毛细管电泳实验常见问题解答

1、毛细管电泳实验常见问题解答现象检查方案检查现象/结果可能原因解决方法1无样品峰出现检查电流是否稳定没有电流毛细管堵塞或断裂用水冲洗毛细管，并观察是否有水流出，若无水流出请拆下卡盒检查毛细管两端和窗口是否断裂；毛细管没有断裂的话可以用水反向高压冲洗以试图解决此问题。缓冲溶液需要过滤，将样品过滤或者离心去除其中的颗粒。电流波动很大，直至几乎消失缓冲溶液中有气泡产生或者区带中样品析出将缓冲溶液超声脱气，如果还有此现象发生，则可能是样品区带有析出，可以通过降低样品浓度/延长ramp time来试图解决这一问题；对于在缓冲溶液中溶解度不高的样品则需要在缓冲溶液中加入添加剂以解决此问题。电流初始值较小，后

2、逐渐增大样品进样量过大减少进样量，通常进样参数设置在0.5psi,5sec左右电流正常样品浓度过低使用高浓度样品测试，如果无法解决则有可能是以下其他原因检测波长设置不正确请确认被分析物的特征吸收，检查方法中的检测波长设置分离极性错误对于蛋白样品，请注意蛋白在分离条件下其pi及所带电荷；对于核酸样品，通常条件下会带负电荷样品在毛细管内壁吸附对于蛋白及核酸样品应尽量采用涂层毛细管分离，或采用极端ph条件或动态涂层防止样品吸附。光学检测器或光纤损坏进行标准样品的测试，如果没有对应的结果出现，则有可能存在硬件问题，请联系工程师检查毛细管窗口是否有透明窗口忘记开毛细管窗口或窗口位置不正重新开毛细管检测窗

3、口，或将窗口调整到正确位置2 样品峰出现拖尾样品在毛细管内壁吸附对于蛋白及核酸样品应尽量采用涂层毛细管分离，或采用极端ph条件或动态涂层防止样品吸附。3 样品峰形不对称毛细管入口毛细管入口切口不平齐重新切割毛细管入口，注意毛细管切割方法，不可以用力过猛或反复刮擦更改样品溶剂缓冲溶液与样品溶液电解率差别过大可采用缓冲溶液作为样品溶剂4 样品峰过宽降低样品进样量有改善样品浓度太大可降低样品浓度或减少进样量无改善样品本身性质不均一此原因主要是针对蛋白样品，小分子样品发生的概率较低5 迁移时间不稳定出峰时间不稳定且无规律缓冲溶液与毛细管内壁平衡较慢每次样品运行之间避免用naoh冲洗毛细管出峰时间依次后

4、延样品中有物质易发生吸附首先在每次样品运行之前用0.1n naoh短时间冲洗毛细管，看迁移时间能否重复，如果效果不佳请使用涂层毛细管来改善结果或者将样品再次处理，以去除样品中易吸附的组分6 峰形和出峰时间不稳定更换缓冲溶液种类峰形和时间稳定缓冲溶液不稳定，易电解，或者是样品在原缓冲溶液条件下不稳定更换其它种类的缓冲溶液峰形和出峰情况仍不稳定样品中物质易在毛细管内壁吸附可采用涂层毛细管来克服此问题，或对样品进行前处理7 电流泄漏（current leakage）检查毛细管是否在窗口处断裂毛细管断裂毛细管内缓冲溶液流出造成电流泄漏更换新毛细管，并用水清洗光纤头及检测窗口毛细管无断裂实验环境湿度过大

5、使用抽湿机，并打开仪器cartridge cover；如果没有抽湿机可以使用空调，在湿度过大的情况下可在仪器关闭时放置干燥剂，但是在仪器运行时一定要将干燥剂取出8 无法加气压检查瓶塞是否盖紧或更换瓶塞更换后问题解决瓶塞老化，失去弹性请购买新的瓶塞，并注意瓶塞不可烘干，只能自然晾干瓶颈处有液体，导致瓶塞易滑向瓶中装液体时不要过满，也不要沾湿瓶颈若瓶塞无问题，可先采用真空方式，若真空方式可以使用，但压力仍不可用压力系统问题请联系工程师9 迁移时间可重复但峰面积重复性不好重新切割毛细管两端若问题解决毛细管入口处不平重新切割毛细管入口，注意毛细管切割方法，不可以用力过猛或反复刮擦问题依然存在，尝试电动

6、进样若电动进样可保持重现，则压力控制或气路存在问题请联系工程师10毛细管或电极易折断检查瓶盖是否老化瓶盖老化购买新的瓶盖电极是否不垂直电极不垂直将电极拉直11 冷却液泄漏检查卡盒内垫圈和卡子漏装或装错顺序严格按照操作手册上的安装顺序安装仪器内部管路密封不严请联系工程师12 pda光强低检测窗口aperture型号使用了窄细缝的aperture请在使用dad检测器时务必使用标有8的aperture13 谱图基线不稳定先用0.1n naoh冲洗毛细管，然后不进样运行原方法基线改善则为样品中物质有吸附重新预处理样品或更改电泳条件基线未改善毛细管内有强烈吸附，或缓冲体系不稳定更换新的毛细管，不进样，只运行缓冲，观察基线情况更换新毛细管后基线