急性毒性试验

1、 研究动物一次或在研究动物一次或在24小时内多次小时内多次给予受试物后，一定时间内所产给予受试物后，一定时间内所产生的毒性反应。生的毒性反应。观察药物毒性及其毒性靶器官观察药物毒性及其毒性靶器官为其它安全性试验的剂量和观察项目的为其它安全性试验的剂量和观察项目的设计提供信息设计提供信息为为i i期临床起始剂量的设计提供信息期临床起始剂量的设计提供信息药物安全性研究中首先进行的试验药物安全性研究中首先进行的试验啮齿类啮齿类 非啮齿类非啮齿类（发现毒理学研究）（发现毒理学研究）急性毒性试验的基本要求急性毒性试验的基本要求 啮齿类啮齿类两种动物两种动物 非啮齿类非啮齿类两种性别两种性别两种给药途径两

2、种给药途径l两种动物：充分暴露受试物毒性, 若未采用非啮齿类动物进行急性毒性试验，应阐明其合理性。l两种给药途径：通常，给药途径应至少包括临床拟用途径和一种能使原形药物较完全进入循环的途径（如静脉注射）。如果临床拟用途径为静脉给药，则仅此一种途径即可。动物选择动物选择 种类种类对受试物敏感的动物对受试物敏感的动物啮齿类和非啮齿类各一种啮齿类和非啮齿类各一种非啮齿类动物种类应与长期毒性试验一非啮齿类动物种类应与长期毒性试验一致致动物选择动物选择 年龄年龄通常选用健康成年动物通常选用健康成年动物 小鼠小鼠 5-65-6周龄周龄 大鼠大鼠 6-86-8周龄周龄 犬犬 6-86-8月龄月龄 猴猴 3-

3、43-4岁岁拟用于儿童的药物可选用幼年动物拟用于儿童的药物可选用幼年动物给药途径给药途径如临床拟用静脉给药则可仅此一种途径如临床拟用静脉给药则可仅此一种途径一般采用临床给药途径加上静脉给药两一般采用临床给药途径加上静脉给药两个途径个途径如不能静脉给药可改为其它途径如不能静脉给药可改为其它途径剂量剂量化学药物最高剂量化学药物最高剂量 静脉给药：静脉给药：2 2 g/kgg/kg 口服给药：口服给药：2-5 2-5 g/kgg/kg临床拟用剂量的临床拟用剂量的100-300100-300倍倍给药容量：各剂量组应按等容量，不等浓给药容量：各剂量组应按等容量，不等浓 度的给药原则度的给药原则最大给药容

4、量：可参考相关的文献最大给药容量：可参考相关的文献口服（包括灌胃）给药前通常禁食过夜口服（包括灌胃）给药前通常禁食过夜（至少小鼠（至少小鼠3-4 h3-4 h），但不禁水，给药后），但不禁水，给药后仍需禁食仍需禁食2-4 h2-4 h（小鼠（小鼠1-2 1-2 h h）原因：原因： 胃内容影响给药容积胃内容影响给药容积 胃内容可能会影响药物的吸收胃内容可能会影响药物的吸收观察期限观察期限一般给药后连续观察一般给药后连续观察1414天天如给药第如给药第2 2周内发生动物死亡或出现新的周内发生动物死亡或出现新的毒性反应时，应延长观察期限毒性反应时，应延长观察期限观察终点观察终点 死亡死亡 明显毒性

5、征状明显毒性征状观察指标观察指标死亡情况死亡情况体重等一般情况体重等一般情况征状（征状（signsign） 症状症状( (symptom)symptom)实验室等检查实验室等检查病理指标病理指标病理学检查病理学检查 所有动物（计划处死、濒死、死亡）都所有动物（计划处死、濒死、死亡）都应进行大体解剖应进行大体解剖 大体解剖发现异常时应进行组织病理学大体解剖发现异常时应进行组织病理学检查检查动物动物 种类：非啮齿类种类：非啮齿类 数量：一般数量：一般6 6只只观察终点：死亡观察终点：死亡剂量：剂量： 根据文献和啮齿类动物急性毒性试验结根据文献和啮齿类动物急性毒性试验结果，估计可能出现明显毒性反应到

