氨茶碱加样回收率

1、实验二实验二 氨茶碱加样回收率氨茶碱加样回收率 方法学考察方法学考察目的：证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求目的：证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求。 准确度、准确度、精密度（重复性、中间精密度和精密度（重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。范围和耐用性。验证内容验证内容 一、一、 准确度（准确度（accuracyaccuracy） 准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用百分回收率表示。值接近的程度，用百分回收率表示。 原料药原料药可用可用已知纯

2、度的对照品或样品已知纯度的对照品或样品进行测定，进行测定，或用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的或用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较。结果进行比较。 制剂制剂可用可用含己知量被测物的各组分混合物含己知量被测物的各组分混合物进行进行测定，即采用在测定，即采用在空白辅料空白辅料中加入中加入原料药对照品原料药对照品的方的方法。法。 如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定。已知量的被测物进行测定。 中药分析中药分析的准确度一般用加样回收试验衡量。中的准确度一般用加样回收试验衡量。中药回收率一般要求在药回收率一

3、般要求在9595105%105%范围内，有些方法操范围内，有些方法操作步骤繁多时，可要求在作步骤繁多时，可要求在9090110%110%范围内，范围内，rsdrsd一般一般在在3%3%以内。以内。 测定回收率测定回收率r r（recoveryrecovery）的具体方法可采用）的具体方法可采用“回收试验法回收试验法”和和“加样回收试验法加样回收试验法”。 回收试验回收试验 空白空白+ +已知量已知量a a的对照品（或标准品）测定，测定的对照品（或标准品）测定，测定值为值为m m。%100amr 加样回收试验加样回收试验 已准确测定药物含量已准确测定药物含量p p的的真实样品真实样品+ +已知量

4、已知量a a的对的对照品（或标准品）测定，测定值为照品（或标准品）测定，测定值为m m。%100apmr数据要求数据要求 规定的范围内，至少用规定的范围内，至少用9 9次测定结果评次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次。用价，如制备三个不同浓度样品各测三次。用偏差（偏差（d d）、标准偏差）、标准偏差(sd)(sd)、相对标准偏差相对标准偏差(rsd)(rsd)（变异系数）表示。（变异系数）表示。 偏差（偏差（d d）：测量值与平均值之差）：测量值与平均值之差xxdi标准（偏）差（标准（偏）差（sdsd或或s s）12nxxsi相对标准（偏）差（相对标准（偏）差（rsdrsd），也称变

5、异系数（），也称变异系数（cvcv）%100 xsrsd紫外可见分光光度计紫外可见分光光度计主要结构及功能主要结构及功能 紫外分光光度计主要由紫外分光光度计主要由光源光源、单色器单色器、样品池样品池（吸收池）、（吸收池）、检测器检测器及及放大器和记录显示系统放大器和记录显示系统所组成所组成。1 1、光源、光源钨灯丝钨灯丝和和氢灯氢灯两种两种钨灯丝适宜使用的范围是钨灯丝适宜使用的范围是360nm-1000nm360nm-1000nm；氢灯或氘灯适宜使用的范围是氢灯或氘灯适宜使用的范围是150nm-360nm150nm-360nm。因为玻璃会吸收紫外光，灯泡必须用石英材料。因为玻璃会吸收紫外光，灯

6、泡必须用石英材料。 单色器是指能单色器是指能将将来自光源的来自光源的复色光复色光按波长长短顺按波长长短顺序序色散色散为为单色光单色光，并能任意调节波长的装置。常由棱，并能任意调节波长的装置。常由棱镜和光栅组成。经棱镜或光栅色散成一系列由单色光镜和光栅组成。经棱镜或光栅色散成一系列由单色光带组成的光谱，逐个从单色器的出口狭缝射出。带组成的光谱，逐个从单色器的出口狭缝射出。 棱镜由棱镜由玻璃玻璃或或石英石英制成，制成，玻璃玻璃色散能力大，但色散能力大，但可可吸收紫外光，吸收紫外光，只能用于只能用于350-820nm350-820nm的波长测定。样品的波长测定。样品池和参比池需要配对（即完全相同的两

