人教版教学课件[名校联盟]福建省三明市泰宁一中生物选修三22动物细胞工程课1

1、离体植物器官、离体植物器官、组织或细胞组织或细胞愈伤组织愈伤组织胚状体胚状体植物体植物体 脱分化脱分化再分化再分化（芽、根）（芽、根）n植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物组织培养植物组织培养使用的培养基使用的培养基： 固体固体有机物（蔗糖）有机物（蔗糖）植物激素植物激素植物体细胞杂交植物体细胞杂交植物细胞植物细胞a 植物细胞植物细胞b 去细胞壁去细胞壁原生质体融合原生质体融合杂种细胞杂种细胞愈伤组织愈伤组织杂种植株杂种植株植物组织培养植物组织培养植物细胞融合1、植物体细胞杂交的结果、植物体细胞杂交的结果是产生了？是产生了？2、这个过程中涉及的原理是？、这个

2、过程中涉及的原理是？杂种植株杂种植株细胞膜的流动性细胞膜的流动性 植物细胞的全能性植物细胞的全能性动物细胞工程动物细胞工程常用的技术手段常用的技术手段动物细胞培养动物细胞培养动物细胞融合动物细胞融合单克隆抗体单克隆抗体核移植核移植一、动物细胞培养一、动物细胞培养动物细胞培养的概念：动物细胞培养的概念：动物细胞动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，培养就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。的培养基中，让这些细胞生长和增殖。为什么要进行动物细胞培养?1.1.动物细胞培养动物细胞培养如何进行细胞培养

3、?2.2.12.2.1动物细胞培养动物细胞培养和核移植技术和核移植技术 从动物机体中取出相关组织，将它们分散从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。些细胞生长和增殖。1.1概念概念（一）动物细胞培养的过程（一）动物细胞培养的过程1、选材：、选材：动物胚胎或幼龄动物的组织、器动物胚胎或幼龄动物的组织、器官官，它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程，它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养。度低，容易培养。 2.分散成单个细胞分散成单个细胞v在进行动物细胞培养时，用在进行动物细胞培养时，用胰蛋白酶

4、胰蛋白酶分散分散细胞，说明细胞间的物质主要是细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质蛋白质。动。动物细胞培养适宜的物细胞培养适宜的ph为为7.27.4，此环境下，此环境下胃蛋白酶（胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。的活性较高。阅读课本阅读课本观察图片，观察图片，简述动物简述动物细胞培养细胞培养的基本过的基本过程程动物动物胚胎胚胎或或幼龄幼龄动动物的组织、器官物的组织、器官胰蛋白酶胰蛋白酶剪碎剪碎单个细胞单个细胞加培养液加培养液制成制成细胞细胞悬浮悬浮液液10代代细胞细胞部分细胞部分细胞“癌变癌变”，遗传物质改变，无遗传物质改变，无限传代限传代动

5、物细胞培养不能动物细胞培养不能最终培养成动物体最终培养成动物体50代细胞代细胞原代培养原代培养传代培养传代培养细胞贴壁细胞贴壁剥离、分瓶剥离、分瓶细胞株细胞株细胞细胞细胞系细胞系3、过程、过程胰蛋白酶胰蛋白酶接触抑制接触抑制有关概念有关概念传代培养传代培养细胞贴壁细胞贴壁接触抑制接触抑制原代培养原代培养有关概念有关概念细胞株细胞株：原代细胞一般传至原代细胞一般传至10代左右细胞代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到活到4050代，这种传代细胞为细胞株。代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系细胞系：细胞株传代至细胞株传代至50代后又出现细胞代后

6、又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。容易传代培养。 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考以下问题：根据你所学的内环境的知识，思考以下问题： 1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？体外培养

7、细胞时需要提供哪些物质？ 2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？体外培养的细胞需要什么样的环境条件？ 讨讨 论论充足营养充足营养适宜温度、适宜温度、ph和气体环境；无菌无毒环境和气体环境；无菌无毒环境（二）、动物细胞培养的条件：（二）、动物细胞培养的条件：1.无菌、无毒的环境无菌、无毒的环境培养液和所有培养用具进行无菌处理培养液和所有培养用具进行无菌处理措施：培养液中加抗生素，定期更换培养液措施：培养液中加抗生素，定期更换培养液2.营养营养糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因子（维生素、糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因子（维生素、激素等）和动物血清激素等）和动物血清3.温度和温度和p

