生化试剂存在的问题及解决办法

1、全自动生化分析仪试剂存在的问题及解决方法1 优质的仪器用水优质的仪器用水是使用好检验试剂的一个十分重要环节之一。因为测定离子类的项目：比如铜、铁、锌、钙、Mg、磷。这些项目在使用过程中，仪器用水的质量相当重要，虽然现在一般医院的生化仪都带有制水系统，但制水系统基本都是制备去离子水，离子交换树脂在使用一段时间后交换能力明显下降，需要定期进行更换，否则制备的水离子含量多，电导率偏高。使用含离子超标的水冲洗仪器，直接影响检验结果。再如血氨、二氧化碳项目，如果水质不好，仪器用水中本身含氨和二氧化碳就很高，则检测该项目的结果也会受到严重的影响。还有如果血清中含有GLDH，而仪器用水存在氨时，可消耗NAD

2、H，使利用NADH的酶联连续监测法结果偏高。解决办法：定期监测水质，当仪器用水的电阻小于10M时要更换离子交换树脂或活性炭。2 标本的及时分离及测定标本的及时分离及测定是用好检验试剂的首要环节因为凡是利用NADH转化为NAD 变化率来检测其物质含量的试验都或多或少受到血液存放时间的影响。原因是全血存放时间越长，红细胞利用血清中的糖进行无氧酵解产生丙酮酸，丙酮酸使NADH转化为NAD ，这样使测定结果假性升高。解决办法：作好与临床的沟通，对抽血人员和标本运送人员(传递人员)进行培训； 及时分离血清并及时检测； 也可将全自动生化分析仪上的延迟时间设置大于60秒，这样试剂在延迟期内消除丙酮酸的干扰，

3、可完全避免假阳性结果的出现。3 交叉污染31 生化分析仪本身的清洗问题造成的交叉污染在使用全自动生化分析仪时，仪器的交叉污染现象是引起实验结果偏离的一个原因。由于全自动生化分析仪试剂针需要接触各种试剂，一般难以彻底清洗干净，所以容易造成分析项目的携带污染而生化项目的测定往往仅需要几微升样本，试剂往往需要几百微升，尤其在没有自动冲洗程序的流动池式生化分析仪上，由于前带现象的存在，如果前一个样本为高值样本，则接后的第一个低值标本结果应慎重报告。不仅没有冲洗程序的生化分析仪器上有这种现象，就是具有自动冲洗程序的全自动生化分析仪也有交叉污染，例如Beckman全自动生化分析仪CX4，它的试剂吸针(Pr

4、obe)、样品吸针及反应搅拌棒是利用高压冲洗液冲洗，然后用高压压缩空气吹于，有时由于洗液压力和压缩空气的压力偏低，使试剂吸针、样品吸针及反应混匀棒冲不干净、吹不干，从而导致反应池之问相互污染、试剂问交又污染，使检验结果偏离。另一个值得注意的问题是许多生化仪器由于长期频繁的利用，使加样针和试剂针的注射器磨损加重或注射器的“特氟龙”吸头不及时更换，使吸样针或试剂针密封层增大，产生泄漏现象也是造成样本间及试剂间相互污染的一个重要原因。试剂吸样或样品吸样不准确，通常导致利用速率法测试的标本系统偏低或偏高。众所周知，速率法计算因子是由加样体积和试剂体积参与确定的，如果加样体积或加试剂体积不准，导致真正速

5、率计算因子和理论计算因子偏离，从而使检测结果不准确。解决办法：定期进行仪器维护保养；按要求及时更换零部件；定期对仪器进行校准；全自动生化分析标本和试剂用量少，残存少量即会影响测试结果，每天应用无水乙醇擦洗并定期更换干燥棒，保证比色杯清洗后不留残液，避免比色杯的交叉污染。32 检验项目间的交叉污染在全自动生化分析仪的使用中，我们发现一个项目会影响紧随其后项目的测试结果，造成这种影响的原因之一是一种试剂中含有另一试验的测定物质而直接干扰其测试结果。原因之二是一种试剂中含有改变另一试验反应条件或影响其反应进程的物质而间接干扰其测试结果。比如：在TP试剂中含有大量的CuSO4，如果将Cu放在TP项目的

6、后面检测，会使检测结果偏高或重复性差。再如P放在含有磷酸盐的项目后面，TBA放在含有胆酸盐的项目后面都会使检测结果偏高或重复性差。GLU放在CK和CKMB的项目后面可能会使检测结果偏高或重复性差。LDH放在AIJT和AST的项目后面可能会使检测结果偏高或重复性差。Mg放在ALP等含有镁离子项目后面可能会使检测结果偏高或重复性差。ca放在aAmy项目后面可能会使检测结果偏高或重复性差。Mg试剂(CALMAGITE法)中含有EGTA，会干扰Ca的测定结果。另外我们发现相邻两个项目的PH值相差太大或反应对PH要求严格的项目，也会对测定的结果产生影响，比如TP和Alb之间PH相差较大，会互相干扰，TB

