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文档简介

1、常用细菌的代谢生理实验实验目的：掌握一些基本的微生物菌体的鉴别方法：糖发酵实验应用：观察细菌对糖度的分解情况，常用于肠道杆菌的鉴定。甲基红实验应用：是肠道杆菌常用的生化反应实验，主要用于区别大肠肝菌和产气肠 杆菌。靛基质实验应用：用于肠道杆菌的鉴定。尿素酶实验应用：肠杆菌科属间鉴定。实验原理糖发酵实验：代谢途径：多糖单糖丙酮酸酸性产物（或产酸产气 ）。通过指示剂呈酸性变色或者是气泡的产生情况来判断多糖是否被利用，进而可以对一些菌株进行区分。该实 验主要用于肠道杆菌的鉴定。甲基红实验：细菌分解糖，产生丙酮酸，进一步生成大量混合酸，使培养基 pH 维持在 4.4 以下，加 入甲基红后，使甲基红呈现

2、红色反应。此为甲基红实验阳性。靛基质实验：细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚） ，靛基质与试剂对 二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。尿素酶实验产生脲酶的细菌，能水解尿素生成氨和CO2，氨使培养基呈碱性变色。材料、器材与试剂材料：实验用菌体 1，实验用菌体 2。器材：试管、烧杯、三角烧瓶、台秤、玻璃棒、灭菌锅、移液管、超净台、酒精灯、镊子。试剂：甲基红、尿素、酚红、培养基： 葡萄糖蛋白胨培养基、蛋白胨培养基、尿素培养基。实验步骤1 、 培养基配置。配足够量的培养基，分装后，灭菌。2、接种。分别向四种培养基中接种菌株1、菌株 2，并注明培养基以及所用菌株种类。3、培养。

3、将接种完的培养基放入培养箱中培养。4、观察。三天后，取出试管，进行实验结果观察。 糖酵解实验与尿素酶实验不做任何处理，仅观察培养基与空白培养基的不同。 向甲基红实验的试管中加入甲基红试剂观察培养基颜色变化。向靛基质实验的试管中想加入试剂 1，混匀后静置一段时间后再加入试剂2.最后观察现象。实验结果及分析糖酵解实验结果：接种菌株 1 的培养基颜色比接种菌株 2 的培养基颜色浅，但均与空白培养基比并无明显 颜色变化，没有酸性颜色产生，也没有气泡产生。甲基红实验结果：接种菌株 1 的培养基浑浊，接种菌株 2 的培养基澄清。向培养基中加入甲基红试剂 后，培养基颜色加深，但并无酸性颜色产生。靛基质实验结

4、果：接种菌株 1 的培养基与接种菌株 2 的培养基颜色均与空白培养基颜色相同。且在加入 两种试剂后，培养基均无明显变化。结果分析：上述三个实验均不能分辨出菌株1、 2，且三个实验都没有出现预期的颜色变化。出现上述结果的可能愿意如下：1、菌株问题。菌株并不能按照预想途径进行代谢，从而无法观察到预想的现象。2、接种问题。超净台不是封闭的，由于操作问题可能引起杂菌污染。3、培养问题。培养时间短或者培养温度不适宜，使得菌体生长速度缓慢，不足以引起培养 基 pH 变化。尿素酶实验结果：图 4 ：尿素酶实验图片有左向右的试管分别是：土壤中混合菌培养基，大肠杆菌培养基，空白培养基。试管 1，2 中培养基均变为红色，说明菌体菌合成尿素酶分解尿素。土壤混合菌中是部分菌种 产尿素酶

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