8、h 36.50.5 ph为为7.27.44.气体环境气体环境 （ 主要是主要是o2 和和co2） 通常通常95空气空气 5的的co2获得细胞获得细胞细胞的全能性细胞的全能性细胞株、细胞系细胞株、细胞系植物体植物体培养结果培养结果或细胞分泌蛋白或细胞分泌蛋白快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株等无病毒植株等培养目的培养目的葡萄糖、动物血清葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较项目比较项目植物组织培养和动物细胞培养的比较（植物组织培养和动物细胞培

9、养的比较（非常学案非常学案p28p28）（三）、（三）、动物细胞培养技术的应用动物细胞培养技术的应用（1 1）生产生物制品：病毒疫苗、干扰素、）生产生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。单克隆抗体等。（3 3）用于检测有毒物质）用于检测有毒物质（2 2）基因工程中常用的受体细胞）基因工程中常用的受体细胞（4 4）用于生理、病理、药理等方面的研究，）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据为治疗和预防疾病提供理论依据 1 1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是变的细胞是 -（ ） a a细胞系细胞系 b b细胞株细胞株 c

10、c原代细胞原代细胞 d d传代细胞传代细胞2 2、动物细胞工程技术的基础是、动物细胞工程技术的基础是 -（）（） a.a.动物细胞融合动物细胞融合 b.b.单克隆抗体单克隆抗体 c.c.胚胎移植胚胎移植 d.d.动物细胞培养动物细胞培养ad3 3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞是这样的组织细胞 （ ） a. a. 容易产生各种变异容易产生各种变异 b b具有更强的全能性具有更强的全能性 c. c. 取材十分方便取材十分方便 d d分裂增殖的

11、能力强分裂增殖的能力强d 4. 4.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于-（ ） a.a.培养基不同；培养基不同； b.b.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；动物细胞培养不需要在无菌条件下进行； c.c.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能； d.d.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培 养成植株。养成植株。a2.2.动物细胞动物细胞核移植技术和克隆动物核移植技术和克隆动物 将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，

12、使其重组并发育成为一个新的胚胎，的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆克隆动物）动物）分分类类胚胎细胞核移植胚胎细胞核移植：体细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易细胞分化程度低，恢复全能性容易 细胞分化程度细胞分化程度高高，恢复全能性，恢复全能性不不容易容易2.1 动物细胞动物细胞核移植概念：核移植概念：n克隆：指从一个共同的祖先，通过无性繁殖的克隆：指从一个共同的祖先，通过无性繁殖的方式产生出来的一群遗传特性相同的方式产生出来的一群遗传特性相同的dnadna分子，分子，细胞或个体。细胞或个体。n克

13、隆包括三个层次：克隆包括三个层次：n 分子水平：分子水平：如如pcrpcr扩增扩增dnadnan 细胞水平细胞水平：如动物细胞培养：如动物细胞培养n 个体水平：个体水平：如克隆动物如克隆动物2.2体细胞核移植的过程：体细胞核移植的过程：思考：思考：1.核移植的受体细胞是什么？处在什么时期？核移植的受体细胞是什么？处在什么时期？2.通过什么手段激活受体细胞，构建重组胚胎？通过什么手段激活受体细胞，构建重组胚胎？ m中期卵母细胞中期卵母细胞诱导方法：物理或化学方法激活受体细胞，完成诱导方法：物理或化学方法激活受体细胞，完成细胞分裂和发育进程。细胞分裂和发育进程。讨论：讨论：1.在体细胞的细胞核移植

