生物化学ppt第三章第二节

1、l蛋白质是最重要的一类生蛋白质是最重要的一类生物大分子，它存在于所有物大分子，它存在于所有的生物细胞中，是构成生的生物细胞中，是构成生物体最基本的结构物质和物体最基本的结构物质和功能物质。功能物质。l蛋白质是生命活动的物质蛋白质是生命活动的物质基础，它参与了几乎所有基础，它参与了几乎所有的生命活动过程。如生物的生命活动过程。如生物体内发生的体内发生的催化作用、代催化作用、代谢过程、免疫作用、物质谢过程、免疫作用、物质转运、信息传递、运动和转运、信息传递、运动和生物调控等。生物调控等。蛋白质（蛋白质（protein，pro) : 是由是由2020种种L- L- 氨基酸按一定的序列通过酰胺键氨基酸

2、按一定的序列通过酰胺键（肽键）缩合而成的，具有较稳定构象，并具有一定生（肽键）缩合而成的，具有较稳定构象，并具有一定生物功能的生物大分子。物功能的生物大分子。 蛋白质与多肽并无严格的界线，通常是将相对分蛋白质与多肽并无严格的界线，通常是将相对分子质量在子质量在60006000以上的多肽成为蛋白质。蛋白质相对分子以上的多肽成为蛋白质。蛋白质相对分子质量变换范围很大，从大约质量变换范围很大，从大约60006000到到1 000 0001 000 000，甚至更，甚至更大。大。（1 1）按照蛋白质的组成，可以分为）按照蛋白质的组成，可以分为l简单蛋白简单蛋白(simple protein) (sim

3、ple protein) l结合蛋白结合蛋白(conjugated protein) (conjugated protein) 。l又称为单纯蛋白质；又称为单纯蛋白质；这类蛋白质只含由这类蛋白质只含由 - -氨基酸组成的肽氨基酸组成的肽链链，不含其它成分。，不含其它成分。l1.1.清蛋白和球蛋白清蛋白和球蛋白（albumin and globulin） ：广泛存在：广泛存在于动物组织中。清蛋白易溶于水，球蛋白微溶于水，易溶于动物组织中。清蛋白易溶于水，球蛋白微溶于水，易溶于稀酸中。于稀酸中。l2.2.谷蛋白谷蛋白( (glutelin) )和醇溶谷蛋白和醇溶谷蛋白( (prolamin) )：

4、植物蛋白，：植物蛋白，不溶于水，易溶于稀酸、稀碱中，后者可溶于不溶于水，易溶于稀酸、稀碱中，后者可溶于70708080乙乙醇中。醇中。l3.3.精蛋白和组蛋白精蛋白和组蛋白：碱性蛋白质，存在于细胞核中。：碱性蛋白质，存在于细胞核中。l4.4.硬蛋白硬蛋白：存在于各种软骨、腱、毛、发、丝等组织中，：存在于各种软骨、腱、毛、发、丝等组织中，分为分为角蛋白、胶原蛋白、弹性蛋白和丝蛋白角蛋白、胶原蛋白、弹性蛋白和丝蛋白。l由简单蛋白与其它非蛋白成分结合而成，由简单蛋白与其它非蛋白成分结合而成，l色蛋白色蛋白：由简单蛋白与色素物质结合而成。如：由简单蛋白与色素物质结合而成。如血红蛋白、叶绿蛋白和细胞色素

5、等。血红蛋白、叶绿蛋白和细胞色素等。l糖蛋白糖蛋白：由简单蛋白与糖类物质组成。如细胞：由简单蛋白与糖类物质组成。如细胞膜中的糖蛋白等。膜中的糖蛋白等。l脂蛋白脂蛋白：由简单蛋白与脂类结合而成。：由简单蛋白与脂类结合而成。 如血如血清清 - -， - -脂蛋白等。脂蛋白等。l核蛋白核蛋白：由简单蛋白与核酸结合而成。如细胞：由简单蛋白与核酸结合而成。如细胞核中的核糖核蛋白等。核中的核糖核蛋白等。l(2) (2) 依据蛋白质的外形分类依据蛋白质的外形分类l按照蛋白质的外形可分为按照蛋白质的外形可分为球状蛋白质和纤维状球状蛋白质和纤维状蛋白质。蛋白质。l球状蛋白质球状蛋白质(globular prot

6、ein) (globular protein) ：外形接近外形接近球形或椭圆形，溶解性较好，能形成结晶，大球形或椭圆形，溶解性较好，能形成结晶，大多数蛋白质属于这一类。多数蛋白质属于这一类。l纤维状蛋白质纤维状蛋白质（fibrous proteinfibrous protein） ：分子类：分子类似纤维或细棒。它又可分为似纤维或细棒。它又可分为可溶性纤维状蛋白可溶性纤维状蛋白质和不溶性纤维状蛋白质质和不溶性纤维状蛋白质。l蛋白质与多肽一样，能够发生两性离解，也有蛋白质与多肽一样，能够发生两性离解，也有等电点。在等电点时等电点。在等电点时( (Isoelectric point pIIsoele

7、ctric point pI) )，蛋白质的溶解度最小，在电场中不移动。蛋白质的溶解度最小，在电场中不移动。l在不同的在不同的pHpH环境下，蛋白质的电学性质不环境下，蛋白质的电学性质不同。在等电点偏碱性溶液中，蛋白质粒子同。在等电点偏碱性溶液中，蛋白质粒子带负电荷，在电场中向正极移动；在等电带负电荷，在电场中向正极移动；在等电点偏酸性溶液中，蛋白质粒子带正电荷，点偏酸性溶液中，蛋白质粒子带正电荷，在电场中向负极移动。这种现象称为在电场中向负极移动。这种现象称为蛋白蛋白质电泳质电泳( (ElectrophoresisElectrophoresis) )。l蛋白质在等蛋白质在等电点电点pHpH条

8、件条件下，不发生下，不发生电泳现象。电泳现象。利用蛋白质利用蛋白质的电泳现象，的电泳现象，可以将蛋白可以将蛋白质进行分离质进行分离纯化。纯化。l由于蛋白质的分子量很大，它在水中能由于蛋白质的分子量很大，它在水中能够形成胶体溶液。蛋白质溶液具有胶体够形成胶体溶液。蛋白质溶液具有胶体溶液的典型性质，如丁达尔现象、布郎溶液的典型性质，如丁达尔现象、布郎运动等。运动等。l由于胶体溶液中的蛋白质不能通过半透由于胶体溶液中的蛋白质不能通过半透膜，因此可以应用透析法将非蛋白的小膜，因此可以应用透析法将非蛋白的小分子杂质除去。分子杂质除去。l蛋白质胶体溶液的稳定性与它的分子量蛋白质胶体溶液的稳定性与它的分子量