7、A放在Alb后面测定，会使测定结果偏低等等。解决办法：调整实验的前后顺序来消除这种影响；在造成污染的项目和受污染的项目之间设置清洗剂并设定进行清洗的次数。4 正确的参数设置也是用好检验试剂的一个关键因素现代化分析仪上通常有分析程序供用户设定，包括样品量、试剂量、波长、分析方式和延迟时间、测试时间的设定等。下面我们就延迟时间和加样程序的设定来说明正确使用分析参数对于正确运用试剂的作用。比如肌酐苦味酸测定法，我们在设定延迟时间时应注意到苦味酸在碱性条件下50秒前首先快速与如乙酰乙酸等快反应物质产生红色化合物，而在120秒后碱性苦味酸又能与慢反应物质产生阳性干扰，解决办法：最好设定延迟时间为506O

8、秒之间，测定时间小于6O秒，这样就充分消除了快反应和慢反应干扰，从而检测到真正肌酐含量。5 校准液的正确使用由于目前生产厂家提供的校准液并非通用的，只适用于某一特定的分析系统。同一项目不同方法学之间有很大差异，同一项目不同方法学的校准液更不能混用，但是在临床检验中经常会发生胆红素钒酸盐法用重氮法的校准液校准，乳酸脱氢酶LP法用PL法校准液校准。TBA循环酶法用比色法校准液校准等都会造成测定结果不准确。另外同一方法学，不同厂家的校准品和试剂都会有所差异。解决办法：建议结合各实验室条件选择适合自已实验室的校准品，如有条件可进行系统溯源；建立满足在同一方法学、同一测定条件、与理论计算的factor值

9、差异不大，没有发现有明显影响因素，方可进行校正测定；建立一个可靠的参考系统作为准确性基础，然后将准确性转移到“使用方法”测定中去，使“使用方法”测定结果可溯源到参考系统所提供的准确性基础上来。在实现溯源性目标过程中，永远以患者新鲜标本为实验对象，以方法学对比试验方法为验证手段。采用回归方程进行统计分析，斜率接近1，截距较小，说明“使用方法”对标本测定结果和溯源目标参考系统对标本检测结果非常接近，检测结果可靠。6 抗凝剂的使用目前临床上常用的抗凝剂有EDTA-2K、肝素、草氨酸钠等，TBA和AFU不能用肝素抗凝剂，因为肝素会使TBA和AFU试剂发生混浊，导致吸光度假性偏高，从而使检测结果偏高。解

10、决办法：认真参阅试剂说明书；作好与抽血人员之间的沟通和培训，使抽血人员知道什么项目用何种标本。7 混成单一试剂的问题比如酶法肌酐试剂，第一步R中的酶要消除样品中内源性肌酸的干扰，如果混成单一试剂，则会使检测结果偏高，消除法HDL、LDL也不能混成单一试剂，因为它们都要分别清除HDL和LDL以外的脂蛋白，从而达到检测的目的，如果混成单一试剂，则会使测定的HDL和LDL不准确。另外，有的试剂混成单一试剂后，稳定性和抗干扰能力也会明显下降。解决办法：在仪器通道或试剂位允许的情况下尽量使用双试剂；如一定要使用单一试剂，最好选择试剂厂家针对部份项目专门生产好的单一试剂。8 试剂开瓶的问题随着全自动生化分

11、析仪的普及，“开瓶稳定性”也随之受到了大家的重视，但是就目前有的试剂方法学来讲，还达不到人们所要求的试剂开瓶后在仪器内放很长时间不需要定标，比如ALP、TP、GSP等PH为碱性的试剂，开瓶后试剂会吸收空气中的二氧化碳，使试剂本身的PH值下降，如果长时间开瓶不定标或校准，会使检测结果发生偏离，在国外有的项目有明文规定，必须72小时之内定标，比如BUN。但是在国内的某些实验室为了方便，很长时间都不作校准，导致测定结果的不准确。解决办法：了解试剂的特性，及时对部份项目进行校准，2对于每天标本量不多的医院，可按12天的用量取用试剂放入仪器。9 不同批号试剂相混的问题目前将不同批号的试剂混合在一起使用的

12、现象在检验中经常发生，当然这一方面是为了节省成本，另一方面为了方便。但是不管是什么品牌、什么试剂，由于不同批号的试剂生产时间不同，试剂中工具酶的活性会有差异，会发生水解的底物浓度随时间长短也会不同。因此混在一起使用而又不定标，可能会导致检测结果的不准确。还有如果有的试剂开瓶时间太长，空气中的灰尘或细菌会进入瓶中，由于有的试剂含有大量的蛋白质和盐，是细菌生长的最好条件，虽然有的试剂添加了防腐剂，但防腐剂的防腐也是有一定限度的，而且绝大多数厂家的试剂中是没有加防霉剂的。解决办法： 不同批号试剂建议不要混用，如果混用最好重新定标；试剂瓶在仪器内使用时间不要过长，及时更换。一般每个试剂瓶内由于试剂针不

