抗核抗体检测及临床意义张瑾PPT课件

1、 风湿免疫性疾病诊断方法风湿免疫性疾病诊断方法症状、体征症状、体征自身抗体自身抗体影像学检查影像学检查病理病理第1页/共56页风湿免疫性疾病相关自身抗风湿免疫性疾病相关自身抗体体抗核抗体谱（抗核抗体谱（ANAsANAs）类风湿关节炎相关抗体类风湿关节炎相关抗体(RF, (RF, 抗抗CCPCCP等等) )抗中性粒细胞胞浆抗体（抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCAANCA）抗自身免疫性肌炎谱抗自身免疫性肌炎谱自身免疫性肝病相关抗体谱自身免疫性肝病相关抗体谱抗磷脂抗体谱抗磷脂抗体谱第2页/共56页抗核抗体谱检测的意义抗核抗体谱检测的意义 有助于弥漫性结缔组织病弥漫性结缔组织病的分类和诊断 抗Sm抗体是S

2、LE的标记抗体； 抗Scl-70抗体是SSc的标记抗体； 抗Jo-1抗体是PM/DM的标记抗体； 观察疾病活动度和治疗反应 抗dsDNA抗体 研究发病机理 抗核小体抗体、抗dsDNA抗体第3页/共56页基本概念基本概念ANA荧光核型荧光核型ANAs中的常见抗体中的常见抗体第4页/共56页抗核抗体抗核抗体 自身抗体自身抗体：指抗自身组织、器官、细胞及其成分的抗体 ANAANA：指抗细胞核成分（DNA，RNA，蛋白质和酶）的抗体。ANA存在一个谱。 ANAANA新概念新概念：抗核酸(Nucleic acid)和核蛋白(Nucleoprotein)抗体总称 某些核抗原成分在核仁和 胞浆内比核质内更丰

3、富 (如SSA/RO,Jo-1,rRNP等)第5页/共56页ANAANA检测方法检测方法-IIF-IIF法法ANAANA滴度滴度ANAANA核型核型第6页/共56页ANAANA滴度的意义滴度的意义 结缔组织病的粗筛（1:160） 阳性标本还需进一步识别 感染、肿瘤及5%正常人可出现低滴度阳性 ANA阴性基本可以除外SLE ANA滴度与疾病活动性无明确相关性第7页/共56页荧光显微镜下荧光显微镜下ANAANA的染色型的染色型别别均质型（均质型（H H）核膜型（核膜型（M)M)斑点型（斑点型（S S）核仁型（核仁型（N N）着丝点型（着丝点型（ACAACA）胞浆型（胞浆型（C C）混合型混合型第8

4、页/共56页 均均 质质 型型 (H) 抗抗组蛋白组蛋白 抗抗ds/ssDNAds/ssDNA 抗抗核小体核小体 主要出现在主要出现在SLESLE中中第9页/共56页均均 质质 型型 (H)第10页/共56页核膜核膜 型型 (M) 主要与抗主要与抗dsDNAdsDNA有关有关与与抗原底物片固定方法和备制过程抗原底物片固定方法和备制过程有关有关出现在出现在SLESLE中中 部分与抗核包膜蛋白有关部分与抗核包膜蛋白有关抗板层素抗板层素抗抗gp210gp210 出现在出现在PBCPBC中中第11页/共56页核膜核膜 型型 (M)第12页/共56页 与抗与抗ENAENA成分有关成分有关 抗抗SmSm

5、抗抗RNPRNP 抗抗SS-ASS-A 抗抗SS-BSS-B 出现在出现在SLESLE、MCTDMCTD、pSSpSS、SScSSc、PM/DMPM/DM等等 斑斑 点点 型型 (S)第13页/共56页斑斑 点点 型型 (S)第14页/共56页 与抗与抗核仁蛋白核仁蛋白有关有关 抗抗Scl-70Scl-70 抗抗RNARNA多聚酶多聚酶I I 抗抗PM-SclPM-Scl 出现在出现在SScSSc中中核核 仁仁 型型 (N)第15页/共56页核核 仁仁 型型 (N)第16页/共56页 与抗与抗着丝点着丝点染色质有关染色质有关 存在于有丝分裂期存在于有丝分裂期 出现在出现在SScSSc、CRES

