CHEETAH高压制备色谱操作手册

1、cheetah高压制备色谱操作手册 cheetahtm高压制备色谱操作手册ver.1.7.2.14天津博纳艾杰尔科技有限公司 目 录1.cheetah高压制备色谱11.1.cheetah介绍11.2.工作原理11.3.cheetah仪器布局21.4.电路连接22.cheetah高压制备色谱性能指标42.1.环境要求42.2.电气要求42.3.性能指标53.cheetah 高压制备色谱仪的安装63.1.管路连接63.2.电路连接93.3.实验前准备104.cheetah 高压制备色谱软件介绍124.1.基本参数设置134.2.收集方式174.3.完成194.4.运行界面195.cheetah 简

2、易操作流程346.常见问题列表357.附录36431. cheetah高压制备色谱1.1. cheetah介绍cheetah高压快速纯化制备系统采用成熟的工业部件，全自动的软件控制，符合化学操作者的日常习惯。它具备以下优点：l 在200-400nm波长范围内，可以选择任意波长进行检测。l 可变双波长系统，选择目标化合物最大吸收波长的同时，可以再选择另一波长对杂质或第二目标产物进行监测。l 采用美国原装进口陶瓷无阀计量泵。具有寿命长，精度高，免维护等特点。l x/y轴二维自控定位装置，可适应多种容器收集。l 使用简单：色谱柱和流动相的更换都非常方便和简单。l 结构合理：系统采用模块化功能设计和一

3、体化结构设计，功能完备、工作效率高；重复投资少。l 全自动高效系统：系统采用了全自动工作方式，实验人员只需要输入合适的方法，系统自动实现从溶剂注入到馏分收集。l 采用了嵌入式工控机、自主开发的色谱分析系统；操作直观方便；数据传输准确及时。l 梯度泵可实现采用线性、等度或其他用户设定的方式来实现二元洗脱。1.2. 工作原理由泵输送流动相，通过进样阀上样，在色谱柱对样品进行分离后，利用检测器检测，电脑控制并记录，收集器根据设置的收集方式自动收集各个馏分。图 1.1 cheetah高压快速纯化制备1.3. cheetah仪器布局该仪器的工业设计结合了很多同类仪器的设计优势。将电路与管路有效隔离，该设

4、计的优势在于：l 有效的避免电路与管路交叉，便于组装和查找问题。l 对电路与管路进行隔离，避免因管路造成的电路的腐蚀与短路等，安全性高。图 1.2 cheetah布局1.4. 电路连接电源插座可承受线路频率为50到60hz，100-240伏ac±10%的线路电压。最大耗电量450w。由于电源适用范围宽，因此您可以不用电压选择器。由于电源内部装有自动电子保险管，因而没有外接保险器。电源开可自己控制工控机及其各部件打开，工控机可自我控制关闭电源，但是不可控制总电源开关。工控机软件内，可以对检测器进行开关操作，有关详细信息，请参阅软件操作。工控机底端左侧三个信号接口可实现鼠标、键盘、usb

5、设备的连接操作和数据输出。注意：为保证仪器的正常运行，请勿在未得博纳艾杰尔公司允许的情况下私自更换电源线。图 1.3 cheetah后视图-电路连接图 1.4 cheetah左侧面观-电路连接客户可通过ps2标准接口、usb接口与鼠标、键盘及其usb设备连接，实现数据传输与操作。2. cheetah高压制备色谱性能指标一个合适的环境对于保证cheetah中低压制备色谱的最佳性能非常重要。2.1. 环境要求l 推荐实验室温度为2027，相对湿度80%，温度变化不超过2。l 室内温度的骤变或气流直接吹仪器都将影响仪器的稳定性。l 工作台要求：长2.0米、宽1.0米、承重100kg、离墙距离0.3米

6、。l 当使用易燃或有毒的溶剂作为流动相时，房间应充分通风。l 当使用易燃的溶剂时，严禁室内使用明火或其它火源。l 避免将系统安装在有大量灰尘和腐蚀性气体的房间内，否则将缩短使用寿命并且降低系统性能。l 系统安放在远离能产生强磁场的设备，如电源有电器噪声，可购买带有过滤器的电源接头。2.2. 电气要求cheetah电源适用范围很宽，它可以承受这个范围内的任何线路电压。因此，在仪器后面没有电压选择器。并且由于电源内部配备了自动电子保险管，故没有外接保险器。l 单相交流100-240v，( 5%-10%)，50-60hz，有单独的良好接地。l 若电压不稳，需配置稳压电源。l 总数不小于4个扁平三角接