14、到受体卵母细胞之在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？ 为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自有重要利用价值的动物提供的体细胞，在供体自有重要利用价值的动物提供的体细胞，在供体细胞的细胞核移至受体细胞之前，必须将受体细细胞的细胞核移至受体细胞之前，必须将受体细胞的遗传物质去掉或将其破坏。胞的遗传物质去掉或将其破坏。 培养的动物细胞一般当传代至培养的动物细胞一般当传代至10105050代代左右时，部分细胞核型可能会发生变化，其左右时，部分细胞核型可能会发生变化，其细胞遗传物质可能会发

15、生突变，而细胞遗传物质可能会发生突变，而1010代以内代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。因此，的细胞一般能保持正常的二倍体核型。因此，在体细胞核移植中，为了保证供体细胞正常在体细胞核移植中，为了保证供体细胞正常的遗传基础，通常采用传代的遗传基础，通常采用传代1010代以内的细胞。代以内的细胞。2.用于核移植的供体细胞一般都选用传代用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，想一想，这是为什么？代以内的细胞，想一想，这是为什么？3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了对体细胞供体动物进行了100%的复制吗

16、？为什么？的复制吗？为什么？绝大部分绝大部分dnadna来自于供体细胞核，但其核外还有少量来自于供体细胞核，但其核外还有少量的的dnadna，即线粒体中的，即线粒体中的dnadna是来自于受体卵母细胞。是来自于受体卵母细胞。此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的一些此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的一些行为、习性的形成与所处环境有很大关系，核供体动行为、习性的形成与所处环境有很大关系，核供体动物生活的环境与克隆动物所生活的环境不会完全相同，物生活的环境与克隆动物所生活的环境不会完全相同，其形成的行为、习性也不可能和核供体动物完全相同，其形成的行为、习性也不可能和核供体动物完全相同，

17、从这一角度看，克隆动物不会是核供体动物从这一角度看，克隆动物不会是核供体动物100%100%的复的复制。制。1、谁是“多莉”的母亲？2、“多莉羊”是雄还是雌？3、是否符合孟德尔遗传？问问题题卵细胞c母绵羊子宫母绵羊母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核细胞核移植胚胎移植早期胚胎多莉羊分娩卵裂融合后的卵细胞细胞拆合技术妊娠2.3体细胞核移植技术的应用前景：体细胞核移植技术的应用前景：1、在畜牧业中可以加、在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程速家畜遗传改良的进程2、保护濒危物种、保护濒危物种3、医药卫生领域生产、医药卫生领域生产医用蛋白质及组织器官医用蛋白质及组织器官的移植的移植4、了解胚胎发育和衰老过程；追

18、、了解胚胎发育和衰老过程；追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病踪研究疾病的发展过程和治疗疾病3、体细胞核移植技术存在的问题、体细胞核移植技术存在的问题n胚胎移植动物幼体产出胚胎移植动物幼体产出 概率概率10n克隆动物存在着健康问题克隆动物存在着健康问题n克隆动物的食品安全性问题存在争议克隆动物的食品安全性问题存在争议np50 思考与讨论思考与讨论三、动物细胞融合概念：也称细胞杂交。是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。诱导方式诱导方式物理法物理法化学法化学法生物法：生物法： 灭活的病毒灭活的病毒仙台病毒仙台病毒紫外线紫外线

19、丧失感染性丧失感染性（不感染细胞）（不感染细胞）保留融合活性保留融合活性 （诱导细胞融合）（诱导细胞融合）1、诱导方式、诱导方式动物细胞融合（细胞杂交）动物细胞融合（细胞杂交）2个或多个动个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程物细胞结合形成一个细胞的过程细胞细胞a细胞细胞b杂种细胞杂种细胞灭活的病毒灭活的病毒物理法物理法化学法化学法仙台病毒仙台病毒疱疹病毒疱疹病毒新城鸡瘟病毒新城鸡瘟病毒2.2.过程：过程：灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞细胞融合，形成杂种细胞（细胞膜具有一定的流动性）（细