9、大小、所带的电荷和水化作用有关。大小、所带的电荷和水化作用有关。l改变溶液的条件，将影响蛋白质的溶解改变溶液的条件，将影响蛋白质的溶解性质性质l在适当的条件下，蛋白质能够从溶液中在适当的条件下，蛋白质能够从溶液中沉淀出来。沉淀出来。+带正电荷的蛋白质带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质在等电点的蛋白质在等电点的蛋白质水化层水化层+带正电荷的蛋白质带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质不稳定的蛋白质颗粒不稳定的蛋白质颗粒酸酸碱碱酸酸碱碱酸酸碱碱脱水作用脱水作用脱水作用脱水作用脱水作用脱水作用 蛋白质的聚沉蛋白质的聚沉蛋蛋白白质质胶胶体体溶溶液液沉沉淀淀作作用用示示意意图图l

10、在温和条件下，通过改变溶液的在温和条件下，通过改变溶液的pHpH或电或电荷状况，使蛋白质从胶体溶液中沉淀分荷状况，使蛋白质从胶体溶液中沉淀分离。离。l在沉淀过程中，结构和性质都没有发生在沉淀过程中，结构和性质都没有发生变化，在适当的条件下，可以重新溶解变化，在适当的条件下，可以重新溶解形成溶液，所以这种沉淀又称为非变性形成溶液，所以这种沉淀又称为非变性沉淀。沉淀。l可逆沉淀是分离和纯化蛋白质的基本方可逆沉淀是分离和纯化蛋白质的基本方法，如等电点沉淀法、盐析法和有机溶法，如等电点沉淀法、盐析法和有机溶剂沉淀法等。剂沉淀法等。l在强烈沉淀条件下，不仅破坏了蛋白质在强烈沉淀条件下，不仅破坏了蛋白质胶

11、体溶液的稳定性，而且也破坏了蛋白胶体溶液的稳定性，而且也破坏了蛋白质的结构和性质，产生的蛋白质沉淀不质的结构和性质，产生的蛋白质沉淀不可能再重新溶解于水。可能再重新溶解于水。l由于沉淀过程发生了蛋白质的结构和性由于沉淀过程发生了蛋白质的结构和性质的变化，所以又称为变性沉淀。质的变化，所以又称为变性沉淀。l如加热沉淀、强酸碱沉淀、重金属盐沉如加热沉淀、强酸碱沉淀、重金属盐沉淀和生物碱沉淀等都属于不可逆沉淀。淀和生物碱沉淀等都属于不可逆沉淀。l抗体和抗原蛋白质通过相互识别和结合抗体和抗原蛋白质通过相互识别和结合而发生的沉淀现象。而发生的沉淀现象。l这种特殊的沉淀作用是生物体免疫功能这种特殊的沉淀作

12、用是生物体免疫功能的基础。的基础。l蛋白质的性质与它们的结构密切相关。蛋白质的性质与它们的结构密切相关。某些物理或化学因素，能够破坏蛋白质某些物理或化学因素，能够破坏蛋白质的结构状态，引起蛋白质理化性质改变的结构状态，引起蛋白质理化性质改变并导致其生理活性丧失。这种现象称为并导致其生理活性丧失。这种现象称为蛋白质的变性蛋白质的变性( (denaturation)。l大部分蛋白质均含有带芳香环的苯丙氨酸、大部分蛋白质均含有带芳香环的苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。酪氨酸和色氨酸。l大多数蛋白质在大多数蛋白质在280nm 280nm 附近显示强的吸收。附近显示强的吸收。l利用这个性质，可以对蛋白质进行定

13、性鉴利用这个性质，可以对蛋白质进行定性鉴定。定。3.4.2 蛋白质分离和纯化蛋白质分离和纯化1.蛋白质分离纯化的一般原则蛋白质分离纯化的一般原则纯化的实质：纯化的实质： 增加制品(preparation)的纯度或比活性一般程序：一般程序： 前处理、粗分离、细分离、浓缩与保存 电泳电泳 前前处处理理粗粗分分离离细细分分离离生物组织生物组织 无细胞提取液无细胞提取液破碎、溶解、差速离心破碎、溶解、差速离心选择性沉淀法选择性沉淀法亲和亲和层析层析离子交离子交换层析换层析精制后的蛋白质精制后的蛋白质凝胶凝胶过滤过滤疏水疏水层析层析吸附吸附层析层析1、前处理：、前处理：将组织和细胞破碎将组织和细胞破碎动

14、物组织和细胞：电动捣碎机（动物组织和细胞：电动捣碎机（waring blender) 匀浆器（匀浆器（homogenizer) 超声波处理（超声波处理（ultrasonication)植物组织和细胞：石英砂植物组织和细胞：石英砂+提取液，研磨提取液，研磨 纤维素酶处理纤维素酶处理细菌：超声波震荡、与砂研磨、高压挤压、溶菌酶处理细菌：超声波震荡、与砂研磨、高压挤压、溶菌酶处理（分解肽聚糖）（分解肽聚糖）差速离心法收集细胞的某一组分差速离心法收集细胞的某一组分（differential centrifugation)在不同离心力下使沉降系数不同的细胞组分分离在不同离心力下使沉降系数不同的细胞组分分

15、离如果提取膜蛋白：如果提取膜蛋白：超声波或去污剂使膜解聚，然后用适当的介质提取。超声波或去污剂使膜解聚，然后用适当的介质提取。2、粗分离、粗分离（rough fractionation)一般用选择性沉淀法。一般用选择性沉淀法。（NH4）2SO4分级沉淀法（盐析）分级沉淀法（盐析）等电点选择性沉淀法等电点选择性沉淀法有机溶剂分级沉淀法有机溶剂分级沉淀法热处理选择性沉淀法热处理选择性沉淀法生物碱或三氯乙酸选择性沉淀法生物碱或三氯乙酸选择性沉淀法3、细分离（fine fractionation)透析除盐透析除盐sephdex G-25凝胶过滤除盐凝胶过滤除盐层析法：凝胶过滤层析、离子交换层析、吸附层