7、线插座。警告 仪器在关闭时仍有部分供电l 即使面板上电源开关关闭，电源仍然带电。l 要断开仪器和线路的连接，请拔掉电源线。警告 请将仪器连接到指定的线路电压l 如果将设备连接到比指定电压高的线路，可能会导致仪器损坏。l 如果将设备连接到比指定电压低的线路，可能会导致仪器无法正常运行。小心 请确保电源插头在能够接触到的地方l 请在仪器电源插座后面要有足够空间，确保仪器的电源接头能方便地接触到并拔出。l 遇到紧急情况时，请马上断开仪器与线路电源的连接。电源线针对cheetah高压制备色谱，博纳艾杰尔公司配备了专用的电源连接线。警告 请使用专用电源线l 没有接地连接和使用非指定的电源线可能导致漏电或

8、短路。l 切勿操作电源出口未接地的仪器。l 未经博纳艾杰尔公司许可，不得私自更换电源线。2.3. 性能指标泵性能指标类型性能指标流速范围1-200 ml/min溶剂输送方式双元无阀往复柱塞泵流量精度< ±1%压力上限200psi梯度精度 ±1%检测器性能指标类型性能指标检测器类型可变双波长ccd阵列检测器光源类型氘灯波长范围200-400nm基线噪音3×10-3(最大值)基线漂移3×10-3(最大值)光谱带宽8nm波长精度±1nm主控机机性能指标类型性能指标工控机类型触摸屏式处理器1.6ghz内存1024mb尺寸12.1英寸 硬盘 160

9、g3. cheetah 高压制备色谱仪的安装3.1. 管路连接表 3.1 cheetah右侧面观管路连接接column in连接柱子下端连接柱子上端column out3.1 检测器连接管路接solvent a或b放入流动相内图 3.2 流动相a/b管路的连接图 3.3 废液管连接示意luer接头管路的连接图 3.4 luer接头连接示意图3.2. 电路连接将随机配送电源插入检测器后视图中电源插槽内，另一头与电源连接。警告 仪器经过运输搬动后，切勿直接连接电源后开机l 请确保仪器放置平稳。l 请将收集器收集滴头手动移动到下图中所示位置，即收集器中间。图 3.5 首次开机收集器初始位置 注意 仪

10、器开机l 电源开关打开，开关处电源指示灯（与开关合二为一）亮起，仪器各部件会自动全打开。注意 仪器关机l 仪器关机顺序：仪器停机关闭使用中的软件关闭工控机关闭电源开关。l 切勿直接关闭电源开关，以免文件数据丢失。3.3. 实验前准备3.3.1. 管路中气泡的排除仪器安装后，由于管路中存在大量空气，影响仪器正常运行，会导致流速不准，因此仪器在正常使用与实验前，需要进行气泡的排除。流动相：纯净水流速：70ml/min收集方式：manual注意：其余参数不用修改luer接头上下两端对接，按照如下程序运行系统。b%startendduration1100100120013.3.2. 管路内原溶剂的排除

11、将a/b两管路放入分析纯（ar）异丙醇中，运行泵，使得总流量大于400ml，即管路中a/b管路溶剂运行之和大于400ml，每个管路最小运行不低于200ml。3.3.3. 溶剂系统更替a/b两管路均放入即将运行的两相溶剂中的b相，运行泵，使得泵运行总流量大于600ml，即a/b两管路运行溶剂之和大于600ml，a、b每个管路最低运行体积不低于300ml。3.3.4. 系统中强系统性溶剂去除设置程序为色谱分离中的润柱程序，仪器按照润柱程序（未接色谱柱）运行总溶剂200ml，即可。由此完成溶剂系统的更换，可进行分离。例：目前仪器刚采用反相c18柱对目标化合物进行分离，采用的溶剂是甲醇-水，接下来的实

