4蛙心灌流课件

1、4蛙心灌流课件实验实验 6 离子和药物对蟾蜍心脏的影响离子和药物对蟾蜍心脏的影响 蛙心灌流蛙心灌流4蛙心灌流课件n心脏具有心脏具有自动节律性自动节律性。离体心脏用理化性质近似于。离体心脏用理化性质近似于血浆的生理溶液进行灌流，以保持其新陈代谢顺利血浆的生理溶液进行灌流，以保持其新陈代谢顺利进行，这种节律性可维持较长时间。进行，这种节律性可维持较长时间。n心脏正常节律性活动有赖于内外环境的相对稳定，心脏正常节律性活动有赖于内外环境的相对稳定，因此，改变灌流液成分，心脏的活动便会产生一定因此，改变灌流液成分，心脏的活动便会产生一定的变化。的变化。 实验目的及意义实验目的及意义4蛙心灌流课件v 心肌

2、细胞生物电活动的基础是心肌细胞生物电活动的基础是 钠、钾、钙等钠、钾、钙等跨膜离子流跨膜离子流。 实验目的及意义实验目的及意义 v 细胞外液中这些离子浓度的变细胞外液中这些离子浓度的变 化会对心脏的活动产生不同的化会对心脏的活动产生不同的 影响。影响。4蛙心灌流课件v调节心脏活动的调节心脏活动的神经、体液神经、体液因素对心脏活动的直接作用是神经递因素对心脏活动的直接作用是神经递质或激素与心肌细胞相应质或激素与心肌细胞相应受体受体结合，导致心脏活动的增强或减弱。结合，导致心脏活动的增强或减弱。v交感神经兴奋时，其末梢释放递质交感神经兴奋时，其末梢释放递质去甲肾上腺素，作用于心肌去甲肾上腺素，作用

3、于心肌细胞上的细胞上的受体，使心肌收缩力增强；迷走神经兴奋时，其末梢释受体，使心肌收缩力增强；迷走神经兴奋时，其末梢释放递质放递质乙酰胆碱，作用于心肌细胞膜上的乙酰胆碱，作用于心肌细胞膜上的M受体，对心肌细胞起受体，对心肌细胞起抑制作用，使心肌的自律性降低。抑制作用，使心肌的自律性降低。v特异的受体阻断剂能阻断相应的递质与受体的相互作用。特异的受体阻断剂能阻断相应的递质与受体的相互作用。 实验目的及意义实验目的及意义4蛙心灌流课件n学习离体蛙心的制备及其灌流方法。学习离体蛙心的制备及其灌流方法。n观察钙、钾等离子，异丙肾上腺素、乙酰胆碱、观察钙、钾等离子，异丙肾上腺素、乙酰胆碱、阿托品、普萘洛

4、尔等药物对心脏活动的影响。阿托品、普萘洛尔等药物对心脏活动的影响。 实验目的及意义实验目的及意义4蛙心灌流课件 实验对象与器材实验对象与器材n蟾蜍（雄性），两栖类手术器械，蟾蜍（雄性），两栖类手术器械，八木氏套管八木氏套管，蛙心灌，蛙心灌流架，蛙心夹，流架，蛙心夹，万能滑轮万能滑轮，换能器，铁支架，蛙板，换能器，铁支架，蛙板n林格溶液，林格溶液， 4 4CaClCaCl2 2，4 4KClKCl，0.010.01肾上腺素，肾上腺素，0.010.01乙酰胆碱（乙酰胆碱（AchAch），），0.1%0.1%普萘洛尔普萘洛尔， 0.1%0.1%阿托品阿托品八木氏套管八木氏套管万能滑轮万能滑轮4蛙心灌

5、流课件 实验步骤实验步骤n离体蛙心的制备离体蛙心的制备 暴露心脏：暴露心脏：取一只蟾蜍，双毁髓后背位固定于蛙板上。剪开取一只蟾蜍，双毁髓后背位固定于蛙板上。剪开胸腹部皮肤、肌肉，剪断左右乌喙骨和锁骨。将胸腹部皮肤、肌肉，剪断左右乌喙骨和锁骨。将整个胸腔暴露。整个胸腔暴露。将胸腺、心包膜、动脉膜、肝系膜去除干净，辨将胸腺、心包膜、动脉膜、肝系膜去除干净，辨认心脏结构及认心脏结构及9条重要血管的位置。条重要血管的位置。4蛙心灌流课件 实验步骤实验步骤n离体蛙心的制备离体蛙心的制备血管结扎：血管结扎：结扎右主动脉结扎右主动脉：在右主动脉下穿过两根线，分别结扎，：在右主动脉下穿过两根线，分别结扎，中间