16、析法：凝胶过滤层析、离子交换层析、吸附层析、亲和层析、疏水层析（反相层析、亲和层析、疏水层析（反相HPLC）电泳法：自由界面电泳、区带电泳（凝胶电泳、电泳法：自由界面电泳、区带电泳（凝胶电泳、滤纸和薄膜电泳、粉末电泳、细丝电泳等）、滤纸和薄膜电泳、粉末电泳、细丝电泳等）、盘状电泳、等电聚焦、双向电泳盘状电泳、等电聚焦、双向电泳密度梯度离心密度梯度离心4、浓缩与保存、浓缩与保存浓缩方法：浓缩方法：保存方法：保存方法：晶体保存：晶体保存： 结晶过程本身也伴随着一定程度的提纯。能否结晶仅结晶过程本身也伴随着一定程度的提纯。能否结晶仅是纯度是纯度 的一个指标，也是判断制品是否有活性的指标。的一个指标，

17、也是判断制品是否有活性的指标。纯度越高，溶液越浓，越容易结晶。纯度越高，溶液越浓，越容易结晶。结晶方法：使溶液略处于过饱和状态。降低温度、盐结晶方法：使溶液略处于过饱和状态。降低温度、盐析、加有机溶剂、调节析、加有机溶剂、调节pH、接入晶种。、接入晶种。冻干粉保存：冻干粉保存：溶液保存：溶液保存： 加入抗冻剂（加入抗冻剂（50%甘油）后甘油）后-20-70保存。保存。2. 蛋白质分离纯化的主要方法蛋白质分离纯化的主要方法根据分子大小分离根据分子大小分离根据蛋白质的溶解度不同分离根据蛋白质的溶解度不同分离根据电性质不同分离根据电性质不同分离选择性吸附分离（物理吸附）选择性吸附分离（物理吸附）根据

18、配体特性异性分离（亲和层析）根据配体特性异性分离（亲和层析）根据疏水性的差异根据疏水性的差异 3. 蛋白质分离纯化的基本方法蛋白质分离纯化的基本方法（1）根据分子大小和形状的差异根据分子大小和形状的差异透析和超滤法：除去小分子物质透析和超滤法：除去小分子物质 图图3-108透析、透析、3-109超滤超滤密度梯度离心法密度梯度离心法 图图3-110 蔗糖密度梯度离心蔗糖密度梯度离心凝胶过滤法凝胶过滤法图图3-111凝胶过滤层析的原理凝胶过滤层析的原理透析法：透析法： 半透膜阻留半透膜阻留prpr分子，而分子，而让小的溶质分子和水通过，让小的溶质分子和水通过，以达到除去蛋白质溶液中以达到除去蛋白质

19、溶液中小分子（无机盐、单糖、小分子（无机盐、单糖、双糖、氨基酸、小肽及表双糖、氨基酸、小肽及表面活性剂等低分子量化合面活性剂等低分子量化合物）的目的。物）的目的。常用的半透膜：玻璃纸或常用的半透膜：玻璃纸或高分子合成材料；高分子合成材料；透析液：蒸馏水或缓冲液。透析液：蒸馏水或缓冲液。超滤法：超滤法： 施以一定的压力使小施以一定的压力使小分子溶质通过一半透膜，分子溶质通过一半透膜，而按半透膜的筛孔大小而按半透膜的筛孔大小截留相应的蛋白质分子截留相应的蛋白质分子密度梯度离心法：密度梯度离心法：沉降的速度与颗粒的重量、密沉降的速度与颗粒的重量、密度和形状有关。离心后按其沉度和形状有关。离心后按其沉

20、降的速度不同，彼此分开形成降的速度不同，彼此分开形成区带。再进行光学定位，针刺区带。再进行光学定位，针刺或冰冻切片采样分析或冰冻切片采样分析蔗糖密度梯度蔗糖密度梯度聚蔗糖密度梯度聚蔗糖密度梯度凝胶色谱法：凝胶色谱法：交联葡聚糖交联葡聚糖（Sephadex）;聚丙烯酰胺凝胶聚丙烯酰胺凝胶（Bio-Gel P ）琼脂糖凝胶琼脂糖凝胶(Sepharose, Bio-Gel A)超离心法超离心法 将蛋白质放入离心机的离心管中进行离心，将蛋白质放入离心机的离心管中进行离心，蛋白质颗粒在强离心力作用下，蛋白质分子蛋白质颗粒在强离心力作用下，蛋白质分子就会发生沉降，与溶液分离；就会发生沉降，与溶液分离；l在

21、在60 00060 00080 000r/min 80 000r/min 的高速离心力作用下，蛋白质分子的高速离心力作用下，蛋白质分子会沿旋转中心向外周方向移动。会沿旋转中心向外周方向移动。l超离心法最为准确，但需昂贵的超速离心机。超离心法最为准确，但需昂贵的超速离心机。l用光学方法测定界面移动的速度即为蛋白质的离心沉降速度。用光学方法测定界面移动的速度即为蛋白质的离心沉降速度。l蛋白质的沉降速度与分子大小和形状有关，因为沉降系数蛋白质的沉降速度与分子大小和形状有关，因为沉降系数S S大体上和分子量成正比关系，故可应用超速离心法测定蛋白大体上和分子量成正比关系，故可应用超速离心法测定蛋白质分子

22、量，但对分子形状高度不对称的大多数纤维状蛋白质质分子量，但对分子形状高度不对称的大多数纤维状蛋白质不适用。不适用。转头转头转头腔转头腔沉降样品沉降样品驱动马达驱动马达真空真空冷冻冷冻（2）根据溶解度差异的分离：选择性沉淀法）根据溶解度差异的分离：选择性沉淀法 等电点沉淀法等电点沉淀法盐析法盐析法PEG沉淀法沉淀法有机溶剂沉淀法有机溶剂沉淀法重金属盐选择性沉淀法（重金属盐选择性沉淀法（pHpI，蛋白质带负电荷），蛋白质带负电荷）生物碱和酸选择性沉淀法（生物碱和酸选择性沉淀法（pHpI，蛋白质带正电荷），蛋白质带正电荷）热处理沉淀法（铜锌热处理沉淀法（铜锌SOD，65、15分钟、稳定）分钟、稳定）

23、等电点沉淀等电点沉淀在等电点条件下，蛋白质的电导性、溶解在等电点条件下，蛋白质的电导性、溶解度最小，粘度最大。度最小，粘度最大。在在pI时，分子电荷为零，蛋白质分子间的静电排时，分子电荷为零，蛋白质分子间的静电排斥消失，从而蛋白质出现聚集沉淀。而那些等斥消失，从而蛋白质出现聚集沉淀。而那些等电点高于或低于该电点高于或低于该pH的蛋白质能留在溶液中的蛋白质能留在溶液中。 蛋白质的盐溶与盐析蛋白质的盐溶与盐析 盐溶：低盐浓度时，蛋白质溶解度盐溶：低盐浓度时，蛋白质溶解度，称盐溶。，称盐溶。盐析：高盐浓度时，由于水化层被破坏和表面电荷被盐析：高盐浓度时，由于水化层被破坏和表面电荷被 中和，使中和，使

