动物细胞工程3

1、二、动物细胞工程二、动物细胞工程常用技术手段常用技术手段 动物细胞培养动物细胞培养 动物细胞融合动物细胞融合 单克隆抗体单克隆抗体 胚胎移植胚胎移植 核移植核移植动物细胞培养技术动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技是其他动物细胞工程技术的基础。术的基础。(一）动物细胞培养一）动物细胞培养 阅读第阅读第70页：动物细胞培养，思考回页：动物细胞培养，思考回答下列问题答下列问题 ： （1）动物细胞培养液成分）动物细胞培养液成分 ？（2）动物细胞培养过程？）动物细胞培养过程？（3）原代培养与传代培养、细胞株与细胞系的区别？（4）动物细胞培养的应用？）动物细胞培养的应用？1.动物细胞培养液的主要成分：动

2、物细胞培养液的主要成分：葡萄糖葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清动物血清等。等。与植物培养基相比其特点是：与植物培养基相比其特点是：（1 1）液体培养基）液体培养基（2 2）含有动物血清）含有动物血清动物体细胞大都生动物体细胞大都生活在活在液体液体的环境的环境保证细胞顺利保证细胞顺利的生长增殖的生长增殖2.2.动物细动物细胞培养过胞培养过程：程：动物细胞培养 动物胚胎或幼龄动物的组织器官动物胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬浮液细胞悬浮液10代细胞代细胞50代细胞代细胞无限传代无限传代剪碎胰蛋白酶洗涤、稀释、分离原代培养用用胰蛋白酶胰蛋白酶分散细分散细胞，说明细胞间

3、的胞，说明细胞间的物质主要是物质主要是蛋白质蛋白质。动物细胞培养适宜动物细胞培养适宜的的ph为为7.27.4，此环境下胃蛋白酶此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，）没有活性，而胰蛋白酶而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。的活性较高。动物胚胎动物胚胎或幼龄动或幼龄动物的组织、物的组织、器官，它器官，它们细胞增们细胞增殖能力强，殖能力强，分裂旺盛，分裂旺盛，分化程度分化程度低，容易低，容易培养。培养。动物细胞培养动物细胞培养不能最终培养不能最终培养成生物体成生物体传代培养细胞株细胞株细胞系细胞系动物组织细胞间隙中含有一动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，定量的弹性纤维等蛋白质，将细

4、胞网络起来形成具有一将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。定弹性和韧性的组织和器官。细胞细胞悬浮悬浮液液1010代代细胞细胞5050代代细胞细胞无限无限传代传代原代培养原代培养传代培养传代培养细胞株细胞株细胞系细胞系如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？多数组织细胞固定在表面多数组织细胞固定在表面生长和分裂。生长和分裂。随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖遗传物质改变遗传物质改变动物细胞培养技术的应用动物细胞培养技术的应用（1 1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干 扰素、单克

5、隆抗体等。扰素、单克隆抗体等。（2 2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。皮。（3 3）用于检测有毒物质）用于检测有毒物质（4 4）用于生理、病理、药理等方面的研）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据究，为治疗和预防疾病提供理论依据这只老鼠身上的这只老鼠身上的“人耳人耳”是由我国是由我国科学家曹谊林教授科学家曹谊林教授利用细胞工程技术利用细胞工程技术复制出来的。复制出来的。细胞的全能性细胞的全能性细胞株、细胞系细胞株、细胞系植物体植物体培养结果培养结果获得细胞获得细胞或或细胞产物细胞产物快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株等无病毒植株

6、等培养目的培养目的葡萄糖、动葡萄糖、动物血清物血清蔗糖、植物蔗糖、植物激素激素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较项目比较项目植物细胞和动物细胞培养的比较植物细胞和动物细胞培养的比较 1 1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是变的细胞是 - -（ ） a a细胞系细胞系 b b细胞株细胞株 c c原代细胞原代细胞 d d传代细胞传代细胞2 2、动物细胞工程技术的基础是、动物细胞工程技术的基础是 - -（）（） a.a.动物

7、细胞融合动物细胞融合 b.b.单克隆抗体单克隆抗体 c.c.胚胎移植胚胎移植 d.d.动物细胞培养动物细胞培养ad3 3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞是这样的组织细胞 （ ） a.a.容易产生各种变异容易产生各种变异 b b具有更强的全能性具有更强的全能性 c.c.取材十分方便取材十分方便 d d分裂增殖的能力强分裂增殖的能力强d 4. 4.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于-（ ） a.a.

