棉籽样本中苯肽胺酸残留试验

1、本页为“7毕业论文目录（1页或若干页）”，点击菜单“USTB本科论文各部分”中的本部分菜单进行相应操作。本提示信息为非打印信息，可一直保留，不影响打印。目 录摘 要IAbstractIII插图或附表清单VII注释说明清单IX1 引 言11.1研究背景21.2研究意义21.3研究内容21.4研究方法22棉籽中苯肽胺酸的分析方法42.1方法原理42.2仪器设备及型号42.3供试物和对照物信息42.3.1有效成分概述42.3.2供试农药52.3.3对照物信息52.4试剂与材料62.4.1试剂62.4.1材料62.5溶液配制62.5.1提取溶液配制62.5.2流动相配制62.5.3标准溶液配制72.6

2、检测步骤72.6.1提取72.6.2净化72.6.3仪器检测72.6.4结果计算82.7检测方法确证92.7.1添加回收率试验92.7.2定量限92.7.3标准曲线92.7.4数据表格92.8检测方法的有效性评价103田间棉籽样本中苯肽胺酸残留试验113.1试验时间113.2试验地点113.2.1土壤类型113.2.2气候条件123.2.3前茬作物、农药使用历史143.3供试作物及品种143.4施药方法和器具143.5田间管理153.6最终残留试验设计153.6.1试验小区153.6.2施药剂量、间隔、次数和时期153.6.3田间样品采样153.7实验室样品制备与储藏153.8残留物163.8

3、.1残留物163.8.2检测方法概述163.8.3质控样品163.8.4定性方法和定量方法163.9试验结果173.10结论173.10.1试验结果分析173.10.2合理使用建议184棉籽中苯肽胺酸的储藏稳定性试验194.1试验设计194.2试验步骤194.2.1样品制备194.2.2储备条件194.2.3取样194.2.4检测方法194.3试验结果204.3.1数据处理204.3.2添加回收率试验结果214.3.3储藏稳定性试验结果214.4讨论224.5结论225 20%苯肽胺酸可溶试剂在棉花上膳食风险评估235.1数据来源235.2评估目的235.3评估依据235.3.1技术规范235

4、.3.2评估方法235.4农药毒理学评估245.5农药残留化学评估245.5.1残留分析方法245.5.2样品储藏稳定性255.5.3农作物中农药残留试验255.6暴露评估265.6.1方法简述265.6.2计算国家估算每日摄入量（NEDI）265.7结果286 结 论29参考文献37附录A9在学取得成果11致 谢13- III -本页为“10毕业论文正文页（若干页）”，点击菜单“USTB本科论文各部分”中的本部分菜单进行相应操作。本提示信息为非打印信息，可一直保留，不影响打印。1 引 言1.1 研究背景人体内进入农药的方式有三种：一是无意间接触到了大量的农药，例如不知情服入农药；二是长时间碰

5、触沾染了一定量的农药，例如长时间使用农药的人和在农药厂工作的人；三是在平时生活的环境以及食品残留存在农药。 而食品残留的农药是人们体内进入农药的主要原因，环境中的农药可以聚集在一起，进入人体内，对人体产生危害。农药进入人体内后产生的危害主要有三种：一是急性中毒，当农药大量进入人体内时，人体在很短的时间就会出现极为严重的病情，极有可能造成人的死亡。二是慢性危害，长时间碰触沾染了一定量的农药或者食用的食品上有过量的农药残留，农药将在人体内增多堆积在一起，这样长时间下来也会对人体产生危害。三是导致癌变、产生畸形、造成基因突变。对作物使用苯肽胺酸有五个显著作用：一是能促进作物的生长发育；二是能使作物成

6、熟，花朵成型；三是使作物的果实可以安稳在作物上生长，减少果实在成熟前掉落；四是使果实长得更加饱满，重量更大；五是使作物可以更好的抵抗不良生长环境。1.2 研究意义中国未制定苯肽胺酸在棉籽上的最大残留限量。CAC、欧盟、美国和澳大利亚等国家和组织也未制定苯肽胺酸在棉籽上的最大残留限量。为了确认20%苯肽胺酸可溶试剂在棉花上的残留是否超出允许摄入量危害人体健康，进行了20%苯肽胺酸可溶试剂在棉花上的残留试验。1.3 研究内容本项目通过开展20%苯肽胺酸可溶液剂在8地棉花中的田间试验，利用确证的残留检测方法检测田间棉籽样本中苯肽胺酸的残留量，为20%苯肽胺酸可溶液剂提供棉花田间的合理使用建议。1.4