13、能吸完，或多或少都会留有几毫升的试剂，如果是同一批号可以将未开瓶的同一批号试剂往里倒。但如果不是同一批号的试剂时倒人后最好定标，最好的做法是将每个批号的剩余试剂留起来待一定数量后混在一起，然后重新定标后检测。通过我们这几年使用伊得利康试剂，参加卫生部的室间质评都取得很好的成绩，确实认为该公司试剂质量好。纯水质量对全自动生化分析仪检测的影响水是实验室内一个常常被忽视但又至关重要的试剂。在全自动生化分析仪检测过程中，纯水作为生化反应的载体或介质、样品或试剂的稀释液和溶剂、仪器的清洗液甚至反应的参与者等贯穿检测的全过程，其纯度的高低直接关系水是实验室内一个常常被忽视但又至关重要的试剂。在全自动生化分

14、析仪检测过程中，纯水作为生化反应的载体或介质、样品或试剂的稀释液和溶剂、仪器的清洗液甚至反应的参与者等贯穿检测的全过程，其纯度的高低直接关系到检测结果的可信度。目前全国大部分实验室都使用反渗透的中央纯水系统，通过对该系统工作流程的分析以及遇到的实际情况，发现并总结了导致水纯度不够的几种因素及其对全自动生化分析仪检测的影响。1 纯水系统工作流程及影响因素11 原水预处理原水是指进入实验室的自来水，预处理就是除去自来水中绝大部分的杂质。1.1.1方法：预处理一般使用机械过滤法，分三步进行：精密滤芯（又称过滤滤芯、分线绕滤芯和熔喷滤芯）过滤原水中的泥沙等大的颗粒物；活性炭滤芯通过吸附作用去除水中的绝

15、大部分有机物和重金属离子等（特别是自来水中的余氯，其对反渗透膜有很大的氧化作用，所以必须经由活性炭去除）；反渗透膜(RO)进一步去除水中的微观粒子和盐分。1.1.2影响因素：自来水水质：自来水中杂质含量高时会导致预处理部件使用寿命缩短和处理后水质不达标，甚至会堵塞管道，导致需要更高的进水压才能工作，一般要求自来水中固体溶解物含量(TDS)小于200 mg/L。 预处理部件使用寿命：精密滤芯、活性炭滤芯、反渗透膜等都是具有相对寿命的材料，其中精密滤芯和活性炭滤芯又对反渗透膜具有保护作用，如果它们失效，RO 膜负荷就会加重，寿命就会缩短。由于各厂家产品质量各异，RO膜又价格昂贵，因此在实际使用中应

16、根据各地自来水水质合理搭配使用。进水压：一般纯水系统预处理都需要用高压泵维持一定的进水压力(0. lMpa)才能维持正常工作，当高压泵压力不足时会导致产水量下降。纯水系统的维护：纯水系统一般都具有自动反冲洗功能，当其设置不合理或故障以及人工维护不当时也会影响纯水机的正常工作，导致纯化效率及水质下降。1.2去离子水的制备一般的纯水系统由于受到成本限制，RO膜质量一般，经其处理过的水只能达到三级纯水(电阻率>0. 2MO.cm)的标准。三级纯水虽然经过预处理已经去除了大部分离子，但其中的离子浓度还较高，还会影响生化分析仪的微量检测，因此必须将三级纯水进一步去离子以达到一级纯水(电阻率lOM.

17、cm)的标准才能用于生化检测。1.2.1方法：离子交换树脂法是去离子水制备的常用方法，所用的部件就是离子交换柱即纯化柱（罐），包括阴离子交换柱、阳离子交换柱和混合柱等，试剂为阴阳离子交换树脂。阴阳离子交换树脂一般是由苯乙烯聚合成后再通过二乙烯苯交联得到多孔网状骨架结构，然后在骨架上连接活性基团而形成的高分子聚合物。离子交换树脂所连接的活性基团可分为酸性基团和碱性基团两大类型。连接酸性基团的离子交换树脂称为阳离子交换树脂，连接碱性基团的树脂称为阴离子交换树脂。1.2.2原理：阳离子交换柱原理即硬水软化原理：阳离子交换树脂中的酸性基团有磺酸基(-S03H)、羧基(一COOH)和苯酚基 (-C6H4

