刘秀梵我国新城疫的防控实践和基因VII型新城疫疫苗的研发116-2

1、我国新城疫的防控实践和我国新城疫的防控实践和基因基因VIIVII型新城疫疫苗的研发型新城疫疫苗的研发 刘秀梵刘秀梵 扬州大学扬州大学 兽医学院兽医学院新城疫是新城疫是国家中长期动物疫国家中长期动物疫病防治规划（病防治规划（2012-20202012-2020）优先防治的优先防治的5 5种一类动物疫病种一类动物疫病之一，在我国也是使用疫苗频之一，在我国也是使用疫苗频率最高的动物疫病。率最高的动物疫病。 一、一、NDND流行病学研究和我国流行病学研究和我国 的防控实践的防控实践19261926年年 最早发现于印尼爪哇和英国新城最早发现于印尼爪哇和英国新城19281928年年 我国最早有疑似病例报告

2、我国最早有疑似病例报告19461946年年 梁英和马闻天首次分离鉴定梁英和马闻天首次分离鉴定NDVNDV强毒（强毒（F48F48）19501950年代年代 引进引进NDVNDV疫苗毒：疫苗毒：MakteswarMakteswar, B1, F, B1, F和和 LaSotaLaSota株（株（I I、 IIII、 IIIIII、IVIV系）系）后来后来 又引进其他又引进其他NDVNDV疫苗毒，如疫苗毒，如V4 V4 株等。株等。 新城疫（新城疫（ ND ND）次数次数持续时间持续时间流行毒株的基因型流行毒株的基因型第一次第一次19201920年代年代- -19601960年前年前基因基因III

3、I、IIIIII、IVIV型（早期基因型）型（早期基因型）第二次第二次19601960年代年代- -19701970年代初年代初基因基因V V和和VIVI（晚期基因型）（晚期基因型）第三次第三次19701970年代后期年代后期- -19801980年代前期年代前期基因基因VIbVIb亚型（晚期基因型）亚型（晚期基因型）第四次第四次19801980年代后期年代后期至今至今基因基因VIIVII型（晚期基因型）型（晚期基因型）新城疫的四次大流行新城疫的四次大流行分子流行病学研究分子流行病学研究 近近2020年来新城疫在我国家禽年来新城疫在我国家禽中流行的特点主要表现为免疫鸡中流行的特点主要表现为免疫

4、鸡群中常发生群中常发生非典型新城疫非典型新城疫和对家和对家养水禽的毒力增强养水禽的毒力增强在鹅引起在鹅引起严重临床疾病。严重临床疾病。这两个流行特点这两个流行特点都与新出现的基因都与新出现的基因VIIVII型病毒有型病毒有关。关。19971997年前后在中国出现鹅大批发病的新传染病年前后在中国出现鹅大批发病的新传染病- -鹅副粘病毒病。鹅副粘病毒病。 * *确定鹅副粘病毒病是由基因确定鹅副粘病毒病是由基因VIIVII型病毒引起的，是鹅的型病毒引起的，是鹅的NDND； * *确定近年来我国鹅群和鸡群流行的确定近年来我国鹅群和鸡群流行的NDVNDV强毒强毒95%95%以上是基因以上是基因 VIId

5、VIId亚型；亚型； * *确定从鹅分离到的和从鸡分离到的基因确定从鹅分离到的和从鸡分离到的基因VIIdVIId亚型病毒没有亚型病毒没有 宿主特异性和致病差异，可以交叉感染发病，互相传播；宿主特异性和致病差异，可以交叉感染发病，互相传播； * *常规常规NDND疫苗对鹅的疫苗对鹅的NDND保护性差保护性差，而用分离的野毒（基因，而用分离的野毒（基因 VIIdVIId亚型）制成的自家疫苗效果较好，但存在散毒风险。亚型）制成的自家疫苗效果较好，但存在散毒风险。 Liu X F et al. Arch Virol, 2003; Wan H et al. Avian Pathol, 2004; Hua

6、ng Y et al. Arch Virol, 2004; Wang Y et al. Virol J ,2012免疫鸡群中的非典型免疫鸡群中的非典型NDND，自，自1980-19901980-1990年代以来就普遍发生，年代以来就普遍发生，而分离到的而分离到的NDVNDV也都是基因也都是基因VIIdVIId亚型。亚型。问题问题1 1：新城疫病毒只有一个血：新城疫病毒只有一个血 清型常规的疫苗还能不清型常规的疫苗还能不 能对流行强毒提供有效能对流行强毒提供有效 保护？保护？ 疫苗免疫保护的疫苗免疫保护的3 3个水平：个水平：1.1.保护不发生死亡，但有部分有临床症状，保护不发生死亡，但有部分有