7、 研究方法使用甲酸化乙腈-水混合溶液来提取样本，提取完后进行盐析使苯肽胺酸的溶解度降低沉淀出来，再将苯肽胺酸洗脱下来，完成萃取净化，最后开展HPLC-MS/MS质谱检测。2 棉籽中苯肽胺酸的分析方法2.1 方法原理使用甲酸化乙腈-水混合溶液来提取样本，提取完后进行盐析使苯肽胺酸的溶解度降低沉淀出来，再将苯肽胺酸洗脱下来，完成萃取净化，最后开展HPLC-MS/MS质谱检测。2.2 仪器设备及型号Agilent 1290HPLC-6470MS/MS； 超声波清洗器，KQ500DE型；。离心机，TG16B；离心机，DD5；电子天平（0.0001g），FA1004型；电子天平（0.01g），DT500

8、E型；涡旋振荡器，QL-861型；电热恒温鼓风干燥箱，DHG-9123A型；其它实验室常用设备。2.3 供试物和对照物信息2.3.1 有效成分概述中文通用名：苯肽胺酸英文通用名：N-phenylphthalamic acid（Phthalanillic acid）化学名称：2-(phenylaminocarbonyl)-benzoic acid分子式：C14H11NO3CAS 号：4727-29-1分子量：241.24g/mol物理化学特性：苯肽胺酸原药为白色结晶粉末，浓度97%以上，熔点为170-172（乙醇），其在水中的溶解度为20mg/L（20），易溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙腈。在中性介质

9、中状态稳定，在强酸或强碱环境中将会水解。在高于100的条件下将会缓慢分解，或在紫外照射下得到N-苯基邻苯二甲酰亚胺。pKa为2-3。以上数据信息来自Pesticide Manual。2.3.2 供试农药农药名称：20%苯肽胺酸可溶液剂封样号：陕试Z20190004剂型：可溶液剂有效成分及含量：苯肽胺酸，20%试验成分：苯肽胺酸外观：浅黄色无刺激性气味液体包装：瓶装规格：200ml/瓶生产日期：2018年09月25日有效期至：2020年09月24日储存条件：常温避光来源：陕西上格之路生物科学有限公司2.3.3 对照物信息中文通用名：苯肽胺酸英文通用名：N-phenylphthalamic aci

10、d（Phthalanillic acid）化学名称：2-(phenylaminocarbonyl)-benzoic acid2-(苯基氨基甲酰基)苯甲酸 分子式：C14H11NO3CAS 号：4727-29-1分子量：241.24纯度：99.9%批号：ALT011150生产日期：2017年12月21日有效期至：2019年12月20日储存条件：室温生产单位：A ChemTek Ink检验单位：A ChemTek Ink2.4 试剂与材料2.4.1 试剂乙腈，分析纯，天津市津科精细化工研究所；氯化钠，分析纯，国药集团化学试剂有限公司；柠檬酸，天津市光复科技发展有限公司；柠檬酸氢二钠水合物，源叶生物

11、有限公司；乙腈，色谱纯，迈瑞达科技有限公司；水，色谱纯；甲酸，色谱纯，北京迪马科技有限公司。2.4.2 材料C18（十八烷基硅烷键合硅胶），PSA（N-丙基乙二胺），天津博纳艾杰尔科技有限公司；离心管（5mL）、离心管（50mL）。2.5 溶液配制2.5.1 提取溶液配制通过移液管，向装有500mL分析纯乙腈的棕色玻璃瓶中装入2mL色谱纯甲酸，盖上瓶盖确保密封好不会漏出后，将玻璃瓶反复倒转并在过程中进行振荡，重复三次，完成后放入超声波中超声5min，超声结束后贴好标签放到储存试剂的柜子里，以便之后使用。另需装好一瓶超纯水，贴好标签后同样放入柜子里以便之后使用。2.5.2 流动相配制有机相配制方

12、法：将色谱溶剂直接移入有机相瓶中，使用的量筒必须是干燥没有水的条件。水相配制方法：通过移液管向装有300mL纯水的流动相玻璃瓶中移入0.3mL色谱纯甲酸，超声15min进行脱气处理，超声时要将瓶盖松开。将流动相倒入专用的储存瓶后，贴好标签放到储存试剂的柜子里，以便之后使用。2.5.3 标准溶液配制称取10.0mg苯肽胺酸标准品于10mL容量瓶中，使用乙腈将其溶解，并定容至10mL，得到浓度为999 mg/L苯肽胺酸标准储备液，放置于4。用乙腈梯度稀释至100、10、1、0.1 mg/L，放置于4，用于添加回收试验。待前处理方法确认后，配制棉籽基质匹配标准溶液，使用提取的空白基质溶液溶液来配制，

13、共需要配制四个浓度的溶液，浓度分别是0.025mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.5mg/L和1mg/L。2.6 检测步骤2.6.1 提取准确称取5.00g粉碎的棉籽样品，需要精确到0.01g，称取完成后装入50mL聚四氟乙烯离心管中，装入完成后向离心管中加入适量的标准溶液，静止30min后加入10mL0.4%甲酸乙腈和5mL纯水，涡旋1min，放置在-20冰柜中低温冷藏30min，加入3gNaCl、1g柠檬酸和0.5g柠檬酸氢二钠水合物，涡旋1min，4000rpm离心3min。2.6.2 净化取1mL上清液移往预先加有50mgPSA和50mgC18的5mL离心管中，再使用涡旋振