8、培养基不同；培养基不同； b.b.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；动物细胞培养不需要在无菌条件下进行； c.c.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能； d.d.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培 养成植株。养成植株。a1.1.诱导融诱导融合的方法：合的方法：诱导方式诱导方式物理法物理法化学法化学法生物法：生物法： 灭活的病毒灭活的病毒仙台病毒仙台病毒紫外线紫外线丧失感染性丧失感染性（不感染细胞）（不感染细胞）保留融合活性保留融合活性 （诱导细胞融合）（诱导细胞融合）2.2.过程：过程：灭活的病毒颗粒黏附于细胞表

9、面灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞细胞融合，形成杂种细胞（细胞膜具有一定的流动性）（细胞膜具有一定的流动性）设计方案：设计方案：一个效应一个效应b b淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖化学性质单一、特异性强的抗体。化学性质单一、特异性强的抗体。杂种细胞杂种细胞 ？ ？诱导其融合的诱导其融合的方法有哪些？方法有哪些？ 抗原抗原 效应效应b细胞细胞2.2.制备过程：制备过程：b bb b瘤瘤 瘤瘤瘤瘤 瘤瘤细胞融合后培养液中有几种细胞细胞融合后培养液中

10、有几种细胞筛选杂种筛选杂种细胞细胞已知细胞合成已知细胞合成dna有有d和和s两条途径，其中两条途径，其中d途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两条两条dna合成途径，但一般不分裂增值。鼠合成途径，但一般不分裂增值。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有骨髓瘤细胞中尽管没有s途径，但能不断分途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加peg促融，获得杂种细胞。促融，获得杂种细胞。主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体获得杂种植株获得杂种植株用途用途物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、

11、振物理（离心、振动动、电刺激）电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目植物、动物细胞融合的比植物、动物细胞融合的比较较3. 3.单克隆抗体的应用：单克隆抗体的应用： 在基础理论研究中具有重要意义在基础理论研究中具有重要意义 在疾病诊断、治疗和预防方面，具有在疾病诊断、治疗和预防方面，具有

12、特异性强、灵敏度高等优越性。特异性强、灵敏度高等优越性。生物导弹生物导弹一种诱导细胞融合的新方法一种诱导细胞融合的新方法一种新细胞一种新细胞灭活病毒灭活病毒杂交瘤细胞杂交瘤细胞一个优势一个优势单克隆抗体特异性强、单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势灵敏度高的优势1 1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交瘤细胞，经培养可产生大量的单克得到杂交瘤细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ） a.a.经过免疫的经过免疫的b b淋巴细胞淋巴细胞 b.b.没经过免疫的没经过免疫的t t淋巴细胞淋巴细胞c.c

13、.经过免疫的经过免疫的t t淋巴细胞淋巴细胞 d.d.没经过免疫的淋巴细胞没经过免疫的淋巴细胞a2.动物细胞融合最重要的用途是动物细胞融合最重要的用途是-（ ）a.克服远缘杂交不亲和克服远缘杂交不亲和 b. 制备单克隆抗体制备单克隆抗体 c.培育新品种培育新品种 d.生产杂种细胞生产杂种细胞3.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（ ）a. 诱导融合的方法完全相同诱导融合的方法完全相同 b.所用的技术手段基本相同所用的技术手段基本相同 c. 所采用的原理完全相同所采用的原理完全相同 d. 都能形成杂种细胞都能形成杂种细胞 bd4. 单克隆

14、抗体制备过程中培育的杂交瘤细胞是单克隆抗体制备过程中培育的杂交瘤细胞是-（ ）a.由小鼠能产生抗体的由小鼠能产生抗体的b淋巴细胞与肝细胞融合淋巴细胞与肝细胞融合 b.由小鼠一个由小鼠一个b淋巴细胞诱导融合而成淋巴细胞诱导融合而成 c.由小鼠一个由小鼠一个b淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 d.由小鼠一个效应由小鼠一个效应b淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成 d1.1.过程：过程：2.2.动物细胞培养技术的应用动物细胞培养技术的应用（1 1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。素、单克隆抗体

15、等。（3 3）用于检测有毒物质）用于检测有毒物质（2 2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。（4 4）用于生理、病理、药理等方面的研究，）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据为治疗和预防疾病提供理论依据 1 1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是变的细胞是 - -（ ） a a细胞系细胞系 b b细胞株细胞株 c c原代细胞原代细胞 d d传代细胞传代细胞2 2、动物细胞工程技术的基础是、动物细胞工程技术的基础是 - -（）（） a.a.动物细胞融合动物细胞融合 b.b.单克隆抗体单克隆抗体 c.c.胚胎移植胚胎移植 d.d.动物细胞培养动物细胞培养ad3 3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞是这样的组织细胞 （ ） a.a.容易产生各种变异容易产生各种变异 b b具有更强的全能性具有更强的全