7、个），其厚池和参比池需要配对（即完全相同的两个），其厚度（光束通过溶液的路径长度）一般为度（光束通过溶液的路径长度）一般为1mm1mm、2mm2mm、5mm5mm、1cm1cm、2cm2cm、4cm4cm。如在定量测定时，所使用的。如在定量测定时，所使用的一组样品池要完全一致。一组样品池要完全一致。 2 2、单色器（分光系统）、单色器（分光系统）3 3、样品池（参比池）、样品池（参比池） 检测器是一种光电转换设备，它将检测器是一种光电转换设备，它将光强度光强度转变为转变为电信号电信号显示出来。显示出来。5.5.测量系统测量系统 包括放大器和结果显示装置。在主机中装有微机处包括放大器和结果显示装

8、置。在主机中装有微机处理器，将测量数据显示在屏幕上。理器，将测量数据显示在屏幕上。 4.4.检测器检测器 t6t6型紫外可见分光光度计结构型紫外可见分光光度计结构操作流程操作流程一、开机自检一、开机自检初始化初始化 43%43%1.1.样品池电池样品池电池 okok2.2.滤光片滤光片 okok3.3.光源电机光源电机 okok打开仪器主机电源，开始初始化，打开仪器主机电源，开始初始化，3 3分钟左右初始化完成。分钟左右初始化完成。初始化完成后，仪器进入主菜单界面。初始化完成后，仪器进入主菜单界面。光度测量光度测量功能扩展功能扩展系统应用系统应用二、进入光度测量状态二、进入光度测量状态在上图所

9、示状态按在上图所示状态按enterenter键，进入光度键，进入光度测量界面测量界面光度测量光度测量 0.000 abs0.000 abs 250 nm 250 nm三、进入测量界面三、进入测量界面按按start/stopstart/stop键，进入样品测定界面键，进入样品测定界面 250.0nm -0.002 250.0nm -0.002 abs no. abs conc no. abs conc四、设置测量波长四、设置测量波长按按gotogoto键，在下图界面输入测量键，在下图界面输入测量的波长，例如需要在的波长，例如需要在275nm275nm测量，输测量，输入入275275，按，按ent

10、erenter键确认，仪器将自键确认，仪器将自动调整波长。动调整波长。请输入波长请输入波长:275.0nm -0.002abs275.0nm -0.002abs no. abs conc no. abs conc调整波长完成后如下图调整波长完成后如下图五、进入设置参数五、进入设置参数在这个步骤中在这个步骤中主要设置样品池主要设置样品池。按。按enterenter键进入参数设定界面，按键进入参数设定界面，按键使键使光标移动到光标移动到“试样设定试样设定”，如图所示。，如图所示。按按enterenter键确认，进入设定界面。键确认，进入设定界面。测光方式测光方式数学计算数学计算试样设定试样设定六、

11、设定使用样品池个六、设定使用样品池个数数在这个步骤中主要设置样品池。按在这个步骤中主要设置样品池。按键键使光标移动到使光标移动到“使用样池数使用样池数”，如图所示。，如图所示。按按enterenter键循环选择需要使用的样品池个数。键循环选择需要使用的样品池个数。试样室：八联池试样室：八联池样池数：样池数：2空白溶液校正：否空白溶液校正：否样池空白校正：否样池空白校正：否七、样品测量七、样品测量按按returnreturn键返回到参数设定界面，再按键返回到参数设定界面，再按returnreturn键返回到光度测量界面。键返回到光度测量界面。在在1 1号样品池内放入空白溶液，号样品池内放入空白溶

12、液，2 2号样品池内放入待测溶液。关闭好样品号样品池内放入待测溶液。关闭好样品池盖后按池盖后按zerozero键进行空白校正，再按键进行空白校正，再按strt/stopstrt/stop键进行样品测量。测量键进行样品测量。测量结果如下图所示：结果如下图所示： 275.0nm -0.002abs 275.0nm -0.002abs no. abs conc no. abs conc 1-1 0.012 1.000 1-1 0.012 1.000 2-1 0.052 2.000 2-1 0.052 2.000八、结束测量八、结束测量测量完成后按测量完成后按pringpring键打印数据，如果没有打

13、印机请记录数据。退出程键打印数据，如果没有打印机请记录数据。退出程序或关闭仪器后测量数据将消失。确保从样品池中取出所有比色皿，清序或关闭仪器后测量数据将消失。确保从样品池中取出所有比色皿，清洗干净以便下次使用。按洗干净以便下次使用。按returnreturn键直到返回到仪器主菜单界面后再关闭键直到返回到仪器主菜单界面后再关闭仪器电源。仪器电源。实验目的实验目的 了解药物在含量测定前进行加样回收率试了解药物在含量测定前进行加样回收率试 验的目的；验的目的； 掌握加样回收率试验具体方法；掌握加样回收率试验具体方法； 学习加样回收率计算方法。学习加样回收率计算方法。 掌握紫外分光光度计操作方法。掌握

