （2）Alarms（警报）提醒操作者该问题需要立即解决。机器的某些操作仍可继续。一般情况下关机后等待 1 分钟再开机即可。可选择操作手册上的其它操作。如果问题仍存在，叫工程师。 （3）Warnings（警告） WARNING

60、 信息发生时，机器仍继续运行，但会有某些限制。警告符号 出现在屏幕下方。点击这个图标可以看到问题的原因。116、机器的温度报警该怎么办？、机器的温度报警该怎么办？（1）孵育温度超范围孵育区温度超出 38-39C 。这个信息在开机后 30 分钟内出现是正常的。如果分析盘盖子打开时，此信息可以发生在正常操作中。 如果开机运行后始终存在该报警，叫工程师。Peltier 温度超范围发生在试剂位 (R1R4) ，温度超过 12-15C ，该报警在开机 30 分钟内属于正常。为了使试剂使用时间尽量长，在没有试验时，将试剂放置在冰箱以避免因高温而失效。 选择 Diagnostic, then Temperature