12、验需要采用正相硅胶柱分离另一目标化合物，徐采用的溶剂是石油醚-乙酸乙酯，请更换系统。1. 取下c18色谱柱，将luer接头上下连接起来。把a、b管路分别放在500ml分析纯的异丙醇溶剂中，设置流速为30ml，b%为5050运行20min。2. 运行上述结束后，将a、b管路均放入乙酸乙酯中，依照上述设置（流速30ml，流速为30ml，b%为5050运行20min），运行。步骤二运行自动结束后，取出a管路放入石油醚中，设置流速30ml，b%为00运行10min，即可。注意照上述例子更换完溶剂系统后，运行cheetah标准品程序，待标准品运行完毕，一切正常后，仪器方可验收，正常使用。4. cheet

13、ah 高压制备色谱软件介绍点击桌面图标，运行软件。首先出现的是软件启动画面：图 4.1 软件启动画面随后进入软件，出现方法建立界面。图 4.2 方法建立界面4.1. 基本参数设置可以设置样品名（sample name）、用户名（user name）、溶剂a（solvent a）、溶剂b（solvent b）、洗脱流速（flow rate）、压力上限（max pressure）、运行单位（run unit）、初始废液体积（initial waste）、收集规格或试管架类型（rack type）、单个试管收集体积（fraction size）、初始试管（start tube）、柱体积（column

14、 volume）、收集波长（collection wavelength）和监测波长（monitor wavelength）样品名溶剂a洗脱流速压力上限检测波长监测波长初始浪费用户名溶剂b运行单位试管架规格收集体积初始试管柱体积图 4.3 参数设置4.1.1. 样品名（sample name）、用户名（user name）单击sample name、user name 弹出对话框。如图4.4本仪器为触摸屏操作，请使用触摸笔，输入用户名及样品名。 功能键说明：删除键：<-取消键：cancel清除键：clear确认键：ok图 4.4 触摸键盘注：用户名及样品名最多输入12个字符，超出范围系统会

15、给予提示。4.1.2. 溶剂a、溶剂b单击solvent a、solvent b，出现下拉菜单。如图4.5图 4.5 溶剂选择下拉菜单上图中为流动相（solvent b）的内容，为客户提供了12种常用溶剂，用户想更改为n-hexane只需要单击n-hexane即可。其他几行操作与该行相同。4.1.3. 洗脱流速本系统支持流速范围为1100 ml/min。根据所选硅胶柱子的规格来确定选择流速。常见flash色谱柱流速见附录1.。例如40 g的柱子建议流速为40 ml/min。右图为触摸键盘，用户可以设置实验所需要的流速。如图4.6. 图 4.6 触摸数字键盘当流速设置的范围超出允许范围时，系统会

16、给出提示。如果设置值高于最大流速，则会将流速设置为最大流速；如果设置值低于最小流速，则会将流速设置为最小流速。图 4.7 流速超范围提示4.1.4. 压力上限设置（max pressure）单击输入框，弹出触摸数字键盘，输入限制的压力。本仪器提供最大耐压100psi，约0.7mpa。在使用过程高压力超过上限值，系统会暂停工作，用户检查超压原因，排除后，继续运行即可。图 4.8 超压警告4.1.5. 运行单位（run unit）分钟（min）、柱体积（cv）在gradient中duration值和windows窗口start、end的具体含义由运行单位决定。例如：运行单位为分钟且duration

17、为10，则系统运行10分钟；若运行单位为柱体积（cv）则系统运行10个柱体积。单击run unit 选择运行单位。4.1.6. 试管规格（rack type）提供四种类型的试管架和一种类型的烧瓶架。当单击该钮的向下箭头时可以弹出所有的试管架类型，用户可单击选择。如下图所示：其中f1-13 mm 12x4 的含义是：13 mm的试管架，12列4行。fs-100 ml 4x3为100 ml 圆底烧瓶架。4.1.7. 收集体积（fraction size）该值是每个试管收集的容量，因为每种试管的容积是一定的所以每种试管的收集体积是由上限的。当用户输入值超过试管收集体积上限值时，系统自动将其设置为试管

18、上限值。不同规格试管最大收集体积如表4.1。试管架规格收集体积（ml）试管数目试管高度（mm）备注f1-13mm 12*42-896200f2-15mm 12*42-2096200f3-18mm 11*42-3088200f4-25mm 10*32-6060200f5-100mm 4*32-10012烧瓶4.1.8. 柱体积（column volume）该项只有在运行单位选择为柱体积时才有效，如果不选为柱体积则该项不可使用。如果运行单位选择为柱体积则可以根据当前flash柱的柱体积，在column volume可以输入柱体积的具体值。常见flash cv值见附录14.1.9. 起始收集试管位置