14、荡器进行1分钟的涡旋，完成涡旋后进行最高转速为10000的离心，为时三分钟。将上清液通过孔径为0.22m的滤膜，过滤完成后移入自动进样瓶中，等待进行HPLC-MS/MS检测。2.6.3 仪器检测液相色谱柱：Agilent Poroshell 120 EC-C18column（3.050 mm, 2.7m）；柱温：30；流动相：乙腈：0.1%甲酸水=80:20 (v:v)；流速：0.35mL/min；进样量：5L；干燥气温度：300；干燥气流速：5L/min；雾化气压力：45 psi；检测方式：多重反应监测（MRM），如下表：名称 保留时间 定量离子 定性离子 碎裂电压 碰撞能量 离子化方式 （

15、min） （V） （eV）苯肽胺酸 0.72 240.1195.9 240.1117.9 105 195.9/10 负离子模式 117.9/252.6.4 结果计算添加回收率定量计算公式为：回收率R（%）=CCs100%，该方法为使用基质匹配标准溶液单点定量法，公式中：C最终测定浓度，单位为mg/kg；Cs添加浓度，单位为mg/kg。最终测定浓度（C）计算公式为：C =AC0VV0V1mA0，公式中：A添加样品峰面积，单位为；A0标准溶液峰面积，单位为；C0标准溶液浓度，单位为mg/kg；V最终定容体积，单位为mL；V1分取体积，单位为mL；V0提取液体积，单位为mL；m样品重量，单位为g。相

16、对标准偏差RSD（%）计算公式为：RSD=SDR100%，公式中：SD标准偏差； R添加回收率试验同一浓度n个平行的平均值。 R=(R1+R2+Rn）nSD=（R1R)2+（R2R)2+(RnR)2n1标准曲线使用Excel中插入表格拟合，线性方程为y=ax+b，公式中：y峰面积；x标准溶液浓度；a线性方程斜率；b线性方程截距。线性相关系数r=R2。本次试验将使用Excel来处理数据并进行理论分析。2.7 检测方法确证2.7.1 添加回收率试验将苯肽胺酸标准溶液添加到空白棉籽样品中，并且是添加三档浓度的标准溶液，按上述条件分析检测，结果如下表所示，苯肽胺酸在棉籽中的添加回收率在84%-107%

17、之间。将每个添加浓度重复5次试验，这样可以减少试验误差，确保试验结果可靠，得到苯肽胺酸在不同添加浓度中的RSD都7.7%，结果如下表所示。2.7.2 定量限苯肽胺酸在棉籽中的定量限为0.05mg/kg，其中：方法定量限最低添加浓度。2.7.3 标准曲线苯肽胺酸在棉籽中的基质匹配标准曲线下图所示。苯肽胺酸棉籽基质匹配标准曲线线性方程为y =12963x-242.33，相关系数r = 0.9966。2.7.4 数据表格农药名称 添加浓度 回收率（%）1 2 3 4 5 平均 RSD（%） （mg/kg） 0.05 94 97 101 88 84 93 7.7苯肽胺酸 0.1 107 104 101

18、 100 105 103 2.5 0.5 106 107 107 102 103 105 2.4浓度 峰面积1 2 3 平均值mg/L 0.025 251 262 280 264 0.05 499 483 488 490 0.1 982 1018 974 991 0.2 2075 2053 1936 2021 0.5 6362 6546 6192 63672.8 检测方法的有效性评价农作物中农药残留试验准则中规定的添加回收率要求如下表表所示。苯肽胺酸在棉籽中0.05mg/kg添加水平的回收率为84%-101%，RSD=7.7%，在0.1mg/kg添加水平的回收率为100%-107%，RSD=2

19、.5%，在0.5mg/kg添加水平的回收率为102%-107%，RSD=2.4%。添加回收率的要求在农作物中农药残留试验准则中的规定如表所示：添加浓度C 回收率R 相对标准偏差RSD（mg/kg） （%） （%）10.1 70-110 150.1C0.01 70-120 200.01C0.001 60-120 300.001C 50-120 35农作物中农药残留试验准则中规定，当不存在MRL值或是MRL大于0.01 mg/kg时，LOQ一般在0.01mg/kg-0.05mg/kg并小于等于已制定的MRL值，中国未制定棉籽中苯肽胺酸的临时最大残留限量。对比农作物中农药残留试验准则中规定的单点定量

20、要求，可知基质匹配标准曲线的线性相关系数0.99能满足准则的要求。所以，所建立的检测方法经过试验检测，确定能满足农作物中农药残留试验准则中规定的线性度、准确度、精密度和灵敏度要求，即表明该检测方法适用于苯肽胺酸在棉籽中的残留分析研究。3 田间棉籽样本中苯肽胺酸残留试验3.1 试验时间甘肃省庆阳市：2019年6月23日-2019年9月16日山西省晋中市：2019年7月31日-2019年10月25日河北省邢台市：2019年6月16日-2019年8月26日山东省济南市：2019年7月10日-2019年9月12日江苏省南京市：2019年8月15日-2019年10月9日安徽省宿州市：2019年7月15日