6、发生果，估计可能出现明显毒性反应到发生死亡的剂量范围，按死亡的剂量范围，按50%50%递增法列出剂量递增法列出剂量序列表序列表方法：方法： 选取剂量序列表中的某个区段，每个剂选取剂量序列表中的某个区段，每个剂量（也可每隔一个剂量）给一个动物量（也可每隔一个剂量）给一个动物结果：结果： 近似致死剂量范围近似致死剂量范围最高非致死剂量与最高非致死剂量与最低致死剂量间的范围最低致死剂量间的范围动物动物种类：非啮齿类种类：非啮齿类数量：数量：8 8只只性别：雌、雄各半性别：雌、雄各半分组：分对照、给药分组：分对照、给药2 2组组观察终点：死亡观察终点：死亡剂量：剂量： 1 1、3 3、1010、303

7、0、100100、300300、10001000、3000 3000 mg/kgmg/kg 或或1010、2020、4040、8080、160160、320320、640640、1280 1280 mg/kgmg/kg方法：方法： 从低剂量开始，隔日给予下一剂量，从低剂量开始，隔日给予下一剂量，直至动物死亡直至动物死亡结果结果无动物死亡：无动物死亡：mldmld（minimum lethal dose 最小致死剂量）和和ldld5050大于最高剂量大于最高剂量某一剂量动物全部死亡：某一剂量动物全部死亡：mldmld和和ldld5050在该在该剂量和前一剂量间剂量和前一剂量间某一剂量动物部分死亡

8、，某一剂量动物部分死亡，mldmld在该剂量和在该剂量和前一剂量间，前一剂量间，ldld5050位于首次出现死亡和全位于首次出现死亡和全部动物死亡的剂量间部动物死亡的剂量间结果结果如无动物死亡，常以最高剂量给予动物如无动物死亡，常以最高剂量给予动物5-75-7天，以确定后续的重复给药试验中高天，以确定后续的重复给药试验中高剂量的选择剂量的选择适用条件适用条件在合理的最大给药浓度和合理的最大给在合理的最大给药浓度和合理的最大给药容量的条件下仍达不到上述剂量要求药容量的条件下仍达不到上述剂量要求更高的剂量所产生的信息不具有更进一更高的剂量所产生的信息不具有更进一步的价值步的价值方法方法一般使用一般

9、使用10-2010-20只动物只动物连续观察连续观察1414天天结果结果无动物死亡无动物死亡mldmld大于限度剂量大于限度剂量动物死亡动物死亡50%- 限度剂量限度剂量动物死亡动物死亡50%50%需要重新设置限度剂量或改用其需要重新设置限度剂量或改用其他方法他方法经典的急性毒性实验方法经典的急性毒性实验方法ldld5050值的意义值的意义用于比较药物毒性大小用于比较药物毒性大小用于计算用于计算titi（治疗指数）（治疗指数）ldld5050/ed/ed5050为设置为设置i i期临床试验的起始剂量提供依据期临床试验的起始剂量提供依据ldld5050法的不足法的不足动物用量大动物用量大观察重点

10、观察重点死亡死亡 ldld5050值受较多因素的影响，差别可达值受较多因素的影响，差别可达2.442.44 8.388.38倍倍 ldld5050的意义不如的意义不如noaelnoael和和mldmld动物动物种类：小鼠种类：小鼠体重：体重：1818 22 g/22 g/只只分组：一般分组：一般6 6组组每组动物数：每组动物数：1010 2020只（每组动物数相只（每组动物数相等）等）性别：雌、雄各半性别：雌、雄各半剂量组剂量组最高剂量：达到或接近使动物最高剂量：达到或接近使动物100%100%死亡死亡最低剂量：达到或接近动物最低剂量：达到或接近动物0%0%死亡死亡中间设中间设3 3个剂量组个