18、0H)等酸性基团，其中的氢离子能与溶液中的金属离子或其他阳离子进行交换。例如苯乙烯和二乙烯苯的高聚物经磺化处理得到强酸性阳离子交换树脂，其结构式可表示为R-SO3H，式中R代表树脂母体，以Ca2+为例其表达式为2R-S03H+ Ca2+- (R-SO3 )2Ca+ 2H+。 阴离子交换柱的原理：阴离子交换树脂中的碱性基团有季胺基-N (CH3)30H、胺基(-NHz)和亚胺基(-NHz)等。它们在水中能生成OH-离子，可与各种阴离子起交换作用，以Cl-为例其表达式为R-N (CH3)30H+Cl-RN(CH3)3Cl+OH-。混合柱：当两者串联使用或混合使用时，产物就只有水，总表达式为：2R-

19、S03H+Ca2+2(CH3)30H+2Cl- - (R-S03)2Ca+2 RN (CH3)3C1+2H影响因素：离子交换树脂的质与量：离子交换树脂是有寿命限制的，当离子交换达到一定量时就达到饱和，需要进行再生处理，因此质量越好总量越大其使用期限越长。阴阳离子交换树脂的连接方式：复床式：若干个阳离子交换柱和若干个阴离子交换柱串联而成，阳在前阴在后，其优点是再生方便，缺点是出水质量不高(单级复床式出水电阻率只有0.5 M.cm，双级复床式出水电阻率为2 MO·cm)。混床式：将阳离子树脂和阴离子树脂以1:2容积比均匀混合装入同一个交换柱内而成，优点是出水纯度高（电阻率

20、1OM.cm），缺点是再生困难。联合式：将复床式和混床式串联起来即成，多采用三柱式，出水质量高（电阻率最高可达18. 3M.cm，即超纯水），使用寿命长。三级纯水的纯度：当三级纯水质量不合格，其中一些非离子杂质通过离子交换柱时就会影响离子交换柱的使用寿命并造成出水水质的降低。该情况主要受预处理过程的影响，同时有些开放性的纯水系统将生成的三级纯水储存于水箱中以备其它用途使用时储存时间过长或其它原因导致的二次污染也会使水纯度下降。2纯水质量对生化分析仪及检测结果的影响2.1 不合格纯水中的杂质成分纯水质量不合格也就意味着纯水系统水纯化的失败，可能出现在原水预处理过程、三级纯水的储存和离子交换过程中

21、的任何一步。无论哪一步失败，其杂质来源无外乎自来水和纯水机水通道的污染物，主要有： 电解质，常见的有H+，Na+，K+，NH4+，Mg2+，Ca2+，Fe3+，Cu2+，Mn2+，Zn2+，Al3+等阳离子和 F-，CI-,N03-,HC03-,S042-,P043-,H2P04-,HSi03-等阴离子；有机物质，如有机酸、农药、烃类、醇类和酯类等；颗粒物；微生物；溶解气体(Nz，02，C1z，HzS，CO，COz，CH4等)；其它。2.2不同杂质成分对生化分析仪及检测结果的影响2.2.1 电解质含量高的影响：最直接的影响就是对血清（浆）中同种离子测定结果的升高，如对Mg2+，Ca2+，Fe3

22、+，Cu2+，Zn2+等的测定，同时也对这些项目的定标产生影响。由于很多金属离子都是酶的辅因子，因此当金属离子含量高时往往影响酶活性的检测（如Mg2+是多种磷酸化激酶的激活剂，水中含量超标时会导致这些酶活性测定值的升高；而许多重金属离子则对酶有抑制作用，导致酶活性下降）。很多阴离子也作为酶的辅因子存在，对酶活性测定产生影响（如CI-对a-淀粉酶就有激活作用）。电解质含量高的水更容易形成结晶和导致蛋白等有机物变性附着于管道系统，从而使得生化分析仪管道系统更易堵塞，最终造成测定失真或失败；同时，在使用其对反应杯进行清洗时也很难清洗干净，会加速反应杯的老化和损坏，使杯空白升高。2.2.2有机物质的影

23、响：有机物质的影响主要在于对类似物质测定时导致类似物质测定结果的升高。同时，有机物含量升高也会加速管道系统和反应杯的清洗困难及老化。2.2.3颗粒物的影响：颗粒物一般很难通过纯水系统进入生化分析仪管道和反应系统，其来源一般都是三级纯水或一级纯水的储水箱发生二次污染，但是一旦进入除了会导致吸光度升高外，还很容易堵塞管道和损坏反应杯。2.2.4微生物的影响：微生物的去除主要依赖原水的预处理，有些纯水系统还在一级纯水或超纯水处加装紫外杀菌或者微滤、超滤等装置，进一步除去水中残余的细菌、微粒、热源等。但一旦预处理失败或纯水储存箱被二次污染，微生物及其产物就能进入生化分析仪管道系统和反应系统，可能出现的