19、（start tube）该项功能可以设置试管的起始收集位置，默认为第一个试管。方便用户的使用，并根据试管架的具体情况来确定起始位置。不同规格试管架对应试管数目不同，超出试管范围系统会自动提示，以15mm试管架为例（如下图）。图 4.9 试管编号超限报警4.1.10. 初始废液体积（initial waste）由电磁切换阀到试管有一段管路，其中存在上次试验的残留。所以该体积会影响当前试验的结果。系统会将该体积放入试管架的起始试管内，作为废液处理。所以起始试管为初始浪费。该体积可设定范围是0-10 ml。用户可以通过触摸键盘设置初始浪费体积。设置超过范围，系统会给提示。4.1.11. 检测波长（d

20、etection）、监测波长（monitor）可变波长（200-400 nm）可调。用户点击detection、monitor，弹出数字键盘（图4.3），输入波长。设置值超过波长范围，系统会给提示。图 4.10 超出波长设置范围提示窗口4.2. 收集方式全收集（all）、峰收集（peak）、手动收集（manual）和窗口收集（windows）每一个试验只能选择一种收集方式，当该方式选定后不可以在试验中途切换收集方式。4.2.1. 全收集（all）从实验开始所有的淋出溶剂全部收集。4.2.2. 峰收集（peak）分为阈值收集（threshold）和斜率收集（slope）。注：threshold（

21、au）范围是0.01-3au,超出范围系统会给予提示。slope斜率收集为一种特定的阈值收集。系统软件在采集数据时，即对检测信号的采集，系统智能跟踪检测信号随时间的变化。当色谱峰出现时，信号随时间的变化出现拐点或峰阈值。用户通过设定斜率而判断色谱峰的出现并进行收集。此功能通常被用于对待分物质的高纯度收集。斜率越大，峰阈值越高，收集的组分纯度越高。4.2.3. 手动收集（manual）用户手动收集馏分。不再对液体的体积进行计量。可以通过system界面的强制收集按钮（force collect）和强制浪费按钮（force waste）来手动操作。4.2.4. 窗口收集（windows）窗口收集可

22、以通过添加（add）、插入（insert）、删除（del）编辑需要收集的时间段。start以及end表示的数值代表运行单位数。例如：运行单位为cv，step 2 就代表收集第二个cv-第240个cv。au代表这个这个阶段需要收集峰吸收值，如果为0，则代表这个时间段全收集。4.3. 完成编辑完成后，可以点击”ok”，退出界面，进入梯度设置和运行界面。4.4. 运行界面编辑完参数后，进入设置梯度和运行界面。如下图：图 4.11 运行界面运行界面包括：菜单栏、谱图显示区域、谱图处理区域、梯度修改区域、修改参数区域、操作区、状态栏。4.4.1. 菜单栏包括：文件（file）、方法（method）、工具

23、（tools）、帮助（help）和关于（about）。4.4.1.1. 文件（file） 说明：open 打开储存方法/数据auto save information 自动储存save 手动储存report 输出报告图 4.12 文件菜单auto save information：设置默认保存目录（如下图），设置完成后，实验信息会自动储存到目录中，默认保存的名字为：use name + sample name+日期图 4.13 自动保存位置设置save 手动保存：可以保存电脑任意目录下面。图 4.14 手动保存report 输出报告：本仪器输出报告格式为pdf文档，进度条完成后，会自动打开报告

24、文档。图 4.15 输出报告进度条4.4.1.2. 方法（method）在运行关闭的情况下，回到方法编辑界面。4.4.1.3. 工具（tools） 功能说明：lamp on-off 氘灯控制pump test 泵调试xy test 收集器坐标调试add solvent 添加溶剂名图 4.16 工具菜单lamp on-off:氘灯控制，软件启动前氘灯关闭，软件打开后氘灯自动打开，软件关闭后氘灯自动关闭，用户也可以通过氘灯控制程序（下图），在软件开启状体关闭氘灯。软件状态栏会显示氘灯关闭和开启状态。图 4.17 氘灯控制界面pump test:可以单独控制泵系统，用来冲洗色谱柱，调解泵流速。图 4

