高效液相色谱法测定盐酸马尼地平片的技术分析

1、高效液相色谱法测定盐酸马尼地平片的技术分析【摘要】目的 建立测定盐酸马尼地平片含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法 采用外标法。供试液浓度0.1mg/ml。色谱柱为Kromasil C18 （250mmx4.6mm，5?m），以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（6535）为流动相，检测波长为228nm，流速为1.0mL/min。结果 在47.6?g/ml285.6?g/ml浓度范围内，线性关系良好，回归方程为A=53851C+16836（r=1），平均回收率为100.1%，RSD=0.69%。结论 本法用于测定盐酸马尼地平片的含量，重现性好，结果准确可靠。【关键词】盐酸马尼地平片；高效

2、液相色谱法；含量盐酸马尼地平（Manidipine Hydrochloride）是由日本武田药品株式会社研制开发的用于治疗高血压的新药，于1990年首次在日本上市。盐酸马尼地平是第三代二氢吡啶类钙离子拮抗剂，能够抑制平滑肌细胞电压依赖性钙离子内流，引起系统性的血管扩张，从而降低血压。盐酸马尼地平的原料和制剂质量标准尚未被任何药典收载。笔者建立了高效液相色谱法测定盐酸马尼地平片的含量，该方法灵敏度高，专属性强。1.仪器与试药LC-2010AHT高效液相色谱仪（日本岛津公司）；CPA225D电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）；盐酸马尼地平对照品（企业工作对照，批号：D140501）；盐酸马尼地平

3、片（自制，规格：5mg/片，批号：140701、140702、140703）；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯；试验用水为纯化水。2.方法与结果2.1色谱条件色谱柱：Kromasil C18 （250mmx4.6mm，5?m），流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（6535），柱温：35，流速：1.0mL/min，检测波长：228nm，进样量：20?l。2.2对照品溶液的制备精密称取盐酸马尼地平对照品10mg，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。2.3供试品溶液的制备与测定取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于盐酸马尼地平10mg），置1

4、00ml量瓶中，加流动相适量，超声处理使盐酸马尼地平溶解，并用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。按2.1;项下色谱条件测定，按外标法以峰面积计算含量。2.4检测波长选择取盐酸马尼地平对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成20?g/ml的溶液，在200400nm的波长内扫描，结果在228nm、352nm处有最大吸收。352nm波长处的吸收强度比228nm弱，故选定228nm为检测波长。2.5方法学考察2.5.1专属性试验按盐酸马尼地平片处方，称取空白辅料约91mg，置50ml量瓶中，加流动相适量，超声处理，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤20?l注入液相色谱仪，记录色谱图

5、。结果，空白辅料在盐酸马尼地平主峰处不出峰，说明辅料不会干扰盐酸马尼地平片的含量测定。2.5.2线性取盐酸马尼地平对照品23.80mg，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释到刻度，作为贮备液。精密量取适量稀释成47.6、95.2、142.8、238.0、285.6?g/ml的浓度，以进样浓度C对峰面积A做线性回归，回归方程为A=53851C+16836，r=1。结果表明，在47.6?g/ml285.6?g/ml浓度范围内，线性关系良好。2.5.3回收率试验取盐酸马尼地平原料，按标示量的80%（8mg）、100%（10mg）、120%（12mg）精密称定，分别置100ml量瓶中，各加约182mg

6、的空白辅料，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液适量，作为供试品溶液；另取盐酸马尼地平对照品约10mg，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取上述两溶液各20?l，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算回收率，结果见表1。2.5.4仪器精密度试验取对照品溶液，连续进样6次，测定峰面积。结果的RSD为0.31%（n=6）。2.5.5重复性试验取同一批号（140701）样品，按2.3;项下方法制备并重复测定6 次，平均含量为99.5%，RSD为0.47%（n=6）。2.5.6溶出度测定溶液的稳定性取同一供试品溶液，于室温下放置，分别于0h、2h、4h、6

7、h、8h时进样，测定结果RSD为0.62%，表明在8小时内供试品溶液稳定。2.5.7定量限试验精密吸取2.2;项下对照品溶液适量，加流动相稀释成浓度约为0.042?g/mL的溶液。按2.1;项下色谱条件测定，以信噪比101计算，盐酸马尼地平含量测定的定量限为0.84ng。2.6样品测定取3批样品，按2.3;项下所述方法制备供试品溶液，按2.1;项下色谱条件，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20?L，注入高效液相色谱仪，记录各自的色谱图和峰面积，按外标法计算盐酸马尼地平片的含量，结果140701批样品含量为99.4%，140702批样品含量为100.5%，140703批样品含量为99.8%。结果表明，本法测定的准确度较高，重现性和精密度较好。3.讨论盐酸马尼地平原料和制剂尚无任何公开的质量标准，且国内也鲜有关于该品种检测方法的文献，本研究为盐酸马尼地平片含量测定方法提供了一种参考。系统适用性试验结果显示，色谱图中盐酸马尼地平峰的理论板数和分离度均符合要求，表明本色谱条件符合中国药典2010年版（二部）【1】及中国药品检验标准操作规范（2010年版）【2】的相关规定。相关研究结果表明，本法用于测定盐酸马尼地平片的含量，重现性好，结果准确可靠。本法亦可作为盐酸