24、情况有两种： 微生物在管道及反应系统孳生，导致管道堵塞，同时令吸光度和杯空白升高；微生物产生特定的酶对生化分析仪酶测定产生影响，具体产生什么影响取决于污染菌的类型。2.2.5溶解气体：溶解气体增多产生的影响有：对同种气体的测定的影响；对水的pH值也产生影响，如C02，Cl2，H2S等溶解增多导致水pH值的下降，也对pH值依赖性较强的生化项目测定产生影响；某些气体如C12增多，因其自身氧化性较强，会对与氧化还原反应相关的生化测定项目产生影响，如对基于340 nm处NADH和NADPH有吸收峰而建立的ALT，AST，BUN等的测定方法，会导致测定值的升高。2.2.6其它杂质的影响：有些纯水系统也将

25、最终生成的超纯水或一级纯水储存于水箱中，当水箱有生锈情况时导致铁测定不正常；还有当机械装置密封不严造成的漏油时导致TG测定结果升高。这些情况虽然少见，但也最容易被忽视。3讨论3.1 实验室常用的自动化纯水系统有两种：大型蒸馏器系统，日出水量在100 L左右，原水利用率10%15%，能耗大，自动化程度低，制备的蒸馏水纯度一般较低，适用范围较窄，现在基本已经被淘汰；反渗透的中央纯水系统，由机械过滤、活性炭吸附、反渗透膜和离子交换树脂等组成，日产水量900 L左右，原水利用率30%40%，自动化程度高，能耗低，主部件可反复使用，出水纯度高，目前使用广泛。另外，有些实验室因条件所限，直接购买商品化纯净

26、水使用，但商品化纯净水多为饮用水，其标准与实验室用水标准有所不同，因此购买前一定要清楚该产品的各项指标，避免对检测造成影响。3.2评价水质的常用指标电阻率，是衡量实验室用水导电性能的指标，其随着水内无机离子的减少而增大，但由于水自身的解离作用，电阻率最大只能达到18.3M.cm左右，是检测水中离子浓度的主要指标；pH值，一级纯水及超纯水的pH值测定较为困难，测定值浮动范围较大(67)，主要是因为其中溶质极低，导电性差，测定时极易受到外界干扰，但正因如此，水质的细小变化对pH值的影响就很明显，是评价水质的一个非常灵敏的指标；www.clin-总有机碳，是指水中碳的浓度，反映水中有机化合物的含量；

27、内毒素，即革兰氏阴性细菌的脂多糖细胞壁碎片，又称之为“热原”。3.3 建议对实验室超纯水进行严格规范的质量控制，定时测定纯水电阻率和pH值等指标，绘制质控图。增强实验室用水质量意识，积极防范因用水而造成的影响和损失。对于开放式水储存箱的取用水要严格把关，严防因此而造成的二次污染。要掌握纯水机各部件的使用寿命和维护方法，积极防范因纯水机部件失效而造成的各种影响水质的情况，同时延长或保证RO膜和离子交换树脂的寿命。要对本地区自来水水质状况有所了解并评估其对纯水机的影响，如水质较硬，应考虑加装前处理设备。成为医学检验人之前必须要知道的几件事当初本科填志愿，其实很大程度上根本不了解医学检验这个专业，班

28、里的同学第一志愿填报检验的也寥寥无几。有过迷茫，有过失望，一路走来，也有很多体会。在各大专业论坛上，每年都会有人问，“检验可以考医师执照吗？”“我是*专业的，想去检验科工作，可以吗？”这里就说说自己在进入医学检验这个专业以后，才知道的一些事情与其中的一些体会，希望对后来人有所帮助，特别是想过从事检验专业的年轻师弟师妹。1、医学检验专业不能考医师执照这是大3才彻底了解的事实，虽然当初我所在的院校（211）给本专业的定位是检验医师。但是事实是全国各医学检验专业本科文凭都不能报考执业医师，虽然我们学制5年，虽然我们大纲要求所有的内外妇儿传染等临床学习。但是国家的政策如此，胳膊拧不过大腿。要想考执照，

29、你需要考临床专业检验地 带网搜集整理的研究生，即使这样，部分地区仍有困难，如在上海地区，这种情况还是不能报考。2、医学检验专业学制多样 中山、华西、湘雅医学检验5年制，交大、南方医医学检验4年制，前者拿医学学位，后者拿理学学位。出来除个别单位喜欢5年制以外，找工作无本质区别，谁不知道现在找工关系第一。貌似医学检验全国重点也就是专业排名第一的重庆医科大学，还有医检7年制，出来是MM，具执业医师考试资格。如此复杂参差的学制和培养方法，也难怪国家不给考执业医师的资格。3、没有真正意义上的检验医师如果你想报考检验医师，你必须先具有临床执业医师执照，按照第1条所说，所以你本科必须是学临床然后转入检验专业