25、.18 泵测试界面功能描述：flow rate： 设置流速start garads： 起始梯度end grads： 终止梯度run time： 运行时间the max press： 最大压力time： 当前运行时间current press： 当前压力start： 开始stop： 停止exit： 退出xy test：首先按附图5-1所示，放置试管架位置。附图5-1试管架俯视图1、 点击软件界面上“tool”“xy test”2、 单击“single step”如图附图5-2所示：分别点击“line position”和“column position”下的输入框，输入“行位置”“列位置”数据，

26、点击“run”，此时收集器会运行到当前设置的坐标位置。反复修改“line position”和“column position”的值，直到确定运行到第一根试管中心位置方可，记录下此时“line position”和“column position”的值。注：可以先输入如图数值，再根据误差调整。运行过程中输入数据后仪器停止运行为正常现象，此为数据超出坐标范围保护。附图5-2 单步运行3、 切换到continuous标签页，在racktype右侧下拉菜单选择试管架型号，然后在line no.下输入试管架行数，在column no.下输入试管架列数，如图5-3中，选择试管架型号为“f3-18mm 1

27、1×4”，默认两副试管架为一组，所以在“line no.”下输入“8”，在“column no.”下输入“11”。然后将上一步中记录的“line position”的值填入“line initial position”下的输入框中，将“column position”的值填入“line initial position”。附图5-3 连续运行4、 重复第2步，确定与第一根试管对角的试管（在f3-18试管架中是34号试管）的坐标位置，然后根据与第一根试管（1号）对应x/y轴坐标的距离以及相隔试管的数量，分别算出“line spacing”和“column spacing”的值。注：在f

28、3-18试管架中，应该将1号试管的“line position”值减去34号试管的“line position”值5、 重复第2步，确定第二副试管架与第一副试管架之间的距离，填入“rack spacing of lines”。各数据含义如下如下：行数8列数11行初始行位置“单步运行”时记录的行位置数据列初始列位置“单步运行”时记录的列位置数据行间距每行之间的距离列间距每列之间的距离四到五行间距由于两个试管架之间有空隙，故四五行间距需另外设置起始试管位置根据用户使用试管位置设定六七行微调依实际情况进行微调注：出厂前，均按照本公司试管架设置坐标，且坐标均为设置准确，如果用户自行更改试管架，请认真理

29、解xy test软件使用方法后再进行调整。add solvent：溶剂名添加/删除功能，点击该功能后，出现如下窗口。图 4.19溶剂名添加/删除功能在name一栏中输入要添加的溶剂名，然后点击add按钮，则可以将输入的溶剂名添加入可选溶剂列表。点击solvent后面的菜单，选择已有的溶剂名，然后点击del按钮，则可将当前选中的溶剂从列表中删除。4.4.1.4. 帮助（help）点击“help”，会弹出一个cheetah操作手册。4.4.1.5. 关于（about）点击“about”，会弹出软件的版本信息。图 4.20 软件版本信息4.4.2. 谱图显示区域纵坐标：吸收值（au）、b%横坐标：运

30、行单位（min/cv）谱图：红色-检测波长、收集波长蓝色-监测波长绿色-梯度图 4.21 图谱显示区域在进行收集的时候，会有4ml体积左右的延迟，减少从检测器到收集器间的管路体积对收集结果的影响。4.4.3. 谱图处理区域 处理谱图-放大、缩小、拖动等查询单一试管收集组分修改梯度确认修改梯度图 4.22图谱处理4.4.3.1. 谱图显示操作按钮单击按钮可以弹出该界面： 其中有六种功能，根据用户的要求操作图谱。分别是图谱矩形放大、图谱横向放大、图谱纵向放大、图谱恢复原状、图谱整体放大和图谱整体缩小。图谱矩形放大 单击按钮，然后在图谱显示区上点击拉划一个矩形区域即可，该矩形区域可按比例放大。图谱横