21、-2019年10月6日湖北省仙桃市：2019年6月27日-2019年8月17日湖南省长沙市：2019年7月23日-2019年9月18日3.2 试验地点甘肃省庆阳市正宁县南住村；山西省晋中市榆次区东阳镇东阳村；河北省邢台市宁晋县中曹乡孙村；山东省济南市章丘区明水街道河南村；江苏省南京市江宁区淳化街道滨淮社区蔡家墩村；安徽省宿州市萧县孙圩子乡王庄村；湖北省仙桃市通海口镇马套村；湖南省长沙市春华镇龙王庙村。3.2.1 土壤类型甘肃省庆阳市为粘土，pH 7.4，有机质含量2.0%；山西省晋中市为壤土，pH 8.52，有机质含量1.4%；河北省邢台市为砂土，pH 7.0，有机质含量25%；山东省济南市为

22、壤土，pH 7.1，有机质含量1.05%；江苏省南京市为黄棕壤土，pH 6.93，有机质含量1.82%；安徽省宿州市为砂壤土，pH 7.4，有机质含量1.14%；湖北省仙桃市为油砂土，pH 6.4，有机质含量2.07%；湖南省长沙市为粘土，pH 5.4，有机质含量2.70%。3.2.2 气候条件甘肃的气候多变，类型多种多样。在甘肃的南部地区到北部地区共有四种气候类型。受到季风的影响，全年的降水量有50%-70&集中在每年的夏季，即每年的6月份至8月份。全省各地的年降水量大约在36-724毫升，从乌鞘岭向西方向降雨量明显降低，从陇南丘陵地带和祁连山以东降雨量稍多，从东南地区向西北地区逐渐减少。全

23、省大部分地区气候干燥，干旱地区和半干旱地区加起来占据了全省总面积的75%。在甘肃地区也存在许多气候灾害，例如冰雹、沙尘暴等。全省无霜期也在不同地区有显著差别，在陇南河谷地区无霜期明显较长，而在甘南高原无霜期是全省最短的地区。全省多数地区处于高海拔，年降雨量大约300毫升。山西省处于我国的内陆地区，由于受到地理环境、气候条件等因素的影响，山西的气候基本特征是季节分界明显、雨热并行、太阳光照射充沛、南部地区和北部地区的气候有很大差别、夏季和冬季气温温差大、白天和晚上温差大。山西省各地的气温总的来说是北部地区高于南部地区、盆地气温高于高山气温，年平均气温范围为4-14；全省各地每年的平均雨量大约在3

24、58621毫米之间，其中60%降雨量在夏季，降雨量在季节上来看分布非常不均匀，并且全省雨量分布受到地理环境的影响尤其大。河北省内的大多数地区季节分界明显。年平均降雨量大约484毫米，在省内降雨的分布特征为东南地区较多，而西北则比较少。四季分界明显，1月份的平均温度低于3，而在7月份的平均温度可以达到18至27。河北省全年的日照小时数大约为2303小时，全年的无霜期大约有81-204天。河北平原区属于华北平原的一部分，按平原地势形成的原因可分为三类地貌类别，平原地区的面积占河北省总面积的43.4%，共有81459平方公里。山东的气候暖和适宜，季风刚好。降雨集中，雨热出现在一个季节，春秋短暂，另两

25、个季节则较长。全年无霜期由东北沿岸地区向西南地区增多，不同地区的无霜期在200天左右，最短的地区通常是180天，最长的地区通常是220天左右。年平均气温大约为1114，山东省气温温差大，并且不同的地区温差也有差异，东西地区的气温温差大于南北地区。山东省太阳光照充沛，光照时数年均2500小时左右的光热条件可满足一年两茬农作物的需要。年平均降雨量一般而言在550950毫米之间，其中60%-70%的降雨量集中在夏季，降雨量地区分布由东南地区向西北地区逐渐减少。江苏气候温暖宜人，雨量较为适量，四季气候分界明显。江苏各地的平均气温大约在13-16，不同地区的气温差异不明显，但总的来说是由东北地区向西南地

26、区逐渐升高。最冷的1月平均气温为零下1.0-3.3，此时江苏省的等温线与纬度呈现平行关系，由南部地区向北部地区逐渐减少；大部分地区7月为最热的月份，平均气温为26-28.8，此时江苏省的等温线与海岸线呈现平行关系，内陆地区的温度高于沿海地区。 安徽省的气候季风突出，四季分界明显，春季气候温和宜人，秋季高温，春秋两季是由冬到夏、由夏到冬的过渡期，夏季雨水集中，秋季高温。无霜期全年大约占200-250天。年平均气温大约为14-17，但在1月平均气温处于零下，在7月平均气温接近30。全年降雨量南部地区较少量而北部地区比较多，并且在山区比较多而在平原以及丘陵地区比较少，全年平均降雨量在773-1670

