精品细菌与病毒的病原学检查法ppt

1、第七章第七章 细菌与病毒的病原学检查法细菌与病毒的病原学检查法诊断方法：诊断方法：l形态学检查形态学检查l分离培养和鉴定分离培养和鉴定l检测抗原检测抗原l检查基因序列检查基因序列l检测抗体检测抗体标本的采集与运送：标本的采集与运送：l无菌操作无菌操作l部位部位l时间时间l用抗生素前用抗生素前l双份血清：急性期、恢复期双份血清：急性期、恢复期l尽快送检：冷藏运送、做好标记尽快送检：冷藏运送、做好标记第一节第一节 细菌感染的微生物学检查法细菌感染的微生物学检查法一、细菌学诊断一、细菌学诊断l形态学检查形态学检查1.普通光学显微镜检查法：普通光学显微镜检查法：2.暗视野显微镜检查法：检查活菌、暗视野

2、显微镜检查法：检查活菌、螺旋体及其动力螺旋体及其动力3.荧光显微镜检查法：荧光显微镜检查法：l病原菌的分离培养病原菌的分离培养l生化试验生化试验l血清学鉴定血清学鉴定:玻片凝集试验玻片凝集试验l动物实验：毒力、致病性动物实验：毒力、致病性l毒力检测：毒力检测：ld50、id50，毒素，毒素l药物敏感试验：纸片扩散法药物敏感试验：纸片扩散法二、检测病原菌成分二、检测病原菌成分l抗原检测：抗原检测：凝集试验、对流免疫电泳、酶免疫技术、免疫荧光技凝集试验、对流免疫电泳、酶免疫技术、免疫荧光技术术l核酸检测：核酸检测：1.核酸杂交技术核酸杂交技术:southern印迹杂交、印迹杂交、northern印

3、迹印迹杂交、原位杂交杂交、原位杂交2.pcr技术技术3.基因芯片基因芯片4.16rrna基因序列分析：编码基因序列分析：编码rrna，保守区、可变，保守区、可变区区三、抗体的检测（血清学诊断）三、抗体的检测（血清学诊断）u凝集试验：直接、间接、协同、冷凝集凝集试验：直接、间接、协同、冷凝集u沉淀试验：环状、絮状、双向、对流电泳沉淀试验：环状、絮状、双向、对流电泳u补体结合试验：补体结合试验：u酶联免疫吸附试验（酶联免疫吸附试验（elisa）：）：取双份血清，抗体效价比早期高取双份血清，抗体效价比早期高4倍以上有意倍以上有意义。义。第二节第二节 病毒感染的微生物学检查法病毒感染的微生物学检查法一

4、、形态学检查一、形态学检查1.电子显微镜检查电子显微镜检查l直接镜检法：直接镜检法：107颗粒颗粒/ml，电镜观察病毒，电镜观察病毒颗粒的形态和结构颗粒的形态和结构l免疫电镜法（免疫电镜法（iem）：）：标本标本+特异性抗体特异性抗体 病毒颗粒聚集病毒颗粒聚集 电镜电镜观察观察轮状病毒的粪便、轮状病毒的粪便、hav、hbv的血清、疱疹的血清、疱疹病毒的疱疹液，可早期诊断。病毒的疱疹液，可早期诊断。2.光学显微镜检查光学显微镜检查痘病毒、观察包涵体、痘病毒、观察包涵体、cpe二、病毒分离培养的方法二、病毒分离培养的方法1、动物接种、动物接种l 常用动物：小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、猴常用动物：小鼠、

5、大鼠、豚鼠、家兔、猴等；等；l接种途径：皮下、皮内、脑内、腹腔、静接种途径：皮下、皮内、脑内、腹腔、静脉等接种；脉等接种；l 观察：动物出现感染症状，取病变组织进观察：动物出现感染症状，取病变组织进一步检查一步检查2、鸡胚培养、鸡胚培养：孵化：孵化914天的鸡胚天的鸡胚l 接种途径有：绒毛尿囊膜、羊膜腔、尿囊接种途径有：绒毛尿囊膜、羊膜腔、尿囊腔、卵黄囊。腔、卵黄囊。l鉴定：血凝和血凝抑制试验鉴定：血凝和血凝抑制试验尿囊腔接种尿囊腔接种羊膜腔接种羊膜腔接种卵黄囊接种卵黄囊接种绒毛尿囊膜接种绒毛尿囊膜接种3、组织培养、组织培养器官培养、器官培养、组织培养、细胞培养组织培养、细胞培养细胞培养：细胞

6、培养：l单层细胞培养、悬浮细胞培养；单层细胞培养、悬浮细胞培养；l原代细胞培养原代细胞培养：由新鲜组织制备：由新鲜组织制备l二倍体细胞二倍体细胞：二倍体性质，传：二倍体性质，传4050代，人代，人胚肺成纤维细胞胚肺成纤维细胞l传代细胞系传代细胞系：由突变的二倍体细胞或肿瘤细：由突变的二倍体细胞或肿瘤细胞建立的，胞建立的，hela细胞细胞三、病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标三、病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标u细胞的变化：细胞的变化：cpeu红细胞吸附（红细胞吸附（had）：）：u红细胞凝集：红细胞凝集：u病毒干扰作用：风疹病毒，埃可病毒病毒干扰作用：风疹病毒，埃可病毒,vero细细胞。胞。u中和试

7、验（中和试验（nt）：）：是病毒在活体内或细胞培是病毒在活体内或细胞培养中被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验养中被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验u空斑形成试验：蚀斑形成单位（空斑形成试验：蚀斑形成单位（pfu），感染），感染性病毒的滴度用性病毒的滴度用pfu/ml表示。表示。四、病毒成分的检测四、病毒成分的检测病毒抗原的检测：病毒抗原的检测：hiv和和hbv抗原抗原病毒核酸的检测病毒核酸的检测 a b ca：未感染的成纤维细胞。：未感染的成纤维细胞。b：单纯疱疹病毒感染后使细胞变圆。：单纯疱疹病毒感染后使细胞变圆。c：呼吸道合胞病毒感染后出现细胞融合。：呼吸道合胞病毒感染后出现细胞融

8、合。五、病毒抗体的检测：五、病毒抗体的检测：l中和试验：中和试验：阳性：可能以前有过隐性感染，用于阳性：可能以前有过隐性感染，用于流行病学调查。流行病学调查。l补体结合试验：补体结合试验：用已知病毒的可溶性抗原检测病人血用已知病毒的可溶性抗原检测病人血清中有无相应抗体，作为清中有无相应抗体，作为近期感染近期感染的的指标。指标。l血凝抑制试验血凝抑制试验病毒病毒+红细胞红细胞 血凝现象血凝现象病毒病毒+抗体抗体+红细胞红细胞 血凝现象消失血凝现象消失用于流感病毒、副流感病毒的诊断、流行用于流感病毒、副流感病毒的诊断、流行病学调查及鉴定病毒的型和亚型。病学调查及鉴定病毒的型和亚型。lelisa法：法：hsv、cmv、eb病毒等病毒等l蛋白印迹技术：用已知病毒蛋白