肝硬化患者血清CA199外周血T细胞亚群和B细胞数检测的临床意义

1、肝硬化患者血清CA199、 外周血T细胞亚群和B细胞数检测的临床意义【摘要】 目的: 探讨肝硬化患者血清CA199和外用血T细胞亚群和B细胞数。方法: 分别应用RIA和单克隆技术测定61例肝硬化患者血清C199含量和外周血T细胞亚群和B细胞数, 并与35名正常人作比较。结果: 肝硬化患者血清CA199含量和外周血B细胞数显著高于正常组（P0.01）, 而CD3、 CD4、 CD4/CD8水平则显著地低于正常组（P0.01）。 结论: 检测肝硬化患者血清CA199和外周血T细胞亚群及B细胞水平的变化可作为病情及预后评估的重要指标。 【关键词】 肝硬化 糖类抗原199 B细胞 T细胞亚群CA199

2、水平测定主要用于胰腺癌、 胆管癌的诊断, 对消化道肿瘤也有一定的诊断价值1。外周血T细胞亚群是反映人体内环境稳定的重要检测指标。在免疫异常中, B细胞活化为免疫性疾病发病机制的关键因素。国内有关肝硬化患者血清CA199和T细胞亚群和B细胞联合检测的报道较少, 为此, 我们进行了探讨。1 材料和方法1.1 材料T3、 T4、 T8单克隆抗体（mAb）, 淋巴细胞悬液及致敏红细胞悬液均为武汉生物制品研究所产品; 淋巴细胞分层液由上海试剂公司提供, 放射免疫(RIA)试剂盒购自北京北方生物技术研究所。61例（男42例, 女19例, 年龄3662岁, 平均年龄54.6岁), 患者标本均由海口市人民医院

3、提供。根据体征、 B超、 CT和实验室检查, 并排除肝癌及其他恶性肿瘤。正常人对照35名（男21名, 女14名）, 年龄3261岁, 平均年龄52.8岁, 均由体检中心经健康体检的正常人, 无心、 肝、 肺、 肾等重要脏器病患, 肝、 肾功能试验正常。1.2 方法1.2.1 血清CA199水平检测采用RIA法试剂盒, 操作按说明书。1.2.2 外周血B细胞数测定用淋巴细胞分层液分离出单个核细胞, 用200 mL/L的小牛血清Hanks液配制成5×108/L密度。淋巴细胞悬液与致敏红细胞悬液等量混匀（各25 L）, 室温放置15 min后, 离心10 min, 室温放置1 h, 并在4

4、放置2 h后取出涂片, 瑞氏染色, 计数200个细胞（黏附3个以上红细胞为阳性红胞）。1.2.3 外周血T淋巴细胞亚群的测定将单个核细胞用Hanks液洗涤3次后, 置于RPMI1640培养液中, 调整细胞密度为2×109/L。取部分细胞涂片（50 L/片）, 风干后37过夜, 置-30冰箱储存待用。将风干好的涂片固定5 min, 吹干后用PBS洗3次, 加抗T3、 T4、 T8 mAb, 加入第二抗体(mAb)鼠IgG和APAAb复合物, 加入碱性磷酸酶底物固红染色, 苏木素复染, 甘油明胶封片, 高倍镜下计数200个有核红胞（着红色的细胞为阳性细胞）。1.2.4 统计学处理所测数据

5、以x±s表示, 组间比较采用t检验, 相关分析采用直线回归。2 结果 正常人和肝硬化患者血清CA199和外周血T淋巴细胞亚群B细胞含量测定结果见表1。血清C199水平与CD3、 CD4、 CD4/CD8和B细胞数进行相关分析, 结果表明: 血清CA199水平与CD3、 CD4、 CD4/CD8比值呈负相关（r=-0.2156、 -0.2218、 -0.2478, P0.05 ）, 而与B细胞数呈正相关（r=0.6018, P0.01）。表1 正常人和肝硬化患者血清CA199和外周血B细胞数及T淋巴细胞亚群测定结果（略）3 讨论 CA199是1979年Koprouski等从人结肠癌细胞

6、株中提取出来的一种糖蛋白3。目前在临床上作为胰胆道癌的肿瘤标志物检测颇受临床和科研工作者的关注。同时, 在CA199研究中也发现在肝硬化及肝癌中也有升高, 近几年来对于CA199在肝硬化及肝癌中的临床价值颇受临床医师们的兴趣, 据报道4: 肝硬化患者血清CA199水平明显升高, 与所观察的结果一致, 其升高的机制与肝硬化患者CA199升高和肝细胞变性坏死及再生有关。肝组织细胞破坏使某些肿瘤标志物释放入血, 而肝细胞再生使细胞膜表面的蛋白表达增高5。随着肝硬化的进展, 肝细胞破坏和再生加重, CA199水平随之上升, 并且在肝硬化晚期可能让肝细胞的基因突变, 使CA199水平进一步增高, 也提示

7、有肝癌发生的倾向。 我们检测的结果也显示, 肝硬化患者外周血B细胞数又明显地高于正常人组（P0.01）, CD3、 CD4、 CD4/CD8比值又明显地低于正常组（P0.01）。 CD3、 CD4细胞数降低和CD4/CD8比值的降低可刺激B细胞分泌活跃, 使体液免疫亢进, 产生IgG形成免疫复合物, 进而激活补体, 诱发免疫复合物的黏附和组织使患者发病, 本研究结果验证了这一论点。【参考文献】 1何浩明, 姜建平, 秦建蓓. 现代检验医学与临床M. 上海: 同济大学出版社, 2001: 275.2盛 红. 支气管哮喘患心外周血B细胞和T细胞及其亚群的研究J. 放射免疫学杂志, 2004, 17（4）: 323.3徐月华. CEA、 CA724和CA199在消化道恶性肿瘤诊断中的应用J. 放射免疫学杂志, 2006, 19（5）: 409.4郭红梅. 血清CA199在肝硬化与肝癌中的价值