27、毫米，其中夏季降雨量占40%-60%。湖北省光能、热能充沛，全省大部分地区太阳年辐射总量为90千卡/平方厘米左右，多年平均实际日照小时数为1600小时左右，最短1100小时左右，最长2150小时左右。湖北省无霜期长，雨量充沛，雨热并行，全省年平均气温16左右，降水分布季节性明显，一般夏季比较多，降水量500毫米左右，冬季比较少，降雨量110毫米左右。湖北省的土壤类型主要有三种，分别是稻田黄土、黄褐土和黄棕壤。湖南省的气候具有三个特点：一是光、热、水资源丰富，且这三个特点的高值多为同步性。二是一年中的气候变化较大，冬季寒冷，夏季炎热，春季气温变化多，秋季气温急剧下降，春夏雨水较多，秋冬气候比较干

28、燥。年间气候变异性也很大。三是垂直气候变化最明显的地区是三面环山的地区。尤其是湘西、湘南的山区更显眼。年平均气温在17左右，在最冷的冬季，即一月份，平均气温也高于4，年平均日温基本上高于0，低于0的天数不足10天。春季和秋季的平均气温大多在17左右，春季的平均气温略低于秋季。而夏季平均气温主要在27左右，在衡阳地区的平均气温可达到30左右。湖南热量充沛，大部地区日平均气温稳定在0以上，其产生的活动积温为6100左右，最低为5600左右，最高为6800左右；10以上的气温产生的活动积温在5400左右，最低为5000左右，最高为5840左右，持续时间为238-256天；15以上的气温产生的活动积温

29、则在4600，最低为4100左右，最高为5100左右，持续时间为180-208天；无霜期为253-311天。3.2.3 前茬作物、农药使用历史甘肃省庆阳市：前茬作物为小麦，种植时间为2018年10月，种植期间未施药及化肥；山西省晋中市：前茬作物为花生，种植时间为2018年4月，种植期间使用百菌清；河北省邢台市：前茬作物为玉米，种植时间为2018年6月，种植期间使用40%氧化乐果；山东省济南市：前茬作物为棉花，种植时间为2018年9月，种植期间使用联苯菊酯；江苏省南京市：前茬作物为马铃薯，种植时间为2018年9月，种植期间未施药，施用化肥尿素、硝基复合肥、羊羹；安徽省宿州市：前茬作物为青蒜，种植

30、时间为201年11月，种植期间未施药，施用化肥磷酸二铵；湖北省仙桃市：前茬作物为棉花，种植时间为2018年5月，种植期间使用阿维菌素和杀螨灵；湖南省长沙市：前茬作物为甘蓝，种植时间为2018年12月，种植期间使用四唑虫酰胺悬浮剂。3.3 供试作物及品种棉花：甘肃省庆阳市：酒棉19山西省晋中市：晋棉44河北省邢台市：高抗239山东省济南市：鲁棉研15江苏省南京市：鲁棉研1号安徽省宿州市：冀棉958湖北省仙桃市：国欣棉16号湖南省长沙市：湘杂棉8号3.4 施药方法和器具施药器具：电动喷雾器，移液管，烧杯，量筒等。施药方法：每1ml制剂兑1kg水，将混合物通过玻璃棒手动混匀，使制剂和水充分混合，并使

31、热量均匀散开，混匀后倒入喷雾器中，用适量的自来水分洗涤烧杯，应顺着烧杯内壁冲洗，并进行充分震荡保证烧杯残留的试剂可以转移至喷雾器中，共洗涤三次以提高洗涤效果减少误差，转移至喷雾器完成后，根据作物生长状态加入适量的自来水，手动摇动1min。匀速在试验小区内往返喷洒一次。3.5 田间管理按当地棉花栽培管理模式管理，试验期间禁止使用试验外农药，如必需使用，应与项目负责人沟通，由项目负责人评估药物使用对试验的完整性和偏离的影响，作出决定并给出解决方案。3.6 最终残留试验设计3.6.1 试验小区按农作物中农药残留试验准则（NY/T788-2018）设置50的试验小区，另外设置对照小区。3.6.2 施药

32、剂量、间隔、次数和时期施药剂量为制剂量1000倍液(200 mg a.i./kg)，于棉花现蕾初期、初花期各施药一次，小区面积50。棉花收获时采集样本。另设清水空白对照。3.6.3 田间样品采样采样时佩戴一次性手套，并且每采集完一个样品就应当更换一次手套。随机在试验小区内至少12点收取2份棉花样本，应保证脱棉后重量大于1kg，装入样本容器中，进行包扎并保证包扎妥当不会漏出。小区边缘0.5m内不采样。3.7 实验室样品制备与储藏棉籽样本：先脱棉获取棉籽，然后将每份棉籽充分混匀，取两份样本，每份100g，分别装入封口样本容器中，确定封口完成不会漏出后贴好标签并分类标记，完成后贮存在温度为-20的环

