加压毛细管电色谱仪的

1、分子生物研究中心主讲人:李少伟1微型分离技术2micro-hplc 和 ce的结合3电渗流 (eof) 为流动向的推动力4二维分离机理：液相色谱和电泳之和（分配和电泳淌度）用途:分析生物活性肽中草药多糖等的成分分析.建立中草药的指纹图谱.药品的质量监控.结合高电压系统可提高分析效率.并使图谱更清晰明了.hw-001(001,20050727 15;55;32)血 清 肽hw-001(002,20050727 16;23;19)血 清 肽 -10kvhw-001(003,20050727 16;48;15)血 清 肽 +10kvhw-001(004,20050727 16;59;21)血 清 肽

2、 +20kv1.822.22.42.62.833.2mv12345678910min图形分析:黑色代表普通hplc的血清肽图谱.粉色代表加-10kv电压后血清肽图谱.黄色代表加+20kv电压后血清肽图谱.说明分析: 加负电压后血清肽的出峰时间向后延迟,加正电压后出峰时间向前平移.表明血清肽合流动相后显负电性.样本在淌度和电压共同作用下谱图有变化.可以发现更多成分.同时提高分离效率.因为同一成分在流动相相同的情况下只是淌度不同.现在加了高电压.使以前需很长时间才能出现的峰现在只需很短时间就可出现.hw-001(002,20050720 15;46;14)hw-001(005,20050720 1

3、6;38;22)-5kvhw-001(003,20050720 16;07;46)-10kvhw-001(004,20050720 16;16;36)-15kv0.91.82.73.64.55.46.37.28.19mv0.91.82.73.64.55.46.37.28.19min黑色代表普通hplc的脾肽图谱.蓝色代表加-5kv电压后脾肽图谱.粉色代表加-10kv电压后脾肽图谱.黄色代表加-15kv电压后脾肽图谱. 出峰时间从5.6分提前到了3.4分.效率几乎底稿50%.而且各主要成分均完美再现.没有漏掉主要的峰.准备工作：样品：过滤（0.45或0.22m滤膜）流动相：过滤（0.45或0.2

4、2m滤膜），脱气, (注意：超声脱气时，水太热了要换) 主要包括四个模块：流体输送单元（solvent delivery module）；微流控制单元（micro flow control module）；高压电源（high voltage module）；检测器（detection module）和数据采集软件。各部分分别开关、设置工作参数和程序。 使用温度10-35，相对湿度不大于75%。可以进行毛细管微柱色谱、毛细管电色谱、加压毛细管电色谱、毛细管电泳分析。 1溶剂输送单元11 参数设置：反复按 func/back 键至显示所要设置的参数，按数字键输入后，enter 确认；设置下一参数，

5、主要参数设置完成，按ce 回到初始画面。常用参数包括流速flow（正常流速为0.02-0.05ml/min, 如果在这个流速范围内进样量太大，就增加流速；反之就减小流速）、最高、最低限压p.max/p.min等（最低限压建议设置大于0的数值，否则漏夜、进气保护功能不能发挥作用）121 单泵恒比例送液：使用两个溶剂输送单元中的一个，按比例配好流动相并超声脱气，设置流速，按pump开始输液122 双泵恒比例送液：一种方式是分别在两个溶剂输送单元上分别设置流速，输送需要混合的a、b两种溶剂；另一种方法是设置主泵和从泵：func/back 滚动至sys 项，将主泵设为2，（从泵此项为1），此时主泵面板

6、上的g.e.灯亮，在主泵面板上设置两种溶剂的比例conc和总流速flow后，按主泵pump开始送液（注意，辅泵的流速是总流速乘梯度的比例后的值，此值最好不要小于0.005ml/min, 否则辅泵流速不稳，影响梯度基线） 确认各溶剂系统互溶、确认各溶剂系统互溶、缓冲溶液中缓冲溶液中溶质不会析出结晶溶质不会析出结晶！ 注意：开色谱软件前要把微流控单元的开关打开。否则软件打不开。1.装柱前首先把毛细管检测窗口和检测池装检测窗口的位置都用分析纯的乙醇擦干净，等乙醇挥发完后，可以装柱。（注意不要用口吹干）2.把柱子的检测窗口对准检测池的小球，对着光看，是透光的说明位置正好3固定柱子的peek螺丝的pee

7、k管要插到底部固定螺丝，否则毛细管装好后还会移动。4然后盖上盖子，按对角顺序上四个螺丝并固定住。（注意不要一次性拧紧一个螺丝）5螺丝固定后，把出口端的毛细管插到peek管里，把池子安装到检测器上，6打开检测器，自检结束后，按func/back 滚动至看sample和reference 值是否正常，如果sample值太小，说明柱子没装好。7卸柱子时，一定要把柱子出口端的毛细管从peek管里拔出，是毛细管柱子处于自由状态后才卸四个螺丝。否则容易把柱子折断。1确认各部分正确连接，开启电源，启动数据采集软件unimicrotrisep workstation。设置参数及程序，平衡色谱柱2设置工作站信号

8、采集时间等，工作站工具栏绿色示意灯状态，准备采集信号3当进样控制面板的load灯亮时，用微量进样器进样，此时，样品被注入到进样阀的定量环中，定量环的体积是固定的2 l（本系统中见入毛细管柱内的样品量通常是10 l或20 l），与实际进样量无关，多余的样品会流到样品废液瓶中。但应注意，由于在进样孔与进样阀之间存在一个连接管，其体积约10 l，因此，每当进一个新的样品时，第一次进样的进样量要大于40 l，以确保样品置换了进样管路里所有的溶液到达进样阀的定量环，以后每次进样，进样量只须5l即可。要将样品注入色谱柱中时，按进样控制面板上的按键，经过约1 s后，inject灯亮，表示样品池已被连入流路系统，样品开始进入色谱柱。当inject灯亮时系统自动开始采集数据。同时需按下主泵run键开始梯度程序、高压电源run 启动高压电场。 4分析结束，存储色谱数据，reset停止高压。5清洗色谱柱、仪器管路、进样针，进样口；关闭各部分电源；填写使用记录。h w -001(002,20050720 15;46;14)h w -001(005,20050720 16;38;22)-5k