食品中有毒有害物质的分析(2)ppt课件

1、食品中有毒有害物质的分析食品中有毒有害物质的分析气相色谱气相色谱/质谱联用技术和液相色谱的运用质谱联用技术和液相色谱的运用1，饲料中-兴奋剂盐酸克仑特罗的分析2. NDMA N-亚硝胺的测定3. 海产品中的药物残留的分析4. 酱油中的氯丙醇的分析GC/MSD 或 HPLC-UV法饲料中盐酸克仑特罗(Clenbuterol)的测定盐酸克仑特罗(Clenbuterol) 盐酸克仑特罗是一种肾上腺素兴奋剂，主要用于防治人，畜支气管哮喘和支气管痙挛，治疗剂量较低。 在饲料中添加盐酸克仑特罗具有营养再分配作用，提高饲料报酬，提高瘦肉率的效果。 盐酸克仑特罗在肌肉特别是在内脏中会有高浓度的残留，对人与动物

2、的肝，肾及神经系统产生危害。 欧盟最早公布法规制止其作为饲料添加剂运用，美国和加拿大也禁用，我国农业部亦发文作出同样规定。盐酸克仑特罗CHOHCH2NHC(CH3)3 HClNH2ClCl白色结晶粉末，可从SIGMA 公司购买，可溶于水。GC/MSD 方法样品中的盐酸克仑特罗经提取，净化，衍生化，采用AGILENT5973N GC/MSD SCAN 方式进展测定，外标法定量。方法回收率为92%-99%， 检出限为低于0.2 ppm。样品处置样品处置提取：提取：饲料样品10克加50ml 0.01mol/L HCl溶液超声清洗器萃取30min,离心10 min上清液如有必要，反复一次样品处置样品处

3、置净化净化上清液加2.0 ml 5 mol/L NaOH溶液，参与10 ml 氯仿,振荡萃取。60水浴中真空蒸发氮气吹干反复二次衍生化加 1.0 ml氯仿溶解，再参与 0.1ml乙酸酐衍生试剂。氮气吹干，加0.5 ml 氯仿溶解色谱与质谱条件色谱与质谱条件色谱条件：色谱条件：HP5MS 30m X 0.25mm X 0.25um 进样口：进样口：250，不分流，进样量，不分流，进样量2ul， 柱温：柱温：1203min20/min 220 10 min) 质谱条件：质谱条件：EI源，接口温度源，接口温度280 ，质量扫描范围，质量扫描范围50500AMU 溶剂延迟：溶剂延迟：3min。Clen

4、buterol 的规范质谱图的规范质谱图HPLC 法法采用反相高效液相色谱法用水相和有机相二次提取饲料中的盐酸克仑特罗，可减少饲料中杂质的干扰。UV检测器，C18柱回收率在8595，检出限 提高选择性和灵敏度提高选择性和灵敏度20 attograms / ul of Octafluoronaphthaleneacquired using LVI with ECNI MS on 5973(44,000 molecules / ul )3333PCI+SIM +LVI PCI+SIM +LVI 技术分析技术分析NDMANDMA20 fg/uL20 fg/uL200 fg/uL200 fg/uLPC

5、I-NH3-SIM chromatograms PCI-NH3-SIM chromatograms of 50 uL injections of NDMA of 50 uL injections of NDMA standards in CH2Cl2 . standards in CH2Cl2 . Applying a concentration & recovery Applying a concentration & recovery factor of 500,factor of 500, 200 fg/ul = 0.4ng/l (0.4 ppt) 200 fg/ul =

6、 0.4ng/l (0.4 ppt) 20 fg/ul = 0.04ng/l (40 ppq)20 fg/ul = 0.04ng/l (40 ppq)3434NDMANDMA分析的线性及重现性分析的线性及重现性NDMA quantitation curve from 20 fg/ul to 4000 fg/ulr2 =0.999ConcentrationRSD Ratio 75/92 RSD Response (Area)202.9%2.4%402.2%3.2%2000.7%0.8%20000.7%1.7%40000.3%0.9%Reproducibility in 75/92 m/z rat

7、io and response (n=5)Reproducibility in 75/92 m/z ratio and response (n=5)for concentrations of NDMA from 20 to 4000 fg/ulfor concentrations of NDMA from 20 to 4000 fg/ul3535结论结论 Apex ProSep Preseparation Inlet Behaves as a Chromatographic Zone Inlet SystemBehaves as a Chromatographic Zone Inlet Sys