20、胞膜具有一定的流动性）用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程细胞核细胞核病毒颗粒病毒颗粒细胞核细胞核拓展：聚乙二醇处拓展：聚乙二醇处理后，培养液中存理后，培养液中存在哪几种细胞？在哪几种细胞？脾脾-脾脾 脾脾-瘤瘤 瘤瘤-瘤瘤 未融合的脾细胞未融合的脾细胞 未融合的瘤细胞未融合的瘤细胞3、原理细胞膜的流动性4、用途：制备单克隆抗体制备单克隆抗体动物细胞融合相当于植物体细胞杂交的原生质动物细胞融合相当于植物体细胞杂交的原生质体融合过程体融合过程 观看示意图简述融合过程？观看示意图简述融合过程？有何同？不同？有何同？不同？动物细胞融合动物细胞融合主要用于制备主要用于制备单

21、克隆抗体单克隆抗体获得杂种植株获得杂种植株用途用途物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、物理（离心、振动、电刺激）振动、电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目植物、动物细胞融合的比植物、动物细胞融合的比较较在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正

22、确的在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）是（）a结果是相同的结果是相同的b杂种细胞的形成过程基本相同杂种细胞的形成过程基本相同c操作过程中酶的作用相同操作过程中酶的作用相同d诱导融合的手段相同诱导融合的手段相同四、单克隆抗体四、单克隆抗体什么是抗体？什么是抗体？ 抗体是机体受抗原刺激后产生抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。具有免疫功能的球蛋白。b淋巴细胞产生抗体。淋巴细胞产生抗体。如何理解单克隆抗体？如何理解单克隆抗体？单单: 单个细胞单个细胞克隆克隆: 无性繁殖无性繁殖抗体抗体: 化学性质单一、特异

23、性强的球蛋白化学性质单一、特异性强的球蛋白1.其由何种细胞产生？其由何种细胞产生？2.主要分布在哪里？主要分布在哪里？3.如何得到抗体？如何得到抗体？提提问问？读下面一段文字资料，思考以下问题：读下面一段文字资料，思考以下问题：长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种抗原反复注长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体的方射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。用这种方法获得的抗体，不仅产量低，而且抗体的法。用这种方法获得的抗体，不仅产量低，而且抗体的特异性差，纯度低，反应不够灵敏。人们发现，在动物特异性差，纯度低，反应不够灵敏。人们

24、发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的发生免疫反应的过程中，体内的b细胞可以产生多达百细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个万种以上的特异性抗体，但是每个b细胞只分泌一种化细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个体，必须用单个b细胞进行无性繁殖，即克隆。细胞进行无性繁殖，即克隆。怎样才能获得单克隆抗体？怎样才能获得单克隆抗体？仅用细胞培养技术可行吗？仅用细胞培养技术可行吗？我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？有什么方法能使有什么方法能使b细胞产生抗体的能力和肿瘤

25、细胞细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？无限增殖能力同时具备呢？n原始的方法原始的方法获得抗体，特异性差，纯度低。n想获得单一抗体想获得单一抗体，必须用单个b淋巴细胞进行无性繁殖，通过克隆形成细胞群。n问题：问题：体外培养的条件下，一个b淋巴细胞是不可能无限增值的，如何使单个淋巴细胞增殖呢？n实验目的:制备单克隆抗体.n实验原理：b淋巴细胞能产生抗体，骨髓瘤细胞能无限增殖，杂交瘤细胞既能产生抗体又能无限增殖。n实验材料：小白鼠n实验器材：培养皿、针筒等等。n实验过程：如下页设计方案：设计方案： 一个一个b b淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞

26、能无限增殖小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖杂种细胞杂种细胞b淋巴细胞与抗体淋巴细胞与抗体b淋巴细胞受抗原刺激后，可以淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。产生抗体。动物体内的动物体内的b淋巴细胞可以产生淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。原具有特异性免疫作用。每一个淋巴细胞只能产生一种抗每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。体。如何大量生产单克隆抗体？如何大量生产单克隆抗体？n利用淋巴细胞产生抗体的功能利用淋巴细胞产生抗体的功能n利用肿瘤细胞无限增殖的特性利用肿瘤细胞无限增殖的特性n利用细胞融合的技术将两种细胞融合利用细胞融合的技术将两