33、境中。根据植物源性农产品中农药残留稳定性试验准则(NY/T3094-2017）规定，对于样品中农药稳定性不确定的情况，设计0d、2周、4周、8周、16周的储藏稳定性试验，试验结果表明，苯肽胺酸在棉籽中冷冻储藏稳定期为16周（112d），所有样品在104天内检测完成。3.8 残留物3.8.1 残留物GB2763-2019“食品安全国家标准食品中农药最大残留限量”和JMPR报告均未对苯肽胺酸的残留物定义进行规定。本项目检测成分为苯肽胺酸。3.8.2 检测方法概述使用甲酸化乙腈-水混合溶液来提取样本，提取完后进行盐析使苯肽胺酸的溶解度降低沉淀出来，再将苯肽胺酸洗脱下来，完成萃取净化，最后开展HPLC

34、-MS/MS质谱检测。3.8.3 质控样品每批检测样本都设置两个质控样本并添加浓度为0.05mg/kg的苯肽胺酸。根据农作物中农药残留试验准则（NY/T788-2018）中规定的0.05mg/kg添加回收率和相对标准偏差的范围，质控样本添加回收率在96%-99%之间满足该准则，这表明该检测方法稳定可靠，因此田间试验样本检测结果可靠。具体数据见下表。进样日期添加浓度 （mg/kg）基质回收率（%）12平均2019-11-290.05棉籽9699983.8.4 定性方法和定量方法将每份棉籽样本转移至50mL离心管中，用10mL0.4%甲酸乙腈分两次洗涤样品袋，洗涤液移往离心管中，再加入5mL纯水，

35、再使用涡旋振荡器进行1分钟的涡旋，放置在-20冰柜中低温冷藏30min，加入3gNaCl、1g柠檬酸和0.5g柠檬酸氢二钠水合物，再使用涡旋振荡器进行1分钟的涡旋，完成涡旋后进行最高转速为40000的离心，为时三分钟，取1mL上清液移往预先添加了50mgPSA和50mgC18的5mL离心管中，再使用涡旋振荡器进行1分钟的涡旋，完成涡旋后进行最高转速为10000的离心，为时三分钟。将上清液通过孔径为0.22m的滤膜，过滤完成后移入自动进样瓶中，等待进行HPLC-MS/MS检测。3.9 试验结果2019年，甘肃庆阳、山西晋中、河北邢台、山东济南、江苏南京、安徽宿州、湖北仙桃、湖南长沙一年8地的最终

36、残留试验结果表明，20%苯肽胺酸可溶液剂调节生长、增产，制剂用药量1000倍液（200mg a.i./kg），于棉花现蕾初期、初花期开始施药，各施药1次，棉花收获期采集样本。所采集的棉籽样本中，苯肽胺酸的残留量0.05mg/kg。苯肽胺酸的最终残留测定结果见下表。试验地点施药量（mg a.i./kg）施药次数采收间隔期（d）最终残留量（mg/kg）12平均甘肃省庆阳市正宁县南住村2002760.050.050.05山西省晋中市榆次区东阳镇东阳村2002790.050.050.05河北省邢台市宁晋县中曹乡孙村2002640.050.050.05山东省济南市章丘区明水街道河南村2002410.05

37、0.050.05江苏省南京市江宁区淳化街道滨淮社区蔡家墩村2002480.050.050.05安徽省宿州市萧县孙圩子乡王庄村2002580.050.050.05湖北省仙桃市通海口镇马套村2002440.050.050.05湖南省长沙市春华镇龙王庙村2002490.050.050.053.10 结论3.10.1 试验结果分析农药施于环境后，其消解速率除了与农药本身性质有关外，还与环境因子如土壤质地、有机质含量、水分含量、pH、温度、微生物群落结构等有关。苯肽胺酸的施药方式为喷雾，农药大部分未直接施用在棉籽上；且施药时期为棉花现蕾初期、初花期，棉花生长过程中起到稀释作用，同时田间试验过程温度较高、

38、降雨等都对苯肽胺酸的降解起到重要作用。施药2次，苯肽胺酸在棉花中的最终残留量均0.05mg/kg。3.10.2 合理使用建议2019年，甘肃省庆阳市正宁县南住村、山西省晋中市榆次区东阳镇东阳村、河北省邢台市宁晋县中曹乡孙村、山东省济南市章丘区明水街道河南村、江苏省南京市江宁区淳化街道滨淮社区蔡家墩村、安徽省宿州市萧县孙圩子乡王庄村、湖北省仙桃市通海口镇马套村、湖南省长沙市春华镇龙王庙村一年8地的最终残留试验结果表明，20%苯肽胺酸可溶液剂调节生长、增产，制剂用药量1000倍液（200mg a.i./kg），于棉花现蕾初期、初花期开始施药，各施药1次，棉花收获期采集样本。所采集的棉籽样本中，苯肽