24、pr溶解度溶解度沉淀析出，称盐析。沉淀析出，称盐析。 盐析多用溶解度大的中性盐，如盐析多用溶解度大的中性盐，如(NH4)2SO4、NaCl MgCl2、NH4Cl、KCl等的饱和溶液；等的饱和溶液； 不同的蛋白质由于所带的电荷和水化程度不同，盐不同的蛋白质由于所带的电荷和水化程度不同，盐析时所需的盐的浓度也不同，而将不同的蛋白质加析时所需的盐的浓度也不同，而将不同的蛋白质加以分离。以分离。 l在蛋白质溶液中，加入一定量的与水互溶的有在蛋白质溶液中，加入一定量的与水互溶的有机溶剂，由于这些溶剂与水的亲和力强，能破机溶剂，由于这些溶剂与水的亲和力强，能破坏蛋白质的水化层，使蛋白质的溶解度降低而坏蛋

25、白质的水化层，使蛋白质的溶解度降低而沉淀。沉淀。l常用的有机溶剂：甲醇、乙醇、丙酮；常用的有机溶剂：甲醇、乙醇、丙酮；l为防止蛋白质在分离过程中发生变化，有机溶为防止蛋白质在分离过程中发生变化，有机溶剂浓度不能太高，且须在低温下进行。剂浓度不能太高，且须在低温下进行。离子交换色谱法离子交换色谱法 1）是利用离子交换树脂为主色谱支持体，根据蛋白质带电荷情况进行分离； 2）不同载体： 离子交换纤维素 离子交换交联葡聚糖：兼有分子筛效应 离子交换交联琼脂糖 电泳法电泳法 电泳：带电颗粒在电场中移动的现象。电泳：带电颗粒在电场中移动的现象。分子大小不同分子大小不同的蛋的蛋白质所带白质所带净电荷密度不同

26、净电荷密度不同，迁移率不同，在电泳时可以分开，迁移率不同，在电泳时可以分开。v = Eq/f (v-移动速率，移动速率，E-电场强度，电场强度，q-所带净电荷，所带净电荷，f-介介质的摩擦系数质的摩擦系数) a. 自由界面电泳：蛋白质溶于缓冲液中进行电泳。自由界面电泳：蛋白质溶于缓冲液中进行电泳。 b. 区带电泳：将蛋白质溶液点在浸了缓冲液的支持物上进区带电泳：将蛋白质溶液点在浸了缓冲液的支持物上进 行电泳，不同组分形成带状区域。行电泳，不同组分形成带状区域。 1）纸电泳：用滤纸作支持物。）纸电泳：用滤纸作支持物。 2）凝胶电泳：用凝胶（淀粉、琼脂糖、聚丙烯酰胺）作）凝胶电泳：用凝胶（淀粉、琼

27、脂糖、聚丙烯酰胺）作 支持物。支持物。 目前应用最多的是目前应用最多的是SDS-聚丙烯酰胺凝胶聚丙烯酰胺凝胶电泳电泳(SDS-PAGE),用于分离、纯化、制用于分离、纯化、制备蛋白质。备蛋白质。 （SDS的引入，使蛋白质表面带上大量负电荷，使的引入，使蛋白质表面带上大量负电荷，使Eq接近一个常数，则接近一个常数，则v只与只与f即分子大小有关）即分子大小有关）PAGE垂直平板电泳示意图垂直平板电泳示意图低低浓度浓度浓缩浓缩胶胶高高浓度浓度分离分离胶胶等电聚焦电泳等电聚焦电泳：当蛋白质在其等电点时，：当蛋白质在其等电点时，净电荷为零，在电场中不再移动。净电荷为零，在电场中不再移动。+5.06.07

28、.0稳定稳定pH梯度梯度5.06.07.0稳定稳定pH梯度梯度通电通电+（4）根据选择性吸附的差异：）根据选择性吸附的差异： 吸附色谱法：吸附色谱法：某些物质对不同种类的蛋白质具有某些物质对不同种类的蛋白质具有不同程度的吸附能力，据此可将蛋白质进行分离。不同程度的吸附能力，据此可将蛋白质进行分离。 极性：硅胶、氧化铝、岩藻土（离子吸引和氢键）极性：硅胶、氧化铝、岩藻土（离子吸引和氢键） 非极性：活性炭（范德华力、疏水作用）非极性：活性炭（范德华力、疏水作用） 最广泛最有效：羟基磷灰石（最广泛最有效：羟基磷灰石（hydroxyapatite)，即结，即结晶磷酸钙晶磷酸钙Ca10(PO4)6(OH

29、)2，可分离蛋白质、核酸，可分离蛋白质、核酸 洗脱液：不同浓度和不同洗脱液：不同浓度和不同pH的磷酸缓冲溶液。的磷酸缓冲溶液。配体亲和力的差异配体亲和力的差异 ：亲和层析：亲和层析 原理：原理：不同蛋白质分子对于固定化在载体上的特殊配基具有不同的识别和结不同蛋白质分子对于固定化在载体上的特殊配基具有不同的识别和结合能力，选择与待纯化的蛋白质具有特殊的识别和结合作用的配基与载体相合能力，选择与待纯化的蛋白质具有特殊的识别和结合作用的配基与载体相连接，将这种连接有配基的载体装入色谱柱中，当含有纯化的蛋白质溶液通连接，将这种连接有配基的载体装入色谱柱中，当含有纯化的蛋白质溶液通过色谱柱时，该蛋白质即

30、与配基发生特异结合而被吸附在色谱柱上，而其它过色谱柱时，该蛋白质即与配基发生特异结合而被吸附在色谱柱上，而其它蛋白质则流出柱外，被特异性结合在色谱柱上的蛋白质，可以用使蛋白质的蛋白质则流出柱外，被特异性结合在色谱柱上的蛋白质，可以用使蛋白质的配体洗脱液洗脱。配体洗脱液洗脱。配基：配基：抗体、抗原、激素或受体蛋白。抗体、抗原、激素或受体蛋白。l蛋白质是由一条或多条多肽蛋白质是由一条或多条多肽( (polypeptide) )链以特殊方式结合而成的生物大分子。链以特殊方式结合而成的生物大分子。l蛋白质与多肽并无严格的界线，通常是蛋白质与多肽并无严格的界线，通常是将分子量在将分子量在60006000