30、。这在医学检验专业的人看来确实非常不公平和可笑，要承认这样一个事实，很多情况下，临床专业的人改行进入检验专业，大多是在临床混的不好，这样的检验队伍你觉得是壮大了还是鱼龙混杂了？而正规接受医学检验培训的人却没有资格？另外，即使你成为了一名检验医师，在绝大多数时候你从事的是技师的工作。罕见或不见有让检验科人员协助临床诊断、治疗会诊的医院单位，检验医师，名存实无。4、检验科在医院地位普遍不高辅助科室，地位不高也难怪，看看到处都是的关于检验科室被临床科室肢解的讨论就知道了，不用多说。5、医学检验工作相对好找 开始说些这个专业的好处吧，找工作对于医检专业的同学来说，不用像临床那般发愁，本科进入三甲的机会

31、很多，硕士基本够用。公务员、公司、科研机构，都有不错的选择。如果你有好的idea，试剂开放也许可以让你一夜暴富。6、医学检验专业发展迅猛所有生物技术方法上的革新，以及基础研究上突破，都给医学检验专业带来了无穷无尽的动力。在这个专业，可以学习最先进的医学诊断方法进展，而且这些方法的更替日新月异。如果你是个科研爱好者，医学检验专业有得天独厚的优势，诊断试剂、仪器、病人标本，都是你丰富的资源，即使其他科室搞个项目，也免不了需要你的帮忙。7、医学检验不用直面冰冷的医患关系不用多说，现实有时候我们无法改变。检验专业只需要在后面认真负责地处理病人标本，用自己的良心报给临床医生准确的结果。8、没有差的专业，

32、只有差的人看看专业的大佬们，丛玉隆、王鸿利、倪语星、陈宏础、仲人前，很多临床科研的巨擘都烙着医学检验的印子，看看他们的工作和经历。最后套用我老板的一句话：做的好做什么都好，做不好做什么都不好全自动生化分析仪及其试剂间化学污染对检测结果的影响临床实验室：全自动生化分析仪在各级医院现在都普遍使用，并且测试速度越来越快，但是很多医院过分依赖仪器，在测试结果不理想 的情况下，不知如何排除，根据您多年经验，请您谈谈测试结果不理想主要都有哪些原因？于主任：全自动生化分析仪在各级医院的使用已经非常普遍，当生化仪保养不当时往往会导致：仪器清洗能力下降，比 色杯老化后引起吸附力增加，生化仪内灰尘及污物的积聚，常

33、规清洗不能有效消除交叉污染等，或者测试顺序安排不当，这些均会增加仪器及试剂间交叉污染的可能 性，引起测定结果不准确。常见影响因素及污染来源包括：（1）试剂通道堵塞或试剂针污染：有些试剂易产生结晶，会使试剂通道部分堵塞，造成试剂加入量不 足，影响实验结果；当试剂针在清洗不完全或黏附力增加时，残留试剂可能会对下一检测结果造成影响。（2）搅拌棒污染：试剂与样本、第一试剂与第二试剂的混 匀需要搅拌棒，而搅拌棒如果清洗不完全，或黏附力增加时，残留试剂可能会对下一检测结果造成影响。（3）比色杯污染：生化分析仪的比色杯大体分为两种，一 种是循环使用的（如石英比色杯等），另一种是需要定期更换的（如塑料比色杯等

34、），每个比色杯检测完毕后，进行清洗，然后继续下一个检测项目的检测。当由于 各种原因导致某个比色杯清洗不完全或该比色杯老化时，吸附在比色杯上的上一个项目的残留试剂可能会对在这个比色杯中进行的下一个项目的检测结果造成影响。 根据经验，比色杯的污染对结果影响最大，因为比色杯最难以清洗干净，且在实际工作中难以判断该比色杯上一测试的项目。（4）灯泡老化：这也是常见影响结果 的原因，应按照要求及时更换灯泡，使仪器处于良好的工作状态。临床实验室：除了仪器本身设计方面造成结果不稳定性这个我们不能自己解决的原因，很多读者反映日常使用时，质控往往在控，单独 测试一个项目时，比如肌酐非常准确，但是同时测定很多项目，

35、结果就非常不好，这主要是什么原因（试剂间化学污染的可能性，引起测定结果不准确）？于主任：试剂化学成分的交叉污染很难发现，往往质控结果很好，或验证试验结果也良好，但实际测定的个别结果会误 差很大。引起试剂间化学污染的原因很多，主要有两个，一是试剂中含有下一个检测所要测定的底物，或是含有的某种试剂成分与下一反应的底物有作用，因而直接 干扰下一反应的测定结果；另一种原因是该试剂所引导的反应对下一个项目的反应进程带来间接的干扰，在有试剂污染的情况下，下一个测试所测定的是前后两个项 目反应的综合作用结果。临床实验室：造成以上试剂间化学污染导致测试结果不稳定的种类都有哪些？于主任：根据试剂化学成分污染的途