39、胺酸的残留量0.05mg/kg。中国未制定苯肽胺酸在棉籽上的最大残留限量。CAC、欧盟、美国和澳大利亚等国家和组织也未制定苯肽胺酸在棉籽上的最大残留限量。合理使用建议：20%苯肽胺酸可溶液剂，调节生长、增产，最高制剂用药量1000倍液（200mg a.i./kg），施药时期：棉花现蕾初期、初花期；施药方法：喷雾；施药次数：2次。4 棉籽中苯肽胺酸的储藏稳定性试验4.1 试验设计经查阅相关资料，未见关于苯肽胺酸的储藏稳定性信息。设计苯肽胺酸的储藏稳定性试验浓度为0.5mg/kg，设计取样时间间隔为0d、14d（2周）、28d（4周）、56d（8周）、112d（16周）。4.2 试验步骤4.2.1

40、 样品制备称取棉籽空白样本5.00g（精确到0.01g）于5号塑料自封袋中，为使添加浓度为0.5mg/kg，在样本中加入一定量体积的标准溶液，充分混匀，室温下敞口放置30min，共需制备10份添加样本。将添加样本和一份空白棉籽样本（约200g）贴上标签，于-182黑暗条件下储藏，于设置的采样时间按样品编号顺序采样。4.2.2 储备条件样品制备当天，将制备后的样品于-182 黑暗条件储藏。4.2.3 取样于0 d、14d（2周）、28d（4周）、56d（8周）、112d（16周）采集样品。每次采集储藏稳定性试验样品两份，空白样品（5.00g，精确至0.01g）三份。其中，两份空白样品用作质控，一

41、份空白样品用作单点基质匹配标准溶液配制和空白样本检测。4.2.4 检测方法将每份棉籽样本转移至50mL离心管中，用10mL0.4%甲酸乙腈分两次洗涤样品袋，洗涤液移往离心管中，加入5mL纯水，再使用涡旋振荡器进行1分钟的涡旋，放置在-20冰柜中低温冷藏30min，加入3gNaCl、1g柠檬酸和0.5g柠檬酸氢二钠水合物，再使用涡旋振荡器进行1分钟的涡旋，完成涡旋后进行最高转速为40000的离心，为时三分钟，取1mL上清液移往预先添加了50mgPSA和50mgC18的5mL离心管中，再使用涡旋振荡器进行1分钟的涡旋，完成涡旋后进行最高转速为10000的离心，为时三分钟。将上清液通过孔径为0.22

42、m的滤膜，过滤完成后移入自动进样瓶中，等待进行HPLC-MS/MS检测。4.3 试验结果4.3.1 数据处理添加回收率定量计算公式为：回收率R（%）=CCs100%（1），该方法为使用基质匹配标准溶液单点定量法，公式中：C最终测定浓度，单位为mg/kg；Cs添加浓度，单位为mg/kg。最终测定浓度（C）计算公式为：C =AC0VV0V1mA0（2），公式中：A添加样品峰面积，单位为；A0标准溶液峰面积，单位为；C0标准溶液浓度，单位为mg/kg；V最终定容体积，单位为mL；V1分取体积，单位为mL；V0提取液体积，单位为mL；m样品重量，单位为g。相对标准偏差RSD（%）计算公式为：RSD=S

43、DR100%（3），公式中：SD标准偏差； R添加回收率试验同一浓度n个平行的平均值。 R=(R1+R2+Rn）n（4）SD=（R1R)2+（R2R)2+(RnR)2n1（5）标准曲线使用Excel中插入表格拟合，线性方程为y=ax+b，公式中：y峰面积；x标准溶液浓度；a线性方程斜率；b线性方程截距。线性相关系数r=R2，R2为Excel线性拟合结果。残留量C =AC0VV1V0mA0（6），公式中：A添加样品峰面积；A0标准溶液峰面积；C0标准溶液浓度，单位为mg/kg；V最终定容体积，单位为mL；V1分取体积，单位为mL；V0提取液体积，单位为mL；m样品重量，单位为g。降解率计算公式如

44、下：D=C0CtC0100%（7），公式中：D将降解率，单位为；C0起始添加浓度，单位为mg/kg；Ctt时刻残留浓度，单位为mg/kg。4.3.2 添加回收率试验结果质控检测结果表明，苯肽胺酸在棉籽中0.5mg/kg浓度的添加水平上，试验过程中共测量5次，每次两个平行，平均回收率为88%-106%（见下表）。根据农作物中农药残留试验准则（NY/T788-2018）的要求，平均回收率为88%-106%满足该准则要求，表明所使用的方法是可靠的，所检测的残留量结果是正确的。4.3.3 储藏稳定性试验结果在-182储藏112d，苯肽胺酸在棉籽中残留量为0.43mg/kg，降解率为20 %，降解率小于