31、道尔顿以上的多肽称为道尔顿以上的多肽称为蛋白质。蛋白质。l蛋白质分子量变化范围很大蛋白质分子量变化范围很大, , 从大约从大约60006000到到10000001000000道尔顿甚至更大。道尔顿甚至更大。l1.1.蛋白质的一级结构蛋白质的一级结构(Primary (Primary structure)structure)及其生物学意义：及其生物学意义：l蛋白质的一级结构：包括蛋白质的一级结构：包括组成蛋白质的多肽链数组成蛋白质的多肽链数目、多肽链的氨基酸顺序，以及多肽链内或链间目、多肽链的氨基酸顺序，以及多肽链内或链间二硫键的数目和位置。二硫键的数目和位置。其中最重要的是多肽链的其中最重要的

32、是多肽链的氨基酸顺序，它是蛋白质生物功能的基础。氨基酸顺序，它是蛋白质生物功能的基础。l蛋白质氨基酸顺序的改变，不仅影响蛋白质的高蛋白质氨基酸顺序的改变，不仅影响蛋白质的高级结构，而且将直接影响其生物功能。若某种蛋级结构，而且将直接影响其生物功能。若某种蛋白质正常的氨基酸顺序发生改变，则可能产生异白质正常的氨基酸顺序发生改变，则可能产生异常功能或病变。如贫血症就是血红蛋白发生了变常功能或病变。如贫血症就是血红蛋白发生了变异，即肽链上第异，即肽链上第6 6位的位的GluGlu被被ValVal替代，引起变异替代，引起变异蛋白质在空间结构发生了显著变化，水溶性明显蛋白质在空间结构发生了显著变化，水溶

33、性明显降低，血液粘性增加，导致贫血症。降低，血液粘性增加，导致贫血症。l蛋白质氨基酸顺序的测定是蛋白质化学研究的基础。蛋白质氨基酸顺序的测定是蛋白质化学研究的基础。自从自从19531953年年F.SangerF.Sanger测定了胰岛素的一级结构以来，测定了胰岛素的一级结构以来，现在已经有上千种不同蛋白质的一级结构被测定。胰现在已经有上千种不同蛋白质的一级结构被测定。胰岛素的一级结构如下：岛素的一级结构如下： l测定蛋白质分子中多肽链的数目测定蛋白质分子中多肽链的数目。l通过测定末端氨基酸残基的量与蛋白质通过测定末端氨基酸残基的量与蛋白质分子量之间的关系，即可确定多肽链的分子量之间的关系，即可

34、确定多肽链的数目。数目。l多肽链的拆分多肽链的拆分。l由多条多肽链组成的蛋白质分子，必须先进行拆分。l多肽链的拆分多肽链的拆分l几条多肽链借助非共价键连接在一起，几条多肽链借助非共价键连接在一起，称为寡聚蛋白质，如血红蛋白为四聚体；称为寡聚蛋白质，如血红蛋白为四聚体；l可用可用8mol/L8mol/L尿素或尿素或6mol/L6mol/L盐酸胍处理，盐酸胍处理，即可分开多肽链即可分开多肽链( (亚基亚基).).ll几条多肽链通过二硫键交几条多肽链通过二硫键交联在一起。可在联在一起。可在8mol/L8mol/L尿尿素或素或6mol/L6mol/L盐酸胍存在下，盐酸胍存在下，用过量的用过量的 - -

35、巯基乙醇巯基乙醇处理，处理，使二硫键还原为巯基，然使二硫键还原为巯基，然后用烷基化试剂保护生成后用烷基化试剂保护生成的巯基，以防止它重新被的巯基，以防止它重新被氧化。也可用氧化。也可用过甲酸氧化过甲酸氧化法法打开二硫键，生成磺酸打开二硫键，生成磺酸基基l一般采用胃蛋白酶水解多肽，用双向电一般采用胃蛋白酶水解多肽，用双向电泳技术分离出含有二硫键的肽段，接着泳技术分离出含有二硫键的肽段，接着进行二硫键的拆分进行二硫键的拆分l将肽段分别进行顺序分析将肽段分别进行顺序分析l然后同整个多肽链进行比较，确定二硫然后同整个多肽链进行比较，确定二硫键的位置。键的位置。l测定每测定每条多肽链条多肽链的氨基酸的氨

36、基酸组成，并组成，并计算出氨计算出氨基酸成分基酸成分的分子比；的分子比；l分析多肽链的分析多肽链的N-N-末端和末端和C-C-末端。末端。l多肽链断裂成多个肽段，可采用两种多肽链断裂成多个肽段，可采用两种或多种不同的断裂方法将多肽样品断裂或多种不同的断裂方法将多肽样品断裂成两套或多套肽段或肽碎片，并将其分成两套或多套肽段或肽碎片，并将其分离开来。离开来。l测定每个肽段的氨基酸顺序。测定每个肽段的氨基酸顺序。确定肽段在多肽链中的次序确定肽段在多肽链中的次序。 利用两套或多套肽段的氨基酸顺序利用两套或多套肽段的氨基酸顺序彼此间的交错重叠，拼凑出整条多肽链彼此间的交错重叠，拼凑出整条多肽链的氨基酸顺

37、序。的氨基酸顺序。l原理：一般的多肽链太长，含有几百甚至几千原理：一般的多肽链太长，含有几百甚至几千个氨基酸残基。故先将它切割成若干个小肽段，个氨基酸残基。故先将它切割成若干个小肽段，然后再分别测定小肽段的氨基酸顺序。然后再分别测定小肽段的氨基酸顺序。l多肽链的降解必须满足两个条件：选择性强，多肽链的降解必须满足两个条件：选择性强，反应产率高；反应产率高；l主要方法：酶解法和化学法；主要方法：酶解法和化学法；l 酶解法酶解法: :某些蛋白质水解酶能够选择性地水某些蛋白质水解酶能够选择性地水解多肽链中某一肽键，因而能预测出可能得到解多肽链中某一肽键，因而能预测出可能得到的小肽段数目，以及端基氨基