31、向放大 单击按钮，然后在图谱显示区上左右拉划其纵坐标不变，该区域可按比例放大。图谱纵向放大 单击按钮，然后在图谱显示区上上下拉划其横坐标不变，该区域可按比例放大。图谱恢复原状 单击按钮可以使图谱恢复到系统默认状态。图谱整体放大单击按钮可以使图谱按比例整体放大。图谱整体缩小单击按钮可以使图谱按比例整体缩小。图谱拖动按钮 单击按钮，用户可以随意拖动图谱，便于用户观察和使用。状态取消按钮 由于用户在对图谱操作时，不同的操作使图谱保留了相应的状态。此按钮将清除该状态，以免当鼠标移动到图谱显示区时产生误操作。4.4.3.2. 图谱组分与其试管位置的对应显示 在图谱显示区单击峰的某个区域时，可以查看该区域

32、所对应的试管是哪一只。此时在中可显示该试管的具体位置。因为试管架打有位置标号，所以用户可根据tube号直观的找到试管架上对应的试管。试管显示区域也可以显示对应的试管位置，当前显示红色，如下图： 图 4.23试管号 18；红色试管位置；谱图中粉红色线区域一一对应。4.4.3.3. 修改梯度 (change grads) 在暂停情况下，点change grads 按钮，可以随意修改梯度。修改完成后选择ok。在运行界面左下角grads可以显示修改后的梯度具体值。也可以grads界面修改梯度。如图：功能键说明：双击选中梯度；通过触摸键盘修改梯度add： 添加梯度insert： 插入梯度del： 删除选

33、中梯度图 4.24 梯度修改 例如：梯度第二行代表：起始b%浓度为0, 结束浓度为100%；持续时间（duration）10min。注：如果方法界面运行单位为cv，则表示持续10个cv。4.4.4. 操作区rack1 试管架parameter 参数设置grads 梯度tlc 自动生成梯度 uv zero 归零键force collect 强制收集force waste 强制浪费next tube 下一试管equilibrate 润柱run gradient 运行梯度pause 暂停start 开始图 4.25 操作区4.4.4.1. rack本仪器提供4种规格试管架以及1种规格烧瓶，rack1

34、代表第一排列试管架，最多可以运行2排列试管架。4.4.4.2. parameter运行参数，包括流速、检测波长、监测波长。其中流速可以在线修改。本系统支持流速范围为5100 ml/min。超出流速范围，系统给予提示。如下图：extend time ：延长梯度，延长时间为5min， 可多次点击。flow rate（ml/min）：洗脱流速，可以在线修改。4.4.4.3. grads 梯度梯度显示，在线修改梯度，详情见4.3.3.3。4.4.4.4. tlc自动转化梯度选择柱子规格、流动相a与流动相b的比例后，点击ok按钮可在界面中自动生成洗脱梯度，用户可以根据需要对梯度进行添加和删除。通过触摸键

35、盘可以改变流动相的比例数值。注意：初始界面为a-0 ；b-0 。 输出a、b值时，需要满足a >=b.4.4.4.5. uv zero该按钮为软件基线回零按钮，在润柱过程中由于基线可能不平稳。通过操作该按钮使基线回到零，以保证试验的准确性。该按钮在润柱和运行过程中都起作用，如果在运行过程中，出现基线漂移，可以通过该功能回零，运行过程回零需要确认后回零。4.4.4.6. 强制收集（force collect）force collect 为强制收集按钮。在特殊的情况下，用可能需要对组分进行强制收集。此按钮分为两种状态：按下和弹起。按下该按钮则收集器开始强制收集，当达到试管设定收集体积时，自动

36、切换到下一个试管收集。在按一下则按钮恢复到弹起状态，系统按原来收集方式进行。该按钮可以和force waste 按钮协同工作，当force collect 为按下状态时force waste一定为弹起状态。按钮force collect和按钮force waste可以同时为弹起状态，但一定不能同时按下。即收集器不可能在同一时间内又收集又浪费。如果force collect如果在method界面设置收集方式为manual时只能通过该按钮和force waste按钮相互协调收集馏分。在润柱程序运行时该按钮不可用。4.4.4.7. 强制浪费（force waste ）强制浪费按钮，此按钮分为两种状态

37、：按下和弹起。按下该按钮则收集器开始强制浪费，在按一下则按钮恢复到弹起状态，系统按原来收集方式进行。该按钮可以和force collect 按钮协同工作，当force waste 为按下状态时force collect一定为弹起状态。按钮force collect和按钮force waste可以同时为弹起状态，但一定不能同时按下。即收集器不可能在同一时间内又收集又浪费。如果在method界面设置收集方式为manual时只能通过该按钮和force collect按钮相互协调收集馏分。在润柱程序运行时该按钮不可用。4.4.4.8. next tube在实验过程中，用户可以通过单击该按钮使收集器到当