14、紫外分光光度计操作方法。实验原理实验原理 任何药物在进行含量检测以前，都要对该检测方法任何药物在进行含量检测以前，都要对该检测方法的准确度、精密度及仪器灵敏度等进行考察，目的是证明的准确度、精密度及仪器灵敏度等进行考察，目的是证明采用的方法是否适合于相应的检测要求。其中准确度系指采用的方法是否适合于相应的检测要求。其中准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（用回收率（% %）表示。）表示。加样回收率试验最终反映的是测试加样回收率试验最终反映的是测试结果的准确度。结果的准确度。在测定样品时，于已知被测成分含量的供在测

15、定样品时，于已知被测成分含量的供试品中再精密加入一定量的已知纯度的被测成分对照品，试品中再精密加入一定量的已知纯度的被测成分对照品，依法测定。用实测值与供试品中含有量之差，除以加入对依法测定。用实测值与供试品中含有量之差，除以加入对照品量计算回收率。照品量计算回收率。实验仪器与材料实验仪器与材料r实验仪器：实验仪器：紫外分光光度计、精密天平、石紫外分光光度计、精密天平、石英比色皿、英比色皿、50ml50ml烧杯、玻璃棒、称量纸、烧杯、玻璃棒、称量纸、10ml10ml容量瓶、容量瓶、25ml25ml容量瓶、洗瓶。容量瓶、洗瓶。r实验材料：实验材料：氨茶碱原料、蒸馏水、氢氧化钠。氨茶碱原料、蒸馏水

16、、氢氧化钠。 0.01m naoh0.01m naoh溶液的配制：称取氢氧化钠溶液的配制：称取氢氧化钠0.4g0.4g，用蒸馏水定容至，用蒸馏水定容至1000ml1000ml，即得。，即得。实验方法实验方法步骤一：步骤一：标准品溶液的制备：标准品溶液的制备：精密称取氨茶碱标准品精密称取氨茶碱标准品12.5mg12.5mg置于置于25ml25ml容量瓶中，先用少量容量瓶中，先用少量0.01m0.01m的的naohnaoh溶液振摇使溶溶液振摇使溶解，再用该溶液定容至刻度，配成浓度为解，再用该溶液定容至刻度，配成浓度为0.5mg/ml0.5mg/ml的的标准标准储备液储备液；步骤二：步骤二：再从再从

17、标准储备液标准储备液中吸取中吸取1ml1ml，置于置于10ml10ml容量瓶中，容量瓶中，用用0.01m0.01m的的naohnaoh溶液定容至刻度，摇匀，配成浓度为溶液定容至刻度，摇匀，配成浓度为0.05mg/ml0.05mg/ml的溶液，记为的溶液，记为标准储备液标准储备液，备用。备用。步骤三：步骤三：样品溶液的制备：样品溶液的制备：从从标准储备液标准储备液中吸取中吸取200l200l，置于置于10ml10ml容量瓶中，用容量瓶中，用0.01m naoh0.01m naoh溶液定容至刻度，摇匀，溶液定容至刻度，摇匀，即得氨茶碱样品溶液，平行制备即得氨茶碱样品溶液，平行制备9 9份，再导入份

18、，再导入9 9个试管中，个试管中，并相应做好标记；并相应做好标记；步骤四：步骤四：从从9 9个试管中分别取出个试管中分别取出5ml5ml放置于放置于10ml10ml容量瓶中，容量瓶中，做好相应标记后，备用；做好相应标记后，备用；步骤五：步骤五：9 9个试管中剩余部分用于含量检测（个试管中剩余部分用于含量检测（采用紫外分光采用紫外分光光度法在光度法在275nm275nm处测定吸光度值（处测定吸光度值（a a275275），根据），根据已知标准已知标准曲线曲线求出溶液中氨茶碱浓度，并记录）。求出溶液中氨茶碱浓度，并记录）。步骤六：步骤六：再从再从标准储备液标准储备液中中分别取出分别取出0.8ml0.8ml（ 80% 80% ）、）、1.0ml1.0ml（100%100%）和）和1.2ml1.2ml（120%120%）溶液各三份，加入）溶液各三份，加入步骤步骤四四的容量瓶中，用的容量瓶中，用0.01m0.01m的的naohnaoh溶液定容至刻度，摇匀并溶液定容至刻度，摇匀并做好标记，然后采用紫外分光光度法在