8、tem Performs separations in Large Volume Inlet modesPerforms separations in Large Volume Inlet modes Increased analytical integrity, lowered column and detector maintenance, etc.Increased analytical integrity, lowered column and detector maintenance, etc. Work with authentic samples and a wide varie

9、ty of matrices Work with authentic samples and a wide variety of matrices has shown the ProSep to be very reproducible and robust. has shown the ProSep to be very reproducible and robust. Injection (1 to 125 ul) is rapid so sample throughput is high. Injection (1 to 125 ul) is rapid so sample throug

10、hput is high. 3636水产品中土霉素、四环素、金霉素残留量水产品中土霉素、四环素、金霉素残留量的测定方法的测定方法本方法为HPLC方法，最低检出浓度为0.05mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg。原理： 样品经提取，SPE纯化，微孔膜过滤，直接进样，用反相色谱分别，UV检测，外表法定量。出峰顺序为土霉素、四环素、金霉素。样品预处置样品预处置，称取称取5.00g肉样于肉样于50ml离心管中离心管中参与5高氯酸溶液20ml，匀浆10分钟，振荡提取10分钟，以4000r/min离心10分钟，取上清液用0.45um滤膜过滤,在离心管残渣中再参与5%高氯酸溶液10ml,反复操作

11、一次,合并.上清液上清液上清液上清液过Sep-C8柱(10ml甲醇、10ml 15EDTA2Na溶液、20ml蒸馏水活化过30ml蒸馏水洗去杂质，10ml甲醇洗脱洗脱液洗脱液40水浴中氮气吹，浓缩至1ml0.45um滤膜过滤样品溶液样品溶液分析条件分析条件仪器条件：仪器条件：HP1100 UV 检测器检测器色谱条件：柱色谱条件：柱ZOBRBAX SB18，4.6mm X 250mm,ODS-C18(HP) 检测波长检测波长:355nm 柱温柱温:37 流速流速:0.8ml/min 进样量进样量: 30ul 流动相流动相: 乙晴乙晴/0.01M/磷酸二氢钠溶液磷酸二氢钠溶液(用磷酸调理用磷酸调理

12、pH2.5) 26:74 (V/V)酸水解植物蛋白调味液中三氯丙醇的测定酸水解植物蛋白调味液中三氯丙醇的测定1. 三氯丙醇问题的提出: - 1988年Velisek等在酱油中发现一种有机成分-氯丙醇以来, 引起了食品学界的高度注重. - 1991年Collier等对氯丙醇的构成机理做了进一步的研讨; - 1993年世界卫生组织对氯丙醇的毒性提出了警告; - 1995年欧共体委员会食品科学分(ECSCFF)对氯丙醇的毒理作了 评价,并指出氯丙醇作为一种致癌物,其最低阀值应为不检出为宜.2.氯丙醇的来源氯丙醇的来源一一.脂质脂质: 蛋白质水解可用酸水解和碱水解蛋白质水解可用酸水解和碱水解,但是碱水

13、解会引起精氨酸、胱但是碱水解会引起精氨酸、胱氨酸及部分赖氨酸被破坏，因此工业上是采取浓盐酸水解植物蛋白质氨酸及部分赖氨酸被破坏，因此工业上是采取浓盐酸水解植物蛋白质或动物蛋白质的方法来消费的。在原料植物或动物蛋白质的方法来消费的。在原料植物/动物蛋白质中有脂质动物蛋白质中有脂质,主主要有三酰甘油酯类和甘油磷酯类要有三酰甘油酯类和甘油磷酯类,而这些脂质在浓盐酸中会发生水解而这些脂质在浓盐酸中会发生水解反响反响,产生氯丙醇产生氯丙醇.二二.某些环氧树脂某些环氧树脂: 以表氯丙醇为单体制成的环氧树脂已广泛地运用在涂料以表氯丙醇为单体制成的环氧树脂已广泛地运用在涂料,粘结剂及粘结剂及乙烯树脂的稳定剂乙

14、烯树脂的稳定剂,环氧树脂是目前食品工业中的主要包装资料之一环氧树脂是目前食品工业中的主要包装资料之一,而表氯丙醇可水解为而表氯丙醇可水解为3-氯丙醇氯丙醇.三三.其他来源其他来源: 袋泡茶的包装袋袋泡茶的包装袋;以含氯的凝聚剂作为水的净化剂以含氯的凝聚剂作为水的净化剂;以以3-氯氯-1,2-环丙烷来环丙烷来加工的变性淀粉加工的变性淀粉.酸水解植物蛋白调味液中三氯丙醇的测定酸水解植物蛋白调味液中三氯丙醇的测定 国别 资料来源 1,3-二氯-2-丙醇 2,3-二氯-1-丙醇 2-氯-1,3-丙醇 3-氯1,2 丙醇 德国规范 SKS 0.05ppm 0.1 ppm 未提及 0.05ppm美国食品