6、剪断。中间剪断。 总结扎线总结扎线：左右肝静脉和左右肺静脉之间穿双线，其中：左右肝静脉和左右肺静脉之间穿双线，其中一条线的一端自左主动脉下方，向动物胸腔左上方穿出，一条线的一端自左主动脉下方，向动物胸腔左上方穿出，与另一端在动物胸腔左上方打一个松结，将心室拉至胸与另一端在动物胸腔左上方打一个松结，将心室拉至胸腔右下侧，当心房腔右下侧，当心房收缩上提收缩上提时于胸腔左上侧位置结扎。时于胸腔左上侧位置结扎。将两侧前腔静脉、左右肺静脉结扎在内，从结扎线以外将两侧前腔静脉、左右肺静脉结扎在内，从结扎线以外剪断。注意剪断。注意远离静脉窦远离静脉窦。 4蛙心灌流课件 实验步骤实验步骤n离体蛙心的制备离体蛙

7、心的制备插管插管：左肝静脉插管左肝静脉插管：在左右肝静脉和后腔静脉下穿线，打一个松结，：在左右肝静脉和后腔静脉下穿线，打一个松结，在左肝静脉远心端沿向心方向剪开一个楔形切口（大小约为管在左肝静脉远心端沿向心方向剪开一个楔形切口（大小约为管径的径的1/2），将装满灌流液的静脉插管（粗管）插入左肝静脉，），将装满灌流液的静脉插管（粗管）插入左肝静脉，见蛙心膨胀变白后结扎线扣。用灌流液将心脏内血液完全洗出。见蛙心膨胀变白后结扎线扣。用灌流液将心脏内血液完全洗出。左主动脉插管左主动脉插管：在左主动脉弓下穿线，打一个松结，在动脉管：在左主动脉弓下穿线，打一个松结，在动脉管壁远心端剪一个楔形切口（大小约为

8、管径的壁远心端剪一个楔形切口（大小约为管径的1/2），插入动脉插），插入动脉插管（细管），见有灌流液流出后结扎线扣。管（细管），见有灌流液流出后结扎线扣。注意动脉插管勿插注意动脉插管勿插入主动脉圆锥。入主动脉圆锥。蟾蜍心脏示意图蟾蜍心脏示意图4蛙心灌流课件n游离心脏游离心脏： 在左肝静脉和左主动脉结扎线外在左肝静脉和左主动脉结扎线外端剪断，并剪掉与心脏相连的其端剪断，并剪掉与心脏相连的其他组织，游离心脏。他组织，游离心脏。n离体心脏安放离体心脏安放：将离体心脏安放于蛙心灌流架上，将离体心脏安放于蛙心灌流架上，调整灌流液液面及动脉插管出口调整灌流液液面及动脉插管出口的高度，使灌流液既能在心脏收的

9、高度，使灌流液既能在心脏收缩时顺利搏出心脏，又能形成循缩时顺利搏出心脏，又能形成循环。环。 实验步骤实验步骤蛙心灌流装置蛙心灌流装置A：动脉插管：动脉插管 B：静脉插管：静脉插管4蛙心灌流课件* * 标本与仪器连接：标本与仪器连接：用蛙心夹在心脏舒张期夹住用蛙心夹在心脏舒张期夹住心尖部，蛙心夹上的棉线通心尖部，蛙心夹上的棉线通过万能滑轮转换后与张力换过万能滑轮转换后与张力换能器相连。能器相连。 实验步骤实验步骤4蛙心灌流课件斯氏插管法斯氏插管法斯氏插管法斯氏插管法仪器连接仪器连接4蛙心灌流课件 实验步骤实验步骤n观察离子对心脏活动的影响：观察离子对心脏活动的影响：打开软件打开软件选择实验（实验

10、选择实验（实验循环循环蛙心灌流）蛙心灌流）开开始始示波示波 开始开始记录记录 记录正常心搏曲线。记录正常心搏曲线。向静脉插管内林格溶液中向静脉插管内林格溶液中滴加滴加4CaCl2 2滴，观察心滴，观察心搏出现变化后立即搏出现变化后立即将灌流液全部吸出，用新鲜林格溶将灌流液全部吸出，用新鲜林格溶液换洗液换洗23遍后，在静脉插管内注入新鲜林格溶液，遍后，在静脉插管内注入新鲜林格溶液，使心脏恢复正常搏动；使心脏恢复正常搏动；滴加滴加4CaCl2 6滴，观察心搏出现变化后立即换洗；滴，观察心搏出现变化后立即换洗；滴加滴加4KCl 12滴，观察心搏出现变化后立即换洗。滴，观察心搏出现变化后立即换洗。4蛙