45、30%（见下表），说明苯肽胺酸在储藏条件下112d是稳定的。基质名称储藏期储藏试验样品质控样品储藏稳定期残留量mg/kg降解率 %添加浓度mg/kg回收率 %1212平均12平均棉籽0d0.540.520.5938890112 d（16 周）14d0.470.461312130.595979628d0.480.451113120.510610610656d0.440.441915170.599105102112d0.440.442015180.595100984.4 讨论样品从采样至样品检测结束的时间如下表所示：试验地点第一次采样日期样品检测日期 时间间隔/d甘肃省庆阳市正宁县2019-9-1

46、62019-11-2974山西省晋中市榆次区东阳镇2019-10-252019-11-2935河北省邢台市宁晋县中曹乡2019-8-262019-11-2995山东省济南市章丘区明水街道2019-9-122019-11-2978江苏省南京市江宁区淳化街道滨淮社区2019-10-92019-11-2951安徽省宿州市萧县孙圩子乡2019-10-62019-11-2954湖北省仙桃市通海口镇2019-8-172019-11-29104湖南省长沙市春华镇2019-9-182019-11-2972棉籽样品从采样至样品检测完成的最长时间间隔为104d。试验过程中，所有样品都储藏在-182条件下，储藏时间

47、小于112d，在苯肽胺酸的储藏稳定期内。因此，可认为在试验过程中，苯肽胺酸无明显降解，对检测结果无影响。4.5 结论苯肽胺酸在棉籽中储藏稳定性试验结果表明，苯肽胺酸在棉籽中，-182储藏112d是稳定的。在田间样品检测过程中，苯肽胺酸无明显降解，对检测结果无影响。5 20%苯肽胺酸可溶试剂在棉花上膳食风险评估5.1 数据来源登记作物通过中国农药信息网查询；毒理学数据查询；残留物定义查询；残留试验中值（STMR）和最高残留值（HR）来自2019年田间残留试验结果；我国居民的营养构成来自2002 年中国居民营养与健康现状。5.2 评估目的陕西上格之路生物科学有限公司申请其产品20%苯肽胺酸可溶液剂

48、在棉花上登记，然而目前并没有该产品的风险评估信息。因此，特编写该报告为20%苯肽胺酸可溶液剂在棉花上的登记提供膳食风险评估信息5.3 评估依据根据我国居民膳食消费量，结合农药毒理学和农药残留化学评估，推估计算出该农药可与每日允许摄入量作出对比的国家估算每日摄入量。若风险概率小于100%，则表明该20%苯肽胺酸可溶液剂在GAP条件下在棉花上使用是安全的，反之则不安全。5.3.1 技术规范本评估遵照农药残留风险评估指南、农作物中农药代谢试验准则(NY/T3096-2017)、农作物中农药残留试验准（NY/T 788-2018）等准则的规定进行。5.3.2 评估方法计算该农药的国家估算每日摄入量（N

49、EDI）需要结合卫生部2002年发布的中国不同人群消费膳食分组食谱中的营养组成数据和残留化学评估推荐的规范残留试验中值和已制定的最大残留限量（MRLs），得到的计算公式如下：NEDI =STMRi（STMRPi） Fi） 式中：STMRi指农药在某一食品中的规范残留试验中值；STMRPi指用加工因子校正的规范残留试验中值；Fi指般人群某一食品的消费量。一般人群某种食品的消费量参见我国城乡居民的每日食物摄入量（膳食结构）来自2002年中国居民营养与健康现状，2004年10月12日发布，其中蔬菜占每日摄入食物总量的27.8，摄取量的285.5g；粮谷类占每日摄入食物总量的39.1%，摄取量为410

50、.7g；薯类占每日摄入食物总量的4.8%，摄取量为49.5g；干豆及豆制品占每日摄入食物总量的1.6%，摄取量为16.0g；水果占每日摄入食物总量的4.8%，摄取量为49.6g；畜禽类占每日摄入食物总量的7.7%，摄取量为79.5g；奶及其制品占每日摄入食物总量的2.6%，摄取量为26.3g；蛋及其制品占每日摄入食物总量的2.3%，摄取量为23.6g；鱼虾类占每日摄入食物总量的2.9%，摄取量为30.1g；植物油占每日摄入食物总量的3.2%，摄取量为32.7g；动物油占每日摄入食物总量的0.8%，摄取量为8.7g；糖及淀粉占每日摄入食物总量的0.4%，摄取量为4.4g；食盐占每日摄入食物总量的1.2%，摄取量为12.0g；酱油占每日摄入食物总量的0.9%，摄取量为9.0g；每人每日总摄入量为1.03kg。由于茶叶、药食两用植物、调味料和食用菌的消费统计信息在上述的调查报告中没有发布，因此茶叶的数据依据与食盐数据相同，中国农科院茶叶研究所推荐人均12克茶叶来进行评估；食用菌的数据依据与水果数据接近，上海农科院食用菌研究所建议人均42克食用菌来进行评估；药食两用植物、调味料的数据参考酱油的摄入量来进行评估。5.4 农药毒理学评估将毒物代谢动力学试验和毒理学试验结果送往中国华中科技大学同济医学院