38、酸的类型。的小肽段数目，以及端基氨基酸的类型。l常用的酶：常用的酶：胰蛋白酶胰蛋白酶，糜蛋白酶，胃蛋白酶，糜蛋白酶，胃蛋白酶，嗜热菌蛋白酶，羧肽酶和氨肽酶嗜热菌蛋白酶，羧肽酶和氨肽酶3. 3. 多肽链氨基酸顺序分析多肽链氨基酸顺序分析 化学法：溴化氰水解法化学法：溴化氰水解法(Cyanogen bromide) ：它能选择性地切割由甲硫氨酸的羧基所形成的肽键。它能选择性地切割由甲硫氨酸的羧基所形成的肽键。特点：专一性强，产率高。特点：专一性强，产率高。CH3S：CH2CH2CHNHC NH CH COOR+BrC+NBr-CH3S+CH2CH2CHNHC NH CH COORC NCH3SC

39、NCH2CHNHC NH CH COORCH2+H2O+CH2CHNHCOCH2OH3N+CH COR高丝氨酸内酯l多肽链端基氨基酸分为两类：多肽链端基氨基酸分为两类：N-N-端氨基端氨基酸酸(amino-terminal)(amino-terminal)和和C-C-端氨基酸端氨基酸。l在肽链氨基酸顺序分析中，最重要的是在肽链氨基酸顺序分析中，最重要的是N-N-端氨基酸分析法端氨基酸分析法。lSangerSanger法。法。2,4-2,4-二硝基氟苯在碱性条件下，能够与肽链二硝基氟苯在碱性条件下，能够与肽链N-N-端的端的游离氨基作用，生成二硝基苯衍生物（游离氨基作用，生成二硝基苯衍生物（DN

40、PDNP）。）。l在酸性条件下水解，得到黄色在酸性条件下水解，得到黄色DNP-DNP-氨基酸。该产物能够用乙醚氨基酸。该产物能够用乙醚抽提分离。不同的抽提分离。不同的DNP-DNP-氨基酸可以用色谱法进行鉴定。氨基酸可以用色谱法进行鉴定。O2NFNO2+ H2NCHCROHNCHCROO2NNO2H+H2OO2NNO2HNCHCROOH+氨基酸DNFBN-端氨基酸DNP衍生物DNP-氨基酸l在碱性条件下，丹磺酰氯（二甲氨基萘磺酰氯）可以与在碱性条件下，丹磺酰氯（二甲氨基萘磺酰氯）可以与N-N-端氨端氨基酸的游离氨基作用，得到丹磺酰基酸的游离氨基作用，得到丹磺酰- -氨基酸。氨基酸。l此法的优点

41、是丹磺酰此法的优点是丹磺酰- -氨基酸有很强的荧光性质，检测灵敏度氨基酸有很强的荧光性质，检测灵敏度可以达到可以达到1 1 1010-9-9molmol。N(CH3)2SO2ClH2NCHCROHNCHCROSO2N(CH3)2+水解N(CH3)2SO2HNCHCROOH+氨基酸丹磺酰氯多肽N-端丹磺酰N-端氨基酸丹磺酰氨基酸l此法是多肽链C-端氨基酸分析法。多肽与肼在无水条件下加热，C-端氨基酸即从肽链上解离出来，其余的氨基酸则变成肼化物。肼化物能够与苯甲醛缩合成不溶于水的物质而与C-端氨基酸分离。H2NCH CROHNCH CROORnCCHHNOHn-1N-端氨基酸 C-端氨基酸ORnC

42、CHH2NOHH2NCH CRONHNH2+H+NH2NH2氨基酸酰肼C-端氨基酸l氨肽酶是一种肽链外切酶，它能从多肽链的氨肽酶是一种肽链外切酶，它能从多肽链的N-N-端逐个的向里水解。端逐个的向里水解。l根据不同的反应时间测出酶水解所释放出的根据不同的反应时间测出酶水解所释放出的氨基酸种类和数量，按反应时间和氨基酸残氨基酸种类和数量，按反应时间和氨基酸残基释放量作动力学曲线，从而知道蛋白质的基释放量作动力学曲线，从而知道蛋白质的N-N-末端残基顺序。末端残基顺序。l最常用的氨肽酶是亮氨酸氨肽酶，水解以亮最常用的氨肽酶是亮氨酸氨肽酶，水解以亮氨酸残基为氨酸残基为N-N-末端的肽链速度最快。末端

43、的肽链速度最快。l羧肽酶是一种肽链外切酶，它能从多肽链的羧肽酶是一种肽链外切酶，它能从多肽链的C-C-端逐个的水解。根据不同的反应时间测出端逐个的水解。根据不同的反应时间测出酶水解所释放出的氨基酸种类和数量，从而酶水解所释放出的氨基酸种类和数量，从而知道蛋白质的知道蛋白质的C-C-末端残基顺序。末端残基顺序。l目前常用的羧肽酶有四种：目前常用的羧肽酶有四种：A,B,CA,B,C和和Y Y；A A和和B B来自胰脏；来自胰脏；C C来自柑桔叶；来自柑桔叶；Y Y来自面包酵母。来自面包酵母。l羧肽酶羧肽酶A A能水解除能水解除Pro,ArgPro,Arg和和LysLys以外的所有以外的所有C-C-

44、末端氨基酸残基；末端氨基酸残基；B B只能水解只能水解ArgArg和和LysLys为为C-C-末末端残基的肽键。端残基的肽键。lEdmanEdman法（苯异硫氰酸酯法）实际上也是一种法（苯异硫氰酸酯法）实际上也是一种N-N-端分析法。端分析法。此法的特点是能够不断重复循环，将肽链此法的特点是能够不断重复循环，将肽链N-N-端氨基酸残端氨基酸残基逐一进行标记和解离。基逐一进行标记和解离。NCSNHCHCOR2NCHCOR1HHNHS:CCHCOR1HNNHCHCOR2SNHCNHOCR1CHNH2CHCOR2NCOCHNHSCR1PTCPTC-多肽多肽PTH-氨基酸氨基酸PTH：苯乙内酰硫脲：苯

45、乙内酰硫脲+多肽氨基酸顺序自动分析仪工作原理多肽氨基酸顺序自动分析仪工作原理l蛋白质分子的多肽链并非呈线形伸展，而是折叠和盘蛋白质分子的多肽链并非呈线形伸展，而是折叠和盘曲构成特有的比较稳定的空间结构。曲构成特有的比较稳定的空间结构。l蛋白质的生物学活性和理化性质主要决定于空间结构蛋白质的生物学活性和理化性质主要决定于空间结构的完整，因此仅仅测定蛋白质分子的氨基酸组成和它的完整，因此仅仅测定蛋白质分子的氨基酸组成和它们的排列顺序并不能完全了解蛋白质分子的生物学活们的排列顺序并不能完全了解蛋白质分子的生物学活性和理化性质。性和理化性质。l例如球状蛋白质例如球状蛋白质(多见于血浆中的白蛋白、球蛋白