27、种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞杂交瘤细胞n利用动物细胞培养技术大量培养杂交利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞瘤细胞思考：思考：1、本过程利用了哪些原理？、本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与b细胞融合？细胞融合？（小鼠骨髓瘤细胞可以在体外培养条件下大量增殖，（小鼠骨髓瘤细胞可以在体外培养条件下大量增殖，b淋巴细胞能够产生淋巴细胞能够产生抗体，细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活。）抗体，细胞的同源性越近，融

28、合形成的杂种细胞越易成活。）（3 3）杂交瘤细胞有何特性？杂交瘤细胞有何特性？（4 4）骨髓瘤细胞是癌细胞吗）骨髓瘤细胞是癌细胞吗? ?（有无限增殖能力（失去凋亡机制，失去接触（有无限增殖能力（失去凋亡机制，失去接触抑制等）的细胞是肿瘤细胞，而具有转移能力抑制等）的细胞是肿瘤细胞，而具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞，所以说，瘤细胞不的肿瘤细胞，称为癌细胞，所以说，瘤细胞不能等于癌细胞。）能等于癌细胞。）这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有胞的遗传物质，不仅具有b细胞分泌抗体的细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可能力，而且

29、还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体以获得大量单克隆抗体b bb b瘤瘤 瘤瘤瘤瘤 瘤瘤（5）细胞融合后培养液中有几种细胞（两两结合）细胞融合后培养液中有几种细胞（两两结合）筛选杂种筛选杂种细胞细胞已知细胞合成已知细胞合成dna有有d和和s两条途径，其中两条途径，其中d途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两条两条dna合成途径，但一般不分裂增值。鼠合成途径，但一般不分裂增值。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有骨髓瘤细胞中尽管没有s途径，但能不断分途径，但能不断分裂增值，将这两种细胞在试管中混合，加裂增值，将这两种细胞在试管中混合，加peg促融，获得杂种细胞

30、。促融，获得杂种细胞。（6 6）整个制备过程为何要经过两次筛选）整个制备过程为何要经过两次筛选? ?（第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），（第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆单

31、克隆确有确有单个细胞单个细胞克隆的含义，只不过克隆的克隆的含义，只不过克隆的不是不是b b淋巴细胞，而是淋巴细胞，而是杂交瘤细胞杂交瘤细胞。）。） 单克隆抗体的应用：单克隆抗体的应用： 在基础理论研究中具有重要意义在基础理论研究中具有重要意义 在疾病诊断、治疗和预防方面，具有在疾病诊断、治疗和预防方面，具有特异性高、灵敏度高等优越性。特异性高、灵敏度高等优越性。生物导弹生物导弹与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，灵敏度高，优越性十分明特异性强，灵敏度高，优越性十分明显显。一种诱导细胞融合的新方法一种诱导细胞融合的新方法一种新细胞一种新细胞灭活病毒灭活病

32、毒杂交瘤细胞杂交瘤细胞一个优势一个优势单克隆抗体特异性强、单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势灵敏度高的优势总结总结两个过程两个过程动物细胞培养过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程三个三个“一一”一个诱导细胞融合的新方法一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒灭活病毒一个新细胞杂交瘤细胞一个新细胞杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性一个优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势强、灵敏度高的优势 1、下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌、下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的抗体实验方案的抗体实验方案2、该方案能达到预期效果吗？为什么？、该方案能达到

33、预期效果吗？为什么？4、图中、图中b为为_过程，常用过程，常用_作为诱导剂，该细胞继作为诱导剂，该细胞继承承_的遗传特性，既能的遗传特性，既能_,又能又能_。1、该实验方案的目的是、该实验方案的目的是_3、a是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生该细胞能够产生_5、c过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞培养，该过程包括_培养和培养和_培养两个阶段，其培养两个阶段，其中中_代以内的的细胞属于细胞株。代以内的的细胞属于细胞株。制备单克隆抗体制备单克隆抗体b细胞细胞抗体抗体细胞融合细胞融合灭活病毒灭活病毒双亲细胞双亲细胞分泌抗体分泌抗体无限增殖无限增殖原代原代传代传代50b体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