蛋白质变性与沉淀

1、 实验项目实验项目 蛋白质变性与沉淀蛋白质变性与沉淀 2学时学时 蛋白质变性蛋白质变性 蛋白质受某些物理或化学因蛋白质受某些物理或化学因素的影响，素的影响，空间结构发生改变空间结构发生改变，生物活性丧失。称为蛋白质变性。生物活性丧失。称为蛋白质变性。 蛋白质沉淀：蛋白质沉淀： 使蛋白质从溶液中析出的现象。使蛋白质从溶液中析出的现象。1 1、盐析、盐析2 2、重金属盐沉淀、重金属盐沉淀3 3、有机酸试剂沉淀法、有机酸试剂沉淀法4 4、有机溶剂沉淀法、有机溶剂沉淀法 维持蛋白质胶体溶液稳定因素：维持蛋白质胶体溶液稳定因素： 1.1.水化膜水化膜 2.2.颗粒表面电荷颗粒表面电荷去除上述稳定因素可使

2、蛋白质沉淀析出。去除上述稳定因素可使蛋白质沉淀析出。一、实验目的一、实验目的 1. 1.掌握蛋白质变性与沉淀两者掌握蛋白质变性与沉淀两者 的关系；的关系； 2.2.熟悉刻度吸量管的正确使用；熟悉刻度吸量管的正确使用； 3.3.了解蛋白质变性与沉淀的原了解蛋白质变性与沉淀的原 理及各种沉淀方法。理及各种沉淀方法。二、实验仪器与试剂二、实验仪器与试剂 1.1.仪器仪器试管、刻度吸量管、洗耳球等。试管、刻度吸量管、洗耳球等。 2. 试剂试剂 5蛋白质蛋白质溶液、溶液、 2.5蛋白质蛋白质溶液、溶液、 10ZnSO4溶液、溶液、 0.1mol/LNaOH、 1三氯醋酸、无水乙醇、三氯醋酸、无水乙醇、N

3、aCl（固体）（固体）三、实验内容原理及操作步骤三、实验内容原理及操作步骤1.1.重金属盐及某些酸类沉淀蛋白质重金属盐及某些酸类沉淀蛋白质2.2.乙醇沉淀蛋白质乙醇沉淀蛋白质（一）实验内容（一）实验内容1.1.重金属盐及某些酸类沉淀蛋白质重金属盐及某些酸类沉淀蛋白质1 1）实验原理）实验原理COO-NH3+POH-H+重金属离子M+酸根X-COO-NH2PCOOHNH3+PCOO-M+NH2PCOOHNH3+X-P（二）操作步骤及原理（二）操作步骤及原理2 2）操作步骤）操作步骤试剂（滴）试剂（滴）试管试管1试管试管2试管试管35% 蛋白质溶液蛋白质溶液2滴滴2滴滴2滴滴0.1mol/L Na

4、OH2滴滴10% ZnSO420滴滴20滴滴1% 三氯醋酸三氯醋酸20滴滴现象现象3 3）观察、记录实验现象，并解释之。）观察、记录实验现象，并解释之。结果记录结果记录试剂（滴）试剂（滴）试管试管1试管试管2试管试管35% 蛋白质溶液蛋白质溶液2滴滴2滴滴2滴滴0.1mol/L NaOH2滴滴10% ZnSO420滴滴20滴滴1% 三氯醋酸三氯醋酸20滴滴现象现象 沉淀沉淀 沉淀沉淀 澄清澄清实验现象分析实验现象分析n试管试管1 1中蛋白液在氢氧化钠调节下，其中蛋白液在氢氧化钠调节下，其pHpIpHpI，蛋蛋白质分子带负电荷白质分子带负电荷，加入，加入ZnSOZnSO4 4 ，ZnZn2+2+

5、与带有负与带有负电荷的蛋白质分子结合生成不溶于水的盐沉淀电荷的蛋白质分子结合生成不溶于水的盐沉淀。n试管试管2 2中蛋白液加有三氯醋酸，其中蛋白液加有三氯醋酸，其pHpIpHpI，蛋白质蛋白质分子带正电荷，三氯醋酸根与带有正电荷的蛋白分子带正电荷，三氯醋酸根与带有正电荷的蛋白质分子结合成不溶于水的盐沉淀。质分子结合成不溶于水的盐沉淀。n试管试管3 3中只加有蛋白液和中只加有蛋白液和ZnSOZnSO4 4，蛋白质分子因不蛋白质分子因不带电荷或带较少的正、负电荷，与带电荷或带较少的正、负电荷，与ZnZn2+2+不反应。不反应。2.2.乙醇沉淀蛋白质乙醇沉淀蛋白质1 1）实验原理）实验原理 乙醇乙醇

6、溶解于水，溶解于水，破坏破坏蛋白质蛋白质分子的分子的水化膜水化膜，加入少量，加入少量中性盐中性盐抑制蛋白质的解离，抑制蛋白质的解离，使电荷减少使电荷减少，沉淀更完全。沉淀更完全。2）操作步骤）操作步骤试剂（试剂（mL）试管试管1试管试管22.5%蛋白质溶液蛋白质溶液0.5 mL0.5 mL结晶结晶NaCl数粒（适量）数粒（适量）无水乙醇无水乙醇1mL1mL现象现象3）观察、记录实验现象，并解释之。）观察、记录实验现象，并解释之。结果记录结果记录试剂试剂试管试管1试管试管22.5%蛋白质蛋白质溶液溶液0.5 mL0.5 mL结晶结晶NaCl数粒（适量）数粒（适量）无水乙醇无水乙醇1mL1mL现象

7、现象 沉淀沉淀沉淀充分沉淀充分实验现象分析实验现象分析 试管试管1中加入无水乙醇，无水乙醇破坏蛋中加入无水乙醇，无水乙醇破坏蛋白质分子表面的水化膜，使蛋白质沉淀。白质分子表面的水化膜，使蛋白质沉淀。 试管试管2中加入无水乙醇，无水乙醇破坏蛋中加入无水乙醇，无水乙醇破坏蛋白质分子表面的水化膜，使蛋白质沉淀。白质分子表面的水化膜，使蛋白质沉淀。又加入少量的氯化钠中性盐，使蛋白质分又加入少量的氯化钠中性盐，使蛋白质分子表面的电荷减少，沉淀更充分。子表面的电荷减少，沉淀更充分。 五、注意事项五、注意事项1.1.试剂滴管不能交叉使用试剂滴管不能交叉使用，防污染试剂，防污染试剂2.2.刻度吸量管不能交叉使用刻度吸量管不能交叉使用，否则污染，否则污染 试剂，影响反应现象。试剂，影响反应现象。3.3.做完实验把做完实验把试管和试管架洗干净试管和试管架洗干净， 桌面擦干净，桌面擦干净，登记签名登记签名。4.4.值日生听老师安排，认真打扫，值日生听老师安排，认真打扫，经老经老 师批准才能离开实验室师批准才能离开实验室。 六、思考题六、思考题 为什么临床抢救重金属中毒患者用为什么临床抢救重金属中毒患者用鸡