46、、血多见于血浆中的白蛋白、球蛋白、血红蛋白和酶等红蛋白和酶等)和纤维状蛋白质和纤维状蛋白质(角蛋白、胶原蛋白、肌角蛋白、胶原蛋白、肌凝蛋白、纤维蛋白等凝蛋白、纤维蛋白等)，前者溶于水，后者不溶于水，前者溶于水，后者不溶于水，显而易见，此种性质不能仅用蛋白质的一级结构的氨显而易见，此种性质不能仅用蛋白质的一级结构的氨基酸排列顺序来解释。基酸排列顺序来解释。蛋白质的三维结构就是指蛋白质的二级、三级和四级结构。如下图：l蛋白质的二级蛋白质的二级(Secondary)(Secondary)结构是结构是指肽链的主链原子在空间的排列指肽链的主链原子在空间的排列, ,或规则的几何走向、旋转及折叠。或规则的几

47、何走向、旋转及折叠。l涉及肽链主链的构象及链内或链涉及肽链主链的构象及链内或链间形成的氢键。间形成的氢键。l不涉及侧链部分的构象不涉及侧链部分的构象lPauling等人对一些简单的肽及氨基酸的酰胺等进行了等人对一些简单的肽及氨基酸的酰胺等进行了X线衍射分析，得出下图所示结构：线衍射分析，得出下图所示结构： (1)肽键中的肽键中的C-N键长键长0.132nm，比相邻的，比相邻的N-C单键单键(0.146nm)短，而较一般短，而较一般C=N双键双键(0.128nm)长，长，可见，肽键中可见，肽键中-C-N-键的性质介于单、双键之间，具有部分双键的性质，因而不能旋转。键的性质介于单、双键之间，具有部

48、分双键的性质，因而不能旋转。(2)肽键的肽键的C及及N周围三个键角之和均为周围三个键角之和均为360，说明都处于一个平面上，也就是说六个原子（，说明都处于一个平面上，也就是说六个原子（-CCONHC-）基本上同处于一个平面，这就是肽键平面。肽链中能够旋转的只有）基本上同处于一个平面，这就是肽键平面。肽链中能够旋转的只有碳碳原子所形成的单键，此单键的旋转决定两个肽键平面的位置关系，于是肽键平面成为肽链盘曲原子所形成的单键，此单键的旋转决定两个肽键平面的位置关系，于是肽键平面成为肽链盘曲折叠的基本单位。折叠的基本单位。(3)肽键中的肽键中的C-N既具有双键性质，就会有顺反不同的立体异构，已证实既具

49、有双键性质，就会有顺反不同的立体异构，已证实CO和和NH处于反位。处于反位。l(1)(1)多个肽键平面通过多个肽键平面通过碳原子旋转，碳原子旋转，相互之间紧密盘曲成稳固的右手螺旋。相互之间紧密盘曲成稳固的右手螺旋。l(2)(2)主链呈螺旋上升，每主链呈螺旋上升，每3.63.6个氨基酸残个氨基酸残基上升一圈，相当于基上升一圈，相当于0.54nm0.54nm。l(3)(3)相邻两圈螺旋之间借肽键中相邻两圈螺旋之间借肽键中C CO O和和H-NH-N形成许多链内氢健，即每一个氨基形成许多链内氢健，即每一个氨基酸残基中的酸残基中的NHNH和前面相隔三个残基的和前面相隔三个残基的C CO O之间形成氢键

50、，这是稳定之间形成氢键，这是稳定螺旋螺旋的主要因素。的主要因素。l(4)(4)肽链中氨基酸侧链肽链中氨基酸侧链R R，分布在螺旋外，分布在螺旋外侧，其形状、大小及电荷影响侧，其形状、大小及电荷影响螺旋螺旋的形成。酸性或碱性氨基酸集中的区域，的形成。酸性或碱性氨基酸集中的区域，由于同电荷相斥，不利于由于同电荷相斥，不利于螺旋形成；螺旋形成；较大的较大的R(R(如苯丙氨酸、色氨酸、异亮氨如苯丙氨酸、色氨酸、异亮氨酸酸) )集中的区域，也妨碍集中的区域，也妨碍螺旋形成；螺旋形成；脯氨酸因其脯氨酸因其碳原子位于五元环上，碳原子位于五元环上，不易扭转，加之它是亚氨基酸，不易形不易扭转，加之它是亚氨基酸，

51、不易形成氢键，故不易形成上述成氢键，故不易形成上述螺旋；甘螺旋；甘氨酸的氨酸的R R基为基为H H，空间占位很小，也会影，空间占位很小，也会影响该处螺旋的稳定。响该处螺旋的稳定。l - -折叠是由两条或多条几乎完全伸展的肽折叠是由两条或多条几乎完全伸展的肽链平行排列，通过链间的氢键交联而形成的。链平行排列，通过链间的氢键交联而形成的。肽链的主链呈锯齿状折叠构象肽链的主链呈锯齿状折叠构象l在在 - -折叠中，折叠中， - -碳原子总是处于折叠的角碳原子总是处于折叠的角上，氨基酸的上，氨基酸的R R基团处于折叠的棱角上并与基团处于折叠的棱角上并与棱角垂直，两个氨基酸之间的轴心距为棱角垂直，两个氨基

52、酸之间的轴心距为0.35nm0.35nm； l - -折叠结构的氢键折叠结构的氢键主要是由两条肽链之间形成的；主要是由两条肽链之间形成的；也可以在同一肽链的不同部分之间形成。几乎所也可以在同一肽链的不同部分之间形成。几乎所有肽键都参与链内氢键的交联，氢键与链的长轴有肽键都参与链内氢键的交联，氢键与链的长轴接近垂直。接近垂直。l - -折叠有两种类型折叠有两种类型：一种为：一种为平行式平行式，即所有肽链，即所有肽链的的N-N-端都在同一边。另一种为端都在同一边。另一种为反平行式反平行式，即相邻，即相邻两条肽链的方向相反。两条肽链的方向相反。l在在 - -转角部分，由四个氨基转角部分，由四个氨基酸