36、径可分为：（1）试剂成分的直接污染：上一个测定试剂中含有下一个测试所要测 定的物质，直接干扰下一检测的测定结果。如：淀粉酶（AMY）试剂中含有较高浓度的钙（Ca 2+ ）；碱性磷酸酶（ALP）（IFCC法）、肌酸激酶（CK）（NAC法）、肌酸激酶-MB（CK-MB）（NAC法）、二氧化碳（CO2） （PEPC法）、AMY（EPS法）、三酰甘油（TG）等试剂中含有镁（Mg 2+）；葡萄糖（GLU）（氧化酶法）、总蛋白 （TP）与酸性磷酸酶（ACP）试剂中含有较高浓度的钾（K + ）；胆碱酯酶（ChE）、总胆固醇（CHOL）、GLU（GOD法）、尿酸（UA）（尿酸酶法）、乳酸脱氢酶（LD）（IFC

37、C法）、羟丁酸脱氢酶 （HBDH）（DGKC法）等试剂中含有磷酸缓冲液；CHOL、TG试剂及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）试剂中含有胆酸钠；丙氨酸氨基转移酶 （ALT）（IFCC法）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）（IFCC法）试剂中含有高活性的LD；以上试剂的交叉污染就分别会对Ca 2+、Mg 2+、K+（紫外酶法）、磷（P）、总胆汁酸（TBA）及LD的测定结果造成干扰。（2）试剂成分参与反 应：上一个试剂中含有的某种试剂成分与下一反应所要测定的底物有作用，因而干扰下一反应的测定结果。如：Mg 2+测定试剂的络合 剂亦能与铁（Fe）结合，影响铁与铁络合剂的结合；直接胆红素（DBil）（重氮法

38、）试剂含有EDTA，Mg 2+试剂中含有 EGTA，均能与Ca结合，从而影响Ca的测定；以甘油作为酶保护剂的试剂，会对TG的测定带来干扰；钙（MTB法）试剂对K+有 负干扰；CHOL试剂中含有胆固醇酯酶，可水解胆固醇酯形成游离胆固醇，而引起对游离胆固醇测定的干扰。（3）反应进程相同：上一个试剂所引导的反应对下 一个项目的反应进程带来间接的干扰，下一项目所测定的是前后两个项目反应的综合作用结果。如：当上一反应产物为H2O2时，则对以Trinder反应产生 颜色的测定结果引起干扰，如UA对CHOL结果的影响，CHOL对肌酐（CREA）（酶法）测定结果的影响，GLU（氧化酶法）对CREA测定结果的影

39、 响；CK（NAC法）、CK-MB（NAC法）试剂中含有GLU成分，其分析方法的原理中包含GLU的己糖激酶（HK）反应过程，因此可能对GLU的测定 带来干扰，尤其对GLU的HK法测定可能带来严重干扰。（4）影响反应条件：如上一试剂缓冲液成分改变了下一反应的pH环境，从而改变反应速率，如 TP（双缩脲法）测定需在pH89时，蛋白肽键才都能与碱性铜溶液作用生成紫色反应，若pH8时，则会导致TP结果偏低，还直接影响球蛋白、白蛋白/ 球蛋白的结果；酶活性测定有最适pH，大多数酶反应pH在6.07.5之间，ALP、-GT、LDH则在碱性条件下最适宜；CREA（苦味酸速率法） 反应条件为碱性，果糖胺（动力

40、学法）反应条件为酸性，受到污染后反应速率会减慢。CREA（酶法）试剂中含有抗坏血酸氧化酶，影响了氧化还原反应的进程， 会对TBA（酶循环法）测定结果有影响。DBil（钒酸盐氧化法）试剂中含有表面活性剂的酒石酸盐缓冲液会影响ALT活性，对测定结果有负干扰。临床实验室：如何判别试剂间存在化学污染？于主任：由于试剂中化学成分非常复杂，各种稳定剂、反应物质、缓冲体系共存，且各品种、各厂商的试剂内含物均不 同，因此试剂间的化学污染往往较难判别。日常工作中往往是仪器评估没问题，而用户使用时存有污染；质控品和Westgard法则不起作用，质控往往在控； 污染具有偶然性，并不是每次都出现。当按照日常的分析顺序