6、TCREST综合征等综合征等中中着着 丝丝 点点 型型(ACA)第17页/共56页着着 丝丝 点点 型型(ACA)第18页/共56页 与抗与抗胞浆成分胞浆成分有关有关 抗抗核糖体核糖体P P蛋白（蛋白（rRNPrRNP）：出现在：出现在SLESLE中中 抗抗合成酶合成酶：Jo-1Jo-1、PL-12PL-12、PL-7PL-7、OJOJ、EJEJ 抗抗信号识别颗粒（信号识别颗粒（SRP)SRP) 抗抗线粒体线粒体：出现在：出现在PBCPBC中中 抗高尔基体抗高尔基体 抗溶酶体抗溶酶体 等等等等 胞胞 浆浆 型型 (C)见于见于PM/DMPM/DM第19页/共56页 胞胞 浆浆 型型 (C)第2

7、0页/共56页ANAANA荧光核型小结荧光核型小结 均质型（均质型（H H）：）：像大饼，像大饼，SLESLE相关相关 核膜型（核膜型（M)M)： 像圈圈，像圈圈，SLESLE相关相关 斑点型（斑点型（S S）：）：像藕片，抗像藕片，抗ENAENA 核仁型（核仁型（N N）：）：像纽扣，像纽扣，SDSD相关相关 着丝点型（着丝点型（ACAACA）：）：像满天星，抗像满天星，抗ACAACA 胞浆型（胞浆型（C C）：）：像空心大饼像空心大饼,SLE PM/DM PBC,SLE PM/DM PBC相关相关 混合型：混合型：稀释后检测有助于区分稀释后检测有助于区分第21页/共56页抗核抗体谱抗核抗体

8、谱（ANAs）ANAsANAs抗核不溶成分抗核可溶成分（抗ENA）抗染色体抗染色体DNADNA蛋白蛋白抗核仁抗体抗核仁抗体 抗抗DNADNA抗体抗体 抗核小体抗体抗核小体抗体 抗组蛋白抗组蛋白 H1,H2A, H2B, H3,H4 抗抗Sm,USm,U1 1RNP,SSA,SSBRNP,SSA,SSB抗抗Scl-70,Jo-1Scl-70,Jo-1,PM-1,PM-1抗抗rRNPrRNP,PCNA,PCNA. .dsDNAdsDNAssDNAssDNA抗着丝点抗体抗着丝点抗体（ACA)ACA)抗抗5sRNA5sRNA第22页/共56页抗抗dsDNA检测方法检测方法 以短膜虫或马疫锥虫为底物的间

9、接免疫荧光法(IIF) ：1:5 短膜虫或马疫锥虫的动基体 内含有天然纯dsDNA，未经 人工处理，不含组蛋白与 ssDNA，抗原性纯一特异。 优点：特异性好 第23页/共56页抗抗dsDNA检测方法检测方法 酶联免疫吸附法（ELISA）: 100IU/ml100IU/ml 优点：敏感性最高 缺点：过于敏感，同时可能检测到ssDNA抗体和低亲和力dsDNA抗体,而 这两种致病力均不强 放射免疫法(Farr): 20% 优点：对高亲和度DNA抗体的检测优于CL-IIF 缺点：具有放射性，对技术人员身体造成一定影响 蛋白印迹法（WBWB） 缺点： dsDNAdsDNA抗原在纯化包备过程中可变性解链

10、，变成ssDNA,ssDNA,导致假阳性结果 不同方法检测SLE患者抗dsDNA抗体的结果：everything is possible 至少用两种方法做（报告结果时注明方法学）,互为补充。如：IIF法+ ELISA法 第24页/共56页第25页/共56页第26页/共56页抗抗dsDNAdsDNA抗体临床意义抗体临床意义 SLE 的血清特异性抗体 多有致病性（IgG型），与亲和力（高）有关 与LN与SLE疾病活动性相关，活动期达90 可用于SLE 疾病活动期判断药物疗效观察 与SLE急性皮疹、血管炎、浆膜腔炎、白细胞减少等有关第27页/共56页第28页/共56页抗组蛋白抗体（抗组蛋白抗体（AH

