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文档简介
1、技能训练5 细菌标本片的制备及染色方法 能利用不同的材料进行细菌标本片的制备掌握常规的染色方法,并认识细菌的不同染色特性实训目标酒精灯、接种环、载玻片、吸水纸、生理盐水、美蓝染色液、革兰氏染色液、瑞氏染色液、染色缸、染色架、洗瓶、显微镜、香柏油、乙醇乙醚、擦镜纸、细菌培养物(大肠杆菌、葡萄球菌等)、细菌病料、无菌镊子和剪刀、特种铅笔等 仪器材料方法步骤(一)细菌标本片的制作(一)细菌标本片的制作(二)常用的细菌染色方法(二)常用的细菌染色方法(三)常用染色液的配制(三)常用染色液的配制(一)细菌标本片的制作(一)细菌标本片的制作1涂片标本的制作(1)涂片 (2)干燥涂片(3)固定涂片2血液推片
2、和组织抹片的制作(1)血液推片的制作(2)组织抹片的制作 1涂片标本的制作(1)涂片 取清洁载玻片一块,用吸管吸取生理盐水1滴置于玻片中央,再将接种环在火焰上灭菌,待冷后从固体培养基上挑取少许菌落,置于玻片上的生理盐水中混均匀,并在玻片上涂成直径约为1cm的涂面,要求薄而均匀。(2)干燥涂片 在室温下自然干燥,必要时将涂面向上,置火焰上来回微烤使其干燥。(3)固定涂片 干燥后,将涂面向上,在火焰上快速来回通过23次,其温度以手背接触玻片底面感觉微烫手为宜。2血液推片和组织抹片的制作(1)血液推片的制作 取一张边缘整齐的载玻片,用其一端蘸取少许血液,在另一张干净无油脂的载玻片上,以45角度均匀地
3、推成一薄血涂片,以红细胞不重叠为宜。(2)组织抹片的制作 待检尸体经无菌手术切开胸腹腔后,用经火焰灭菌的镊子夹起组织,用灭菌剪刀剪下小块组织,将组织切面在载玻片上等距离轻压几下,使其留有组织切面的压迹。(二)常用的细菌染色方法(二)常用的细菌染色方法1美蓝染色法 2革兰氏染色法3瑞氏染色法1美蓝染色法 在已固定好的抹片上,滴加适量美蓝染色液覆盖涂面,染色23min,水洗,吸水纸轻压吸干或晾干和镜检,结果菌体呈蓝色。2革兰氏染色法(1)在固定好的抹片上,滴加草酸铵结晶紫染色液,作用13min,水洗。(2)加革兰氏碘液,作用12min,水洗。(3)加95酒精脱色约30s至1min,水洗。(4)加稀
4、释石炭酸复红,复染30s左右,水洗,吸干后镜检。结果:革兰氏阳性菌呈蓝紫色,革兰氏阴性菌呈红色。3瑞氏染色法细菌抹片自然干燥后,滴加瑞氏染色液于涂片上以固定标本,13min后,再滴加与染色液等量的磷酸缓冲液或中性蒸馏水于玻片上,轻轻摇晃使与染色液混和均匀,5min左右水洗,干后镜检,结果菌体呈蓝色,组织细胞等物呈其他颜色。(三)常用染色液的配制(三)常用染色液的配制1碱性美蓝染色液2革兰氏染色液3瑞氏染色液1碱性美蓝染色液甲液:美蓝0.3g、95%酒精30ml;乙液:0.01%苛性钾溶液100ml先配甲液,将美蓝放入研钵中,徐徐加入酒精研磨均匀后,把甲、乙两液混合,过夜后用滤纸过滤即成。新鲜配
5、制的美蓝液染色不好,陈旧的染色好。2革兰氏染色液(1)草酸铵结晶紫溶液甲液:结晶紫2g、95%酒精20ml;乙液:草酸铵0.8g、蒸馏水80ml将结晶紫放入研钵中,加酒精研磨均匀制成甲液,然后将完全溶解的乙液与甲液混合即成。(2)卢戈氏碘液 碘1g、碘化钾2g、蒸馏水300ml。将碘化钾放入研钵中,加入少量蒸馏水,使其溶解,再放入已磨散的碘片,徐徐加水,同时充分磨匀,待碘片完全溶解后,把余下的蒸馏水倒入,再装入瓶中。(3)石炭酸复红稀释液 取碱性复红酒精饱和溶液(碱性复红10g溶于95%酒精100ml中)1ml和5%石炭酸水溶液9ml混合,即为石炭酸复红原液。再取原液10ml和90ml蒸馏水混合,即成石炭复红稀释液。3瑞氏染色液取瑞氏染料0.1g,纯中性甘油1ml,在研钵中混合研磨,再加入甲醇60m
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