15、FCC 0.05ppm 未提及 未提及 1ppm用化学品法规(FCC) 英国食品 FAC 0.05ppm 未提及 未提及 0.01ppm 顾问委员会FAC瑞士 0.05ppm 未提及 未提及 10ppm 中国 未提及 未提及 未提及 1ppm* 部分国家对部分国家对3-氯丙醇的限量氯丙醇的限量酱油中酱油中3-氯丙醇的分析方法氯丙醇的分析方法 酱油是微生物发酵产物，成分很复杂，国外普遍采用毛细管色谱法进展测定，即使这样也会由于分别效果不好而影响分析结果的可靠性。经过研讨发现，将样品用苯基硼酸衍生化处置，转化为易挥发的物质，正己烷抽提后，用气相色谱-质谱联用仪的选择离子监测方法测定，提高了分辨率，

16、且干扰少，灵敏度高，操作简单，结果准确可靠。实验部分实验部分1.试剂衍生化试剂配制：称取10g苯基硼酸，溶于38ml丙酮和2ml蒸馏水的混合液中。规范试剂配制：称取25mg 3-氯-1，2-丙二醇，用200g/L NaCl溶液定容至250ml，得到100mg/L的规范溶液。然后分别移取0.1ml，1ml，10ml至100ml容量瓶中，用200g/L NaCl溶液定容至刻度，即得0.1，1，10mg/L规范溶液。 苯基硼酸，丙酮，正己烷，氯化钠均为分析纯。 取样品或规范溶液取样品或规范溶液5.0ml 置于置于10ml 带塞试管中，参与带塞试管中，参与1.0ml 衍生化衍生化试剂，摇匀后，置于试剂

17、，摇匀后，置于90恒温箱中反响恒温箱中反响20 min，停顿加热，停顿加热，冷却后冷却后参与参与3.0ml 正己烷，强力振荡正己烷，强力振荡1min，离心，取上层清夜进展，离心，取上层清夜进展GC/MS分析。分析。2样品衍生化处置样品衍生化处置 气相色谱：HP6890气相色谱，HP-1的30m250m0.1m石英毛细管柱，载气为高纯氦气，柱温100，升温速率15/min升至250，进样口温度250，柱前压50Kpa。 质谱：HP5973 GC/MS气相色谱-质谱联用仪，EI离子源，电子能量70 eV，离子源温度230，四极杆温度150，接口温度280，电子倍增器电压2100 V，检测方式SIM

18、监测离子 m/z 147。气相色谱气相色谱-质谱测定条质谱测定条件件 3-CPD产活力理：在酸水解法消费酱油的过程中，植物蛋白酸产活力理：在酸水解法消费酱油的过程中，植物蛋白酸水解时伴随发生脂肪水解而产生丙三醇，丙三醇在盐酸作用下水解时伴随发生脂肪水解而产生丙三醇，丙三醇在盐酸作用下继续反响构成继续反响构成3-氯氯-1，2-丙二醇丙二醇 植物蛋白植物蛋白 3.结果与讨论结果与讨论HClCH2CHCH2OHOHOHHClOHOH2CHCH2CHCl按上述实验条件分别进展规范溶液及样品溶液分析，以外标法计算3-CPD含量。3-氯-1，2-丙二醇苯基硼酸衍生物的质谱图见图1。其基峰为m/z 147。

19、我们选择m/z 147进展SIM法，可获得称心的分别效果，其色谱总离子流图见图，保管时间为3.31min 的峰即为3-氯-1，2-丙二醇苯基硼酸衍生物。我们分析了几种市面上的国产酱油，测定结果见表。可以看出，大部分酱油的3-CPD含量大大高于1.010-6，严重影响人体安康。样品称号 3-CPD含量(/10-6)样品称号 3-CPD含量(/10-6) 生抽A 0.4 老抽A 0.5 生抽B 82.5 老抽B 125.8 生抽C 220.7 老抽C 158.5405060708090100110120130140150160170180190200210020000400006000080000100000120000140000160000180000200000220000240000260000m/z-AbundanceScan 1156 (3.255 min): 071718.D (-)14791104196775143117631311591391781672081883-氯氯-1，2-丙二醇苯基硼酸衍