11、AAHA）（酶联免疫吸附法（酶联免疫吸附法 X X 2SD2SD) ) 可出现于多种结缔组织病，不具有诊断特异性 SLE ：50% 活动期SLE 可达90.2% 与LN相关，与SLE疾病活动性存在一定意义的相关性 药物性狼疮（DIL）：90% 如：异烟肼、苯妥因钠、青霉胺、雌激素等 仅有AHA而无其他ANA，强烈支持DIL 其他结缔组织病：23-30% 如：RA、PBC、SSc等 第29页/共56页核小体是真核细胞染色质的基本复制单位，由组蛋白与DNA组成。参与SLE发病机制：多克隆B细胞活化剂产生ANuA，先于其他ANA促进抗dsDNA与AHA形成参与LN的发生 抗核小体抗体（ANuA） 第

12、30页/共56页抗核小体抗体临床意义抗核小体抗体临床意义 SLE标记性/高特异性自身抗体 敏感性：58%-66% （优于抗dsDNA及抗Sm） 特异性：98%-100% （与抗dsDNA相当） 用于SLE的早期诊断 ANuA 的产生早于抗dsDNA、AHA 抗dsDNA阴性者有1/41/2 ANuA阳性 与LN相关，用于SLE疾病活动性监测第31页/共56页ANuAANuA、抗、抗dsDNAdsDNA、AHAAHA联合检测意义联合检测意义第32页/共56页抗抗ENAENA抗体抗体 extractable nuclear antigen 可提取性核抗原 成分：核酸与核蛋白，不含染色质成分 功能：

13、参与细胞内DNA复制、RNA转录、蛋白翻译 合成 来源：无种属差异，有组织不均一性 理化特性：对温度和RNA酶敏感（U1RNP、SS-A） 意义：抗ENA抗体是ANAs中范围最广、最为重要的 一簇抗体，与疾病活动性大多无相关第33页/共56页 抗抗ENAENA抗体检测方法抗体检测方法 免疫双扩散法(ID) 对流免疫电泳法( CIE) 免疫印迹法(IBT) 酶联免疫吸附法(ELISA) 蛋白芯片（Protein chip）38KD29KD28KD16.5KD15KD13.5KD无 风 湿 病 相 关 抗 体SmR id、抗 体 阳 性红 斑 狼 疮 病 人 血 清86KD73KD60KD52KD

14、45KD38KD32KD29KD28KD17.5KD16.5KD15KD13.5KD第34页/共56页 抗抗SmSm抗体与抗抗体与抗U1RNPU1RNP抗体抗体 靶抗原：位于细胞核内的一组含尿嘧啶丰富的核糖核蛋白， Sm和U1RNP是同一分子复合物中的不同位点第35页/共56页抗抗SmSm抗体与抗抗体与抗U1RNPU1RNP抗体抗体 抗Sm：SLE的标记性抗体，是前瞻性及回顾性诊断的指标。 阳性率低： SLE （30%） 抗U1RNP：多种CTD均可出现，与手指肿胀、雷诺现象、肌炎、指端硬化等相关，但肾炎发生率低。 阳性率：40 - 60%，其中SLE(30-40%) , SSc(14%) ,

15、 pSS (12%) , PM/DM (15%) 高滴度抗U1RNP+抗Sm- MCTD 抗U1RNP+ 抗Sm+ SLE 抗U1RNP- 抗Sm+ 实验室误差? U1RNP丢失 ? 第36页/共56页抗抗rRNPrRNP抗体抗体 靶抗原：胞浆中60S核糖体大亚基上的磷酸化蛋白 第37页/共56页抗抗rRNPrRNP抗体抗体 SLE的高度特异性抗体，与SLE脑病相关 常在SLE活动期存在,但不会随病情的缓解立即消失,可持续1-2年后才转阴。 阳性率：24% 可出现在SLE 早期（ANA及抗dsDNA阴性） 第38页/共56页抗抗SSASSA与抗与抗SSBSSB抗体抗体 靶抗原：位于同一小分子核

16、糖核蛋白上的相邻结构 在不同的细胞周期，在细胞内的定位不同 （细胞核内和胞浆中均可存在） pSS的SS-A存在于细胞核内 SLE的SS-A存在于胞浆中 SS-B主要位于细胞核内45KD 47KD48KD第39页/共56页抗抗SSASSA与抗与抗SSBSSB抗体抗体 抗SS-A ：结缔组织病中出现频率最高的抗体（ 60 -75%），见于pSS（75%）SLE（25%） RA（10%） SSc （24%）PBC（20%）等 抗SSB：常与抗SSA相伴出现，诊断pSS更特异，见于 pSS（40%）、SLE （10%） 临床意义：与新生儿狼疮和先天性心脏传导阻滞、平 滑肌受累、光过敏、血管炎、皮损、紫