11、心灌流课件 正常心搏曲线正常心搏曲线 4CaCl2， 2滴滴 一旦出现现象一旦出现现象立即立即换洗换洗，2-3次次正常心搏曲线正常心搏曲线4CaCl2， 6滴滴 一旦出现现象一旦出现现象立即立即换洗换洗，2-3次次正常心搏曲线正常心搏曲线4KCl， 1-2滴滴 一旦出现现象一旦出现现象立即立即换洗换洗，2-3次次正常心搏曲线正常心搏曲线 实验步骤实验步骤n观察离子对心脏活观察离子对心脏活动的影响：动的影响：4蛙心灌流课件 实验步骤实验步骤n 观察药物对心脏活动的影响：观察药物对心脏活动的影响：记录正常心搏曲线；记录正常心搏曲线；滴加滴加0.01%肾上腺素肾上腺素1滴，观察心搏情况，出现变化后立

12、即滴，观察心搏情况，出现变化后立即换洗换洗；滴滴加加0.1%0.1%普萘洛尔普萘洛尔1滴，滴，约约1分钟后分钟后滴加滴加0.01%肾上腺素肾上腺素 1滴，滴，观察心搏变化，与前一步进行比较后，立即观察心搏变化，与前一步进行比较后，立即换洗换洗；滴加滴加0.01乙酰胆碱乙酰胆碱1滴，观察心搏出现变化后立即滴，观察心搏出现变化后立即换洗换洗；滴加滴加0.1%阿托品阿托品1滴，滴，约约1分钟后分钟后滴加滴加0.01%乙酰胆碱乙酰胆碱1滴，滴，观察心搏变化，与前一步进行比较后，立即观察心搏变化，与前一步进行比较后，立即换洗换洗。n 注意：注意：每次更换灌流液时，液面应保持一致。每次更换灌流液时，液面应

13、保持一致。4蛙心灌流课件 实验步骤实验步骤 观察药物对心脏活动的影响：观察药物对心脏活动的影响：正常心搏曲线正常心搏曲线 0.01%肾上腺素，肾上腺素， 1滴滴 一旦出现现象一旦出现现象立即立即换洗换洗，2-3次次 正常心搏曲线正常心搏曲线 0.1%普萘洛尔，普萘洛尔， 1滴滴 约约1分钟后分钟后0.01%肾上腺素，肾上腺素， 1滴滴 与前一步比较与前一步比较换洗换洗，2-3次次 正常心搏曲线正常心搏曲线正常心搏曲线正常心搏曲线 0.01乙酰胆碱乙酰胆碱 ， 1滴滴 一旦出现现象一旦出现现象立即立即换洗换洗，2-3次次 正常心搏曲线正常心搏曲线 0.1%阿托品阿托品， 1滴滴 约约1分钟后分钟

14、后0.01%乙酰胆碱，乙酰胆碱， 1滴滴 与前一步比较与前一步比较换洗换洗，2-3次次 正常心搏曲线正常心搏曲线4蛙心灌流课件 关键技术关键技术n血管的识别及结扎血管的识别及结扎n插管技术插管技术n游离心脏与换能器的连接游离心脏与换能器的连接n灌流液作用时间及更换时间的把握灌流液作用时间及更换时间的把握本实验需掌握的实验技术本实验需掌握的实验技术v蟾蜍离体心脏的制备蟾蜍离体心脏的制备v蟾蜍心脏插管技术蟾蜍心脏插管技术4蛙心灌流课件 注意事项注意事项n制备蛙心标本时，勿伤及制备蛙心标本时，勿伤及静脉窦静脉窦。心脏插管时，切勿。心脏插管时，切勿戳穿心壁及血管壁。戳穿心壁及血管壁。n各种液体滴管要专

15、用，不可混用。每加一种溶液要用各种液体滴管要专用，不可混用。每加一种溶液要用滴管混匀，以免所加溶液浮在上面，不易进入心脏。滴管混匀，以免所加溶液浮在上面，不易进入心脏。n蛙心插管内液面应保持一定高度，以蛙心插管内液面应保持一定高度，以1.5 cm 为宜。为宜。n张力换能器应向下倾斜，以免液体进入换能器。张力换能器应向下倾斜，以免液体进入换能器。n滴加试剂后，一旦出现变化应立即用新鲜林格溶液换滴加试剂后，一旦出现变化应立即用新鲜林格溶液换洗洗23次，以免心肌受损，而且必须待心脏恢复正常次，以免心肌受损，而且必须待心脏恢复正常后方能进行下一步实验，以形成前后对照。后方能进行下一步实验，以形成前后对照。n滴加药品和换取新鲜林格溶液时，须及时标记，以便滴加药品和换取新鲜林格溶液时，须及时标记，以便观察分析。观察分析。n化学药物作用不明显时，可再适量滴加，密切观察药化学药物作用不明显时，可再适量滴加，密切观察药物剂量添加后的实验结果。物剂量添加后的实验结果。n随时用林格