53、残基组成酸残基组成; ;l弯曲处的第一个氨基酸残基弯曲处的第一个氨基酸残基的的 -C=O -C=O 和第四个残基的和第四个残基的 N-H N-H 之间形成氢键，形成之间形成氢键，形成一个不很稳定的环状结构。一个不很稳定的环状结构。l这类结构主要存在于球状蛋这类结构主要存在于球状蛋白分子中。白分子中。l（1 1）蛋白质的三级结构）蛋白质的三级结构( (Tertiary Structure) )是指在二级结构基础上，肽链的不同区段的是指在二级结构基础上，肽链的不同区段的侧链基团相互作用在空间进一步盘绕、折叠侧链基团相互作用在空间进一步盘绕、折叠形成的包括主链和侧链构象在内的特征三维形成的包括主链和

54、侧链构象在内的特征三维结构。结构。l维系这种特定结构的力主要有氢键、疏水键、维系这种特定结构的力主要有氢键、疏水键、离子键和范德华力等。尤其是疏水键，在蛋离子键和范德华力等。尤其是疏水键，在蛋白质三级结构中起着重要作用。白质三级结构中起着重要作用。l蛋白质的四级结构蛋白质的四级结构(Quaternary Structure)是指是指由多条各自具有一、二、三级结构的肽链通过由多条各自具有一、二、三级结构的肽链通过非共价键连接起来的结构形式；各个亚基在这非共价键连接起来的结构形式；各个亚基在这些蛋白质中的空间排列方式及亚基之间的相互些蛋白质中的空间排列方式及亚基之间的相互作用关系。作用关系。l这种

55、蛋白质分子中，最小的单位通常称为亚基这种蛋白质分子中，最小的单位通常称为亚基或亚单位或亚单位Subunit，它一般由一条肽链构成，它一般由一条肽链构成，无生理活性；无生理活性；l维持亚基之间的化学键主要是疏水力。维持亚基之间的化学键主要是疏水力。l由多个亚基聚集而成的蛋白质常常称为寡聚蛋由多个亚基聚集而成的蛋白质常常称为寡聚蛋白；白；l1 1纤维状蛋白纤维状蛋白 l 纤维状蛋白质纤维状蛋白质(fibrous protein)(fibrous protein)广泛地分广泛地分布于脊椎和无脊椎动物体内，它是动物体的基布于脊椎和无脊椎动物体内，它是动物体的基本支架和外保护成分，占脊推动物体内蛋白质本

56、支架和外保护成分，占脊推动物体内蛋白质总量的一半或一半以上。总量的一半或一半以上。l这类蛋白质外形呈纤维状或细棒状，分子轴比这类蛋白质外形呈纤维状或细棒状，分子轴比( (长轴短轴长轴短轴) )大于大于10(10(小于小于1010的为球状蛋白质的为球状蛋白质) )。分子是有规则的线型结构。分子是有规则的线型结构。l纤维状蛋白质：纤维状蛋白质：不溶性不溶性( (硬蛋白硬蛋白) )和可溶性二和可溶性二类，前者有角蛋白、胶原蛋白和弹性蛋白等；类，前者有角蛋白、胶原蛋白和弹性蛋白等；l后者有肌球蛋白和纤维蛋白原等，但不包括后者有肌球蛋白和纤维蛋白原等，但不包括微管微管(microtubule)(micr

57、otubule)、肌动蛋白细丝、肌动蛋白细丝(actin (actin filament)filament)或鞭毛或鞭毛( flagella)( flagella)，它们是球状，它们是球状蛋白质的长向聚集体蛋白质的长向聚集体(aggregate)(aggregate)。l角蛋白广泛存在于动物的皮肤及皮肤的衍生物，如毛发、角蛋白广泛存在于动物的皮肤及皮肤的衍生物，如毛发、甲、角、鳞和羽等，属于结构蛋白。角蛋白中主要的是甲、角、鳞和羽等，属于结构蛋白。角蛋白中主要的是 - -角蛋白。角蛋白。l - -角蛋白主要由角蛋白主要由 - -螺旋构象的多肽链组成。一般是由三螺旋构象的多肽链组成。一般是由三条

58、右手条右手 - -螺旋肽链形成一个原纤维，原纤维的肽链之间螺旋肽链形成一个原纤维，原纤维的肽链之间有二硫键交联以维持其稳定性。有二硫键交联以维持其稳定性。l - -角蛋白的伸缩性能很好，当角蛋白的伸缩性能很好，当 - -角蛋白被过度拉伸时，角蛋白被过度拉伸时，则氢键被破坏而不能复原。此时则氢键被破坏而不能复原。此时 - -角蛋白转变成角蛋白转变成 - -折叠折叠结构，称为结构，称为 - -角蛋白。角蛋白。l毛的纤维是由多个原纤维平行排列，并由氢键和二硫键毛的纤维是由多个原纤维平行排列，并由氢键和二硫键作为交联键将它们聚集成不溶性的蛋白质。作为交联键将它们聚集成不溶性的蛋白质。l永久性卷发永久性

59、卷发( (烫发烫发) )是一项生物化学工程是一项生物化学工程(biochemical engineering),(biochemical engineering), 角蛋白在湿角蛋白在湿热条件下可以伸展转变为热条件下可以伸展转变为 构象，但在冷却构象，但在冷却干燥时又可自发地恢复原状。干燥时又可自发地恢复原状。l这是因为这是因为 角蛋白的侧链角蛋白的侧链R R基一般都比较大，基一般都比较大，不适于处在不适于处在 构象状态，此外构象状态，此外 角蛋白中的角蛋白中的螺旋多肽链间有着很多的二硫键交联，这些交螺旋多肽链间有着很多的二硫键交联，这些交联键也是当外力解除后使肽链恢复原状联键也是当外力解除后

60、使肽链恢复原状( ( 螺螺旋构象旋构象) )的重要力量。这就是卷发行业的生化的重要力量。这就是卷发行业的生化基础。基础。l丝心蛋白丝心蛋白(fibroin)(fibroin)这是蚕这是蚕丝和蜘蛛丝的一种蛋白质。丝和蜘蛛丝的一种蛋白质。丝心蛋白具有抗张强度高，丝心蛋白具有抗张强度高，质地柔软的特性，但不能质地柔软的特性，但不能拉伸。拉伸。与与 角蛋白在湿热角蛋白在湿热中伸展后形成的中伸展后形成的 角蛋白角蛋白很相似。很相似。l丝心蛋白是典型的反平行丝心蛋白是典型的反平行式折叠片，多肽链取锯齿式折叠片，多肽链取锯齿状折叠构象，酰胺基的取状折叠构象，酰胺基的取向使相邻的向使相邻的C C 为侧链腾出为