17、癜、 淋巴结肿大、WBC减少有关 ANA阴性的SCLE：常为抗SSA 抗体阳性。第40页/共56页第41页/共56页第42页/共56页抗抗Jo-1Jo-1抗体抗体( (抗抗PL-1PL-1抗体抗体) ) 靶抗原：组氨酸tRNA合成酶 胞浆中的磷酸蛋白第43页/共56页抗抗Jo-1Jo-1抗体抗体( (抗抗PL-1PL-1抗体抗体) ) PM/DM的标记抗体，阳性率20-30% 抗体效价与疾病活动性相关 抗Jo-1抗体综合征：急性发热,对称性关节炎,技工手,雷诺现象,肌炎（相对轻） ,肺间质病变 其他抗合成酶抗体：抗PL-7PL-7、抗PL-12PL-12、抗OJOJ、抗EJEJ第44页/共56

18、页抗抗ScL-70ScL-70抗体抗体 靶抗原：DNA拓朴异构酶I的降解产物 主要存在核仁中 SSc的标记抗体，阳性率20-30% 多见于dSSc，病情进展快，提示预后不良 与ILD、弥漫性皮肤硬化有关，而PAH少见第45页/共56页 主要靶抗原：着丝点蛋白-B 多见于ISSc，病程缓慢，提示预后较好 CREST综合征：软组织钙化（C）,雷诺现象（R）,食道功能障碍（E）,指端硬化（S）,毛细血管扩张（T），但并非标记抗体，也见于孤立性雷诺现象、SS、PBC、AIH等 国外文献：与PAH相关，而ILD少见 中国人群：未发现与PAH相关，但ILD少见白伊娜，王迁等.中国系统性硬化症患者硬皮病相关

19、自身抗体的检测及其临床意义. 中华微生物学和免疫学杂志.2011（5）:452-455.抗着丝点抗体抗着丝点抗体(ACA)第46页/共56页Take Home MassageTake Home Massage ANA荧光核型对抗体性质范围有一定提示作用，荧光核型对抗体性质范围有一定提示作用，尤其尤其在靶抗原阴性时。在靶抗原阴性时。 ANA阴性而靶抗原阳性主要见于抗阴性而靶抗原阳性主要见于抗胞浆成分胞浆成分抗体，如：抗体，如：SS-A、Jo-1、rRNP、线、线粒体等。粒体等。 抗抗核仁核仁型抗体常与型抗体常与SSc有关。有关。 抗抗均质均质型或型或核膜核膜型抗体常与型抗体常与SLE有关。有关。

20、第47页/共56页Take Home MassageTake Home Massage 抗抗dsDNA：SLE特异性抗体特异性抗体，与，与LN及疾病活动及疾病活动度度 有 关 ， 至 少有 关 ， 至 少 两 种 方 法两 种 方 法 联 合 检 测联 合 检 测（如：（如： IIF法法+ ELISA法）。法）。 抗核小体抗核小体、抗组蛋白抗组蛋白、抗抗dsDNA三抗体阳性者三抗体阳性者强烈强烈 提示增殖性提示增殖性LN。 与疾病活动性相关的抗体：与疾病活动性相关的抗体：抗抗dsDNA、抗核小、抗核小体、体、 抗组蛋白、抗抗组蛋白、抗Jo-1、抗、抗rRNP 与预后相关的抗体：与预后相关的抗体：抗Scl-70（差）、ACA（好）第48页/共56页案例1 女性，34岁 游走性多关节痛，雷诺现象半年 RF 56U/L；抗CCP抗体阴性； ANA 1：320 胸部CT：轻度肺间质病变 诊断？治疗？（核仁型）UCTD ILD 发展为 SSc可能性大Pred+CTX第49页/共56页案例2 男性，50岁 双腕关节炎、雷诺现象半年 ANA全套：阴性；抗CCP、RF：阴性 胸部CT：轻度肺间质病变 右腕关节MRI：骨髓水肿和滑膜炎 诊断？ 复查：ANA阴性，抗Jo-1弱阳性诊断：抗Jo