41、出现异常结果时，将出现异常结果的分析项目及其前一个项目单独复检又恢复正常，多是由于发生试剂 间交叉污染所致。但由于试剂成分的复杂多样性，仪器状况的独特性，可能发生的试剂间交叉污染的情况不尽相同。各个公司所提供的产品说明书常不能够全面反映 试剂组成的情况，因此需要通过试验才能发现试剂交叉污染可能带来的干扰。一般可以以下试验及步骤来加以判别：（1）追溯可疑检测项目的反应杯序号，在这之 前该反应杯做的是什么项目的检测，以此来初步估计是什么反应或什么物质对后项目检测产生干扰；初步确定后可选择同类反应，有针对性地实施交叉污染试验加以 验证，并寻找方法避开此污染。如加做清洗，更换试剂顺序，甚至更换检测试剂

42、或方法。（2）将某一试剂作为样本进行全套项目测定，观察各项生化结果的情况， 进而确定发生试剂交叉污染时造成直接干扰的项目。（3）1份样品分成2份，1份加生理盐水或其他适当的稀释液，另一份加等量的某试剂，同时测定，观察结果 的变化，进而确定可能发生试剂交叉污染时造成干扰的项目。（4）试剂交叉污染实验方法：交叉污染初试：假设有3个项目A、B、C，以一混合血清 作为标本，按以下顺序测试：A2A5、B2B5、C2C5： 以此4次测定值平均值分别作为A、B、C项目无污染时的均值；AB-A：表示B项目对A项目污染时A项目的测定值，其余表示类同。若（AB- A/A×100）95%或105%则强烈支

43、持B试剂对A有交叉污染。疑似污染确认：若上述初试结果B对A有污染，则可进行以下试验进行确认。临床实验室：如何消除试剂间的化学污染？于主任：首先要求检验人员对仪器工作流程、试剂组成、测定原理要了如指掌，对试剂交叉污染的各种可能性加以考 虑，合理设计程序。更换试剂时，应仔细研究说明书，发现和避免可能存在的试剂交叉污染。实际工作中，用全自动生化分析仪进行连续的多个项目的测定，每个反 应的详细过程难以探知，特别是比色杯的交叉污染无明显的特征，因此应理论分析结合实际应用摸索出一套符合本单位工作的方法：（1）为减少试剂间的化学污 染，应定期对仪器进行适当的保养，如更换管道，用去污剂、酸性洗液清洗比色杯，用

44、去污剂擦清试剂针，用无水乙醇擦洗搅拌棒等。（2）合理安排检测项目的顺 序：一般在安排项目顺序时要求两个项目间至少要有一个非干扰项目，由于各厂商试剂盒原理不同，内含成分不同，故无固定的测定顺序格式，需要自己摸索。较好 的做法是将被干扰项目置于干扰项目之前，以消除干扰发生的可能。一般检测顺序有以下原则：不受上一试剂的干扰；不影响下一试剂测定；不影响测试速 度；充分运用剩余试剂位开展新项目；利用好仪器的功能。（3）当合理设置测试顺序无法消除交叉污染时，可使用生化分析仪的试剂针、比色杯清洗程序，对 试剂针、比色杯进行2次或多次清洗。用碱性清洗液及酸性清洗液交叉冲洗试剂针可以有效地避免携带污染。（4）选

45、用具有抗交叉污染的试剂盒：如在游离胆固醇 试剂中添加胆固醇酯酶抑制剂，以减少胆固醇酯酶水解胆固醇酯而引起对游离胆固醇测定的污染。（5）部分大型全自动生化分析仪有多个模块或通道，可以将有化 学污染干扰的项目排在不同的模块或通道中检测。三种肺炎支原体血清学检测方法比较（广告成分严重）肺炎支原体是急性呼吸道感染的常见病原体之一。近年来，已成为小儿肺炎常见的病原体，由其引起的呼吸感染日趋增多。目前，实验室诊断方法主要依靠血清学。我们对2002年9月-2003年4月分院收治住院的呼吸道感染患儿进行微量颗粒凝集法和酶联免疫吸附法进行肺炎支原体抗体IgM的测试，并且同时检测冷凝集试验，现告如下。1材料与方法

46、1.1对象标本来源2002年10月2003年4月就诊的呼吸道感染症状的分院儿科病房呼吸道感染患者216例。每例均于入院2天内抽血，。同时用间接血凝法和酶联免疫法检测MP-IgM抗体及冷凝集试验。1.2 方法1.2.1微量颗粒凝集法测MP-IgM抗体，试剂盒SERODIASMYCO-由日本富士瑞比欧株式会社提供。严格按说明书进行操作，每次均设阴、阳性对照，滴度1：80为阳性。1.2.2ELISA法试剂由美国诊断自动化公司生产，上海领检科技公司提供，操作严格按说明书进行。1.2.3冷凝集试验按临床医学检验“冷凝集试验”进行操作，滴度1：64为阳性。2结果2.1 治疗结果216例受检样品中，MP感染和非MP感染患儿MP三种结果比较见表1。172例疑为MP感染的病例中，PA法阳性占 93.0%，ELISA法占95.3%，CAT法占67.4%。在44