7、临床症状， 带毒排毒严重；带毒排毒严重；2.2.保护不发生死亡，也不出现任何临床症保护不发生死亡，也不出现任何临床症 状，一定比例的短时间有带毒、排毒；状，一定比例的短时间有带毒、排毒；3.3.保护不发生死亡，也不出现任何临床症保护不发生死亡，也不出现任何临床症 状（包括产蛋下降），很少排毒。状（包括产蛋下降），很少排毒。这是一个有争议的问题，经过全世界科学界和这是一个有争议的问题，经过全世界科学界和产业界近产业界近3030年的努力，现在已基本搞清楚了。年的努力，现在已基本搞清楚了。Cross-protection efficacy in chickens immunized with the

8、 LaSota vaccine after challenge with virulent strains of different genotypes(From Qin et al. J clin Microbiol , 2008) 实验室研究和现场观察表明，一般情况实验室研究和现场观察表明，一般情况下，常规疫苗免疫后中等水平抗体（下，常规疫苗免疫后中等水平抗体（HI 6-8 HI 6-8 log2log2）只能达到第一种保护水平，高抗体水）只能达到第一种保护水平，高抗体水平（平（HI 9 log2HI 9 log2以上）可达到第二种保护水以上）可达到第二种保护水平，但达不到第三种保护水平。

9、平，但达不到第三种保护水平。在第一种保护水平情况下，在第一种保护水平情况下，就发生所谓的非典型新城疫。就发生所谓的非典型新城疫。 为了保护不发生死亡也不出现包括为了保护不发生死亡也不出现包括产蛋下降在内的临床症状，自产蛋下降在内的临床症状，自19801980年代年代以来，我国的规模化的鸡场就采用的对以来，我国的规模化的鸡场就采用的对NDND的的高频率密集型免疫程序高频率密集型免疫程序。 种鸡和蛋鸡一生接种种鸡和蛋鸡一生接种NDND疫苗疫苗在在1010次次甚至甚至2020次以上，但即使这样，免疫鸡群次以上，但即使这样，免疫鸡群仍频繁发生非典型仍频繁发生非典型NDND。因此，常规疫苗。因此，常规疫

10、苗对流行的基因对流行的基因VIIVII型已不能提供有效保型已不能提供有效保护。护。问题问题2 2：为什么常规疫苗不能提供：为什么常规疫苗不能提供 对基因对基因VIIVII型型NDVNDV强毒的有强毒的有 效保护？效保护？1 1、基因型差异基因型差异：常规疫苗为基因：常规疫苗为基因I I、IIII、IIIIII型，属早期基因型，而当前优型，属早期基因型，而当前优势流行株为基因势流行株为基因VIIVII型，属晚期基因型，型，属晚期基因型，遗传差异大；遗传差异大；2 2、抗原差异性、抗原差异性：交叉血凝抑制和病毒：交叉血凝抑制和病毒中和试验证明，疫苗毒和基因中和试验证明，疫苗毒和基因VIIVII型流

11、型流行毒之间抗原性有显著差异（行毒之间抗原性有显著差异（R R0.20.2）；）； 基因型基因型IIIVIVIIcVIIdReference数数量量13164Liu H et al. J Virol Methods，2007277Liu H et al. Res Vet Sci, 200813Rui ZP et al. Vet Microbiol, 20093W etal. Virus Gene, 20102457Wu X et al. Arch Virol, 201148Zhu J et al. 2013总计总计571262275(其中其中VII型毒株型毒株263)2006年来我国年来我国N

12、DV强毒分离株的基因型分布强毒分离株的基因型分布 进一步分析显示，进一步分析显示，2006年至年至2013年间共报道分离新城疫强毒年间共报道分离新城疫强毒216株，其中株，其中VII型毒株型毒株206株，占到了分离株的株，占到了分离株的96%左右，表明基因左右，表明基因VII型毒株的分离率正呈上型毒株的分离率正呈上升趋势升趋势。NDV流行株与常规疫苗株的遗传关系流行株与常规疫苗株的遗传关系 基因基因VIIdVIId亚型亚型NDVNDV分离株与分离株与IIII型型疫苗株的遗传关系较远。疫苗株的遗传关系较远。基因基因FHN同源性同源性84.1%84.4%78.7%83.0% a Not teste

13、d b R value = 头头 当当R值值120h0.3108.810log2E5120h0.16109.1711log2E10120h0.22109.311log2E15120h0.17108.810log2重组病毒重组病毒A-VIIA-VII生物学特性的鉴定生物学特性的鉴定 根据根据ICPIICPI和和MDT MDT 指标，指标，A-VIIA-VII株的毒力比株的毒力比La La SotaSota低，用作疫苗毒株低，用作疫苗毒株安安全全性好。性好。以以鸡胚繁殖病毒，尿囊液中鸡胚繁殖病毒，尿囊液中A-VIIA-VII株的株的HAHA10log210log2。免疫后不同时间抗体免疫后不同时间