38、前试管的下一个试管开始收集4.4.4.9. 润柱（equilibrate）润柱按钮，该按钮为启动润柱程序的按钮。纯化方法的开始，通常先润柱。点击该按钮便调用梯度表中的第一行梯度进行润柱。在此过程中用户可以通检测器和软件的uv zero 功能使基线平稳。用户观察基线已经平稳而润柱还没结束，可以单击该按钮停止润柱。润柱结束后，若基线还不平稳，可以重新点击equilibrate按钮重新润柱。当润柱结束后run gradient按钮被激活，可以进行下一步操作。4.4.4.10. 运行梯度（run gradient）运行梯度，系统会提示add sample。4.4.4.11. 暂停（pause）点击暂停

39、后，用户可以修改梯度、流速等试验参数。然后点go 继续运行4.4.5. 状态栏 b% ： 溶剂b百分比 detection（au）：吸收值lamp： 氘灯状态pressure：当前系统压力，单位是psi，time：运行时间5. cheetah 简易操作流程6. 常见问题列表现象原因处理峰展宽保留时间过长使用更强流动相，提高流速上样量过大减少上样量样品超载化合物流出太早使用大柱子，减少上样体积，或稀释样品双峰干扰峰进样前提高样品纯度，改变流动相前面运行化合物的干扰延长运行时间，结束运行时提高b相比例，加长柱子平衡时间柱装填不好更换柱子和降低流动相溶剂强度柱超载使用大容量柱子或减少样品量上样溶剂太

40、强使用较弱溶剂制备样品，然后调整流动相溶剂强度样品和流动相不相容使用易溶解的溶剂基线漂移柱污染使用强溶剂冲洗柱子，更换柱子系统泄漏停止和维修流动相有紫外吸收更换流动相7. 附录 size 4g12g20g40g80g120g330gsample load cv=10.01-0.02g0.03-0.06g0.05-0.1g0.1-0.2g0.2-0.4g0.3-0.6g0.75-1.5gsample load cv=20.02-0.08g0.06-0.24g0.1-0.4g0.2-0.8g0.4-1.6g0.6-2.4g1.5-6.0gsample load cv=60.08-0.4g0.24-

41、1.2g0.4-2.0g0.8g-4.0g1.6-8.0g2.4-12.0g6.0-33.0gcolumn volume (ml)8244080160240600flow rate min(ml/min)581020253550flow rate max(ml/min)182025405080100pressure (psi)180 psi maximumlength (cm)7.09.011.014.021.023.523.5diameter 1.52.12.63.13.24.15.7l/d ratio4.74.34.24.56.65.74.1附录一 flash柱参考附录二 压力换算psia

42、tmkgf/cm2kpabarmpa1psi=10.0680.076.90.070.0071atm=14.711.031011.010.1011kgf/cm2=14.20.9681980.980.0981kpa=0.1450.010.0110.010.0011bar=14.50.9871.0210010.11mpa=1459.86910.21000101附录三 筛目-微米对照表筛目微米140106170902007523063270533254540038450325002860023700208001810001312501016708.520006.550002.580001.5附录四 常

43、用溶剂性质一览表化合物名称极性粘度cp20沸点uv截止波长（nm）i-pentane异戊烷0-30-n-pentane正戊烷00.2336210petroleum ether石油醚0.010.33060210hexane己烷0.060.3369210cyclohexane环己烷0.1181210isooctane异辛烷0.10.5399210trifluoroacetic acid三氟乙酸0.1-72-trimethylpentane三甲基戊烷0.10.4799215cyclopentane环戊烷0.20.4749210n-heptane庚烷0.20.4198200butyl chloride丁基氯; 丁酰氯10.4678220trichloroethylene三氯乙烯; 乙炔化三氯10.5787273carbon tetrachloride四氯化碳1.60.9777265trichlorotrifluoroethane三氯三氟代乙烷1.90.7148231i-propyl ether丙基醚; 丙醚2.40.3768220toluene甲苯2.40.59111285p-xy