11、剂量组另设对照组另设对照组剂距：剂距：0.600.60 0.900.90，常用，常用0.70 0.70 0.80.8 各组间成等比级数各组间成等比级数给药容量：给药容量：0.2 0.2 mlml10gbw10gbw灌胃最大容量可达灌胃最大容量可达0.8 0.8 mlml/ /只只观察观察观察期观察期1414天天观察重点：死亡观察重点：死亡体重体重征状征状结果：分性别根据各剂量组的死亡率用结果：分性别根据各剂量组的死亡率用blissbliss法计算法计算ldld5050动物：首选大鼠动物：首选大鼠剂量：剂量：5 5、5050、500500和和2000 2000 mg/kgmg/kg观察终点：明显

12、的毒性反应观察终点：明显的毒性反应实验：实验： 预试预试 正式实验正式实验预试预试动物：雌性，每次动物：雌性，每次1 1只只剂量：根据资料选择初试剂量或剂量：根据资料选择初试剂量或500 500 mg/kg 2000 mg/kgmg/kg 2000 mg/kg 50 mg/kg 50 50 mg/kg 50和和500500的中间剂量的中间剂量 5 mg/kg5 mg/kg死亡存活死亡存活预试预试两剂量间隔至少两剂量间隔至少2424小时小时观察期至少观察期至少7 7天天正式实验正式实验动物：至少动物：至少1010只，雌、雄各半只，雌、雄各半剂量：根据预试，选择可产生明显毒性剂量：根据预试，选择可

13、产生明显毒性但不引起死亡的剂量但不引起死亡的剂量正式实验正式实验结果判断结果判断剂量剂量5505002000存活存活2000无严重急性无严重急性毒性危险性毒性危险性存活存活100%无无明显毒性明显毒性用用50 mg实验实验用于用于500 mg实验实验用用2000 mg实实验验主要用于：主要用于：口服化学药物的急性毒性试验口服化学药物的急性毒性试验动物死亡发生于给药后动物死亡发生于给药后1 12 2天内的药物天内的药物优点：节省动物优点：节省动物动物动物种类：啮齿类，一般选用大鼠种类：啮齿类，一般选用大鼠性别：单一性别，一般选用雌性性别：单一性别，一般选用雌性周龄：实验时周龄：实验时8 8121

14、2周周实验实验限度实验：适用于毒性可能较小的受试物限度实验：适用于毒性可能较小的受试物主实验：适用于估计有明显毒性的受试物主实验：适用于估计有明显毒性的受试物2000 mg/kg2000 mg/kg剂量水平限度试验剂量水平限度试验动物数：最多动物数：最多5 5只只方法：每次方法：每次1 1只动物给药，量动物间隔只动物给药，量动物间隔 48h48h，给药后观察，给药后观察1414d d2000 mg/kg2000 mg/kg试验试验结果结果 x ooox ooo oxoxx ooxo oxoxx ooxo oxxx oxxoo oxxx oxxoo : : : :进入主实验进入主实验 ld502

15、000 mg/kgld502000 mg/kg5000 mg/kg5000 mg/kg剂量水平限度试验剂量水平限度试验方法：方法： 结束结束 结果判断：同结果判断：同2000 2000 mg/kgmg/kg存活存活 全存活全存活非全存活非全存活动物数：动物数：1010只左右只左右剂量序表剂量序表 1.751.75、5.55.5、17.517.5、5555、175175、550550、2000 2000 mg/kgmg/kg 1.75 1.75、5.55.5、17.517.5、5555、175175、550550、17501750、5000 mg/kg5000 mg/kg给药，每次一只动物给药给药，每次一只动物给药起始剂量：序表中低于但接近起始剂量：序表中低于但接近ldld5050估计估计值的剂量，或从值的剂量，或从175 mg/kg175 mg