14、抗体HI效价上升曲线效价上升曲线均以自身免疫毒株作为均以自身免疫毒株作为4单位病毒单位病毒 效检试验结果显示，致弱株效检试验结果显示，致弱株A-VII免疫原性强，其灭活苗以较低剂量免疫原性强，其灭活苗以较低剂量（20ul）免疫）免疫SPF鸡时即可产生高滴度的鸡时即可产生高滴度的HI抗体，且其诱导抗体产生的速抗体，且其诱导抗体产生的速度较度较LaSota快。快。0 02 24 46 68 810107 7天天1414天天2121天天HI效价效价(log2)A-VII-kA-VII-kLaSota-kLaSota-kImmune efficacy of NDV/A-VII in chickensF

15、requency of isolation of challenge virus in commercial chickensa C: challenged with 105 ELD50 JS2/06.bO: Oropharyngeal swabs.cC: Cloacal swabs.dNS: no survivors.(A) Mean virus titers of oropharyngeal swabs of immunized groups on all sampling days. (B) Comparison of oropharyngeal virus titers at 2 da

16、y post-challenge. (A) Mean virus titers of cloacal swabs of immunized groups on all sampling days. (B) Comparison of cloacal virus titers at 4 day post-challenge. * * A-VII A-VII株的株的MDTMDT120h120h，ICPIICPI0.30.3，毒力比，毒力比LaSotaLaSota低；低；* * A-VII A-VII株在鸡胚上毒价高达株在鸡胚上毒价高达10109.39.3EIDEID5050/0.1mL/0.1mL

17、，HA10log2HA10log2；* * A-VII A-VII株与流行株完全匹配，免疫原性很强，产生的株与流行株完全匹配，免疫原性很强，产生的HI HI 抗体比抗体比LaSotaLaSota高高2-3 log22-3 log2，抗体上升提前，抗体上升提前1 1星期，减少星期，减少 排毒滴度比排毒滴度比LaSotaLaSota低低10-10010-100倍；倍；* * A-VII A-VII株的论文株的论文20092009年在国际年在国际疫苗（疫苗（VaccineVaccine） 杂杂 志发表。志发表。OIEOIE出版的出版的 陆生动物诊断试验和疫苗手册陆生动物诊断试验和疫苗手册 连续连续5

18、 5年引用。年引用。A-VIIA-VII株种毒的优良特性株种毒的优良特性 中间试制、临床试验中间试制、临床试验 和新制品的注册申报阶段和新制品的注册申报阶段*2009年年2011年完成重组新城疫病毒（年完成重组新城疫病毒（A-VII株）灭株）灭 活疫苗中间试制、质量研究，申请临床试验；活疫苗中间试制、质量研究，申请临床试验；* 2010年年9月月8日日基因基因VII型新城疫病毒致弱株型新城疫病毒致弱株A-新新城城 疫病毒疫病毒-VII及其构建方法及其构建方法获国家发明专利授权；获国家发明专利授权；*2011年年2012年获得农业部临床试验批件，进入临床年获得农业部临床试验批件，进入临床 试验执

19、行期；试验执行期；*2013年年2014年完成新兽药注册初审；年完成新兽药注册初审；2014年完成新年完成新 兽药注册质量复核、复审；兽药注册质量复核、复审；*2014年年11月月17日获得国家一类新兽药注册证书。日获得国家一类新兽药注册证书。 该疫苗具有与当前新城疫病毒优势流行株匹配性该疫苗具有与当前新城疫病毒优势流行株匹配性 好的优点，不仅可用于鸡，还可用于鹅和其他禽好的优点，不仅可用于鸡，还可用于鹅和其他禽 类，是第一个有效防控鹅新城疫的疫苗；类，是第一个有效防控鹅新城疫的疫苗； 与常规疫苗相比，不仅提供死亡保护，而且提供与常规疫苗相比，不仅提供死亡保护，而且提供 有效的临床保护和防止传播；有效的临床保护和防止传播； 与常规疫苗相比，免疫原性强，产生的抗体滴度与常规疫苗相比，免疫原性强，产生的抗体滴度 高，产生时间快，能有效降低强毒攻击后的病毒高，产生时间快，能有效降低强毒攻击后的病毒 载量和排毒率；载量和排毒率； 与常规疫苗相比，能有效控制免疫鸡群中的非典与常规疫苗相比，能有效控制免疫鸡群中的非典 型新城疫。型新城疫。2 2、