氨基酸含量的测定-茚三酮比色法ppt课件

1、实验九实验九 氨基酸含量的测定氨基酸含量的测定茚三酮比色法茚三酮比色法1. 实验原理实验原理 凡含有自在氨基的化合物，如蛋白质、多肽、凡含有自在氨基的化合物，如蛋白质、多肽、氨基酸脯氨酸除外在碱性溶液中与水合茚三氨基酸脯氨酸除外在碱性溶液中与水合茚三酮共热时，产生紫色化合物，最大吸收波长在酮共热时，产生紫色化合物，最大吸收波长在570nm处，在一定浓度范围内，颜色深浅与氨基处，在一定浓度范围内，颜色深浅与氨基酸含量成正比，可用比色法进展测定。酸含量成正比，可用比色法进展测定。 氨基酸与茚三酮的反响分两个步骤：氨基酸与茚三酮的反响分两个步骤：2. 实验资料、仪器与试剂实验资料、仪器与试剂资料：酱

2、油资料：酱油仪器：可见分光光度计，分析天平，容量仪器：可见分光光度计，分析天平，容量瓶，移液管，具塞刻度试管。瓶，移液管，具塞刻度试管。试剂：茚三酮、氯化亚锡、磷酸二氢钾、试剂：茚三酮、氯化亚锡、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、规范氨基酸异亮氨酸。磷酸氢二钠、规范氨基酸异亮氨酸。3. 实验步骤实验步骤1样品的处置：准确汲取样品的处置：准确汲取0.5mL酱油于酱油于100mL烧杯中，参与烧杯中，参与5g活性炭和活性炭和50mL蒸馏水，置于蒸馏水，置于80水浴锅中，坚持半小时后过滤，用蒸馏水将滤渣水浴锅中，坚持半小时后过滤，用蒸馏水将滤渣清洗数遍，搜集滤液于清洗数遍，搜集滤液于100mL容量瓶中，定容至容

3、量瓶中，定容至刻线，摇匀备用。刻线，摇匀备用。各种试剂加到比色管后混匀，于电炉上沸水浴各种试剂加到比色管后混匀，于电炉上沸水浴15min，取出冷却至室，取出冷却至室温后加水至温后加水至10mL刻度线，静置刻度线，静置15min后，在后，在570nm处测定吸光度，处测定吸光度，以氨基酸含量以氨基酸含量(g)为横坐标，吸光度为纵坐标绘制规范曲线。为横坐标，吸光度为纵坐标绘制规范曲线。2规范曲线的绘制规范曲线的绘制管号管号1234567氨基酸规范溶液氨基酸规范溶液/mL00.50.60.70.80.91.0水水/mL1.61.11.00.90.80.70.6磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液/mL0.40.4

4、0.40.40.40.40.4茚三酮茚三酮/mL0.40.40.40.40.40.40.4氨基酸含量氨基酸含量/g0100120140160180200 按上表加样后混匀，按规范曲线的步骤进展按上表加样后混匀，按规范曲线的步骤进展实验，在一样条件下测定样品的吸光度，并在规实验，在一样条件下测定样品的吸光度，并在规范曲线上查出氨基酸含量微克数。范曲线上查出氨基酸含量微克数。3样品测定样品测定管号管号891011样品溶液样品溶液/mL00.50.50.5水水/mL1.61.11.11.1磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液/mL0.40.40.40.4茚三酮茚三酮/mL0.40.40.40.44. 结果计算结

5、果计算5. 阐明及本卷须知阐明及本卷须知1该法是微量法，对氨基酸的最低检出量可该法是微量法，对氨基酸的最低检出量可达达0.5g，其其灵敏度高，重现性好。，其其灵敏度高，重现性好。2脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反响呈黄色，脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反响呈黄色，最大吸收波长在最大吸收波长在440nm处。处。3通常采用的样品处置方法为：准确称取粉碎通常采用的样品处置方法为：准确称取粉碎后的样品后的样品5g10g或汲取液体样品或汲取液体样品5mL10mL，置于烧杯中，参与置于烧杯中，参与50mL蒸馏水和蒸馏水和5g左右的活性炭，左右的活性炭，加热煮沸，过滤。用加热煮沸，过滤。用30mL40mL热水洗涤活性热水洗涤活性炭，搜集滤液于炭，搜集滤液于100mL容量瓶中，加水至刻度线，容量瓶中，加水至刻度线，摇匀备用。摇匀备用。6. 思索题思