2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数ppt

1、 菌株：菌株： 纯且活状态纯且活状态所保存的菌种所保存的菌种 。 菌株又称菌株又称品系品系, ,表示任何由一个独立表示任何由一个独立分离的分离的单细胞单细胞( (或或单个病毒粒子单个病毒粒子) )繁殖繁殖而成的而成的纯种群体及其后代。纯种群体及其后代。 提出的问题提出的问题 如何寻找如何寻找耐高温耐高温的酶？的酶？ 解决问题的思路解决问题的思路寻找寻找耐高温耐高温环境；环境；原理原理高温淘汰其他菌，选出耐高温高温淘汰其他菌，选出耐高温细菌，用细菌，用耐高温菌种提取耐高温酶。耐高温菌种提取耐高温酶。 允许特定种类的允许特定种类的微生物生长，微生物生长，同时同时抑制或抑制或阻止其他种类阻止其他种类

2、微生物生长的培养基微生物生长的培养基。菌株：菌株： 纯且活状态纯且活状态所保存的菌种所保存的菌种 。菌株又称菌株又称品系品系, ,表示任何由一个独立分离的表示任何由一个独立分离的单细胞单细胞( (或或单个病毒粒子单个病毒粒子) )繁殖而成的繁殖而成的纯种群纯种群体及其后代。体及其后代。选择培养基：选择培养基： 允许特定种类的允许特定种类的微生物生长，微生物生长，同时同时抑抑制或阻止其他种类制或阻止其他种类微生物生长的培养基微生物生长的培养基。选择培养基实例：选择培养基实例：加入青霉素加入青霉素的培养基的培养基: :加入高浓度食盐加入高浓度食盐的培养基的培养基: :不加氮源不加氮源的无氮培养基的

3、无氮培养基: :不加含碳有机物不加含碳有机物的无碳培养基的无碳培养基: : 加入四环素等抗生素加入四环素等抗生素的培养基的培养基: :分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌分离自养型微生物分离自养型微生物分离导入了目的分离导入了目的基因的受体细胞基因的受体细胞分离固氮菌分离固氮菌1.1.使用选择培养基的目的是（使用选择培养基的目的是（ ） A.A.培养细菌培养细菌 B.B.培养真菌培养真菌 C.C.使需要的微生物大量繁殖使需要的微生物大量繁殖 D.D.表现某微生物的特定性状与其他表现某微生物的特定性状与其他微微 生物加以区别生物加以区别C C鉴别培养基

4、鉴别培养基用于鉴别不同类型微生物的培养基用于鉴别不同类型微生物的培养基。在培养基中加入。在培养基中加入某种特殊的化学物质，某种微生物在培养基中生长后某种特殊的化学物质，某种微生物在培养基中生长后能能产生某种代谢产物产生某种代谢产物，而这种代谢产物可以，而这种代谢产物可以与培养基与培养基中的特殊化学物质发生特定的化学反应，产生明显的中的特殊化学物质发生特定的化学反应，产生明显的特征性变化特征性变化，根据这种特征性变化，可将该种微生物，根据这种特征性变化，可将该种微生物与其他微生物区分开来。与其他微生物区分开来。 伊红伊红美蓝培养基美蓝培养基常用来鉴别常用来鉴别大肠杆菌大肠杆菌 大肠杆菌代谢产生的

5、大肠杆菌代谢产生的有机酸有机酸，和，和伊红伊红- -美蓝反应美蓝反应使菌落使菌落呈深紫色呈深紫色，且，且有金属光泽有金属光泽。 该培养基的配方中，为该培养基的配方中，为微生物的生长提供微生物的生长提供碳源和碳源和氮源氮源的分别是什么物质？的分别是什么物质？此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？能。只有产生脲酶的细菌能利用尿素作为能。只有产生脲酶的细菌能利用尿素作为氮源而生存。氮源而生存。实验组实验组对照组对照组培养基培养基类型类型是否是否接种接种 目的目的 结果结果以尿素为以尿素为唯一氮源唯一氮源的培养基的培养基牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨培养基培养基 是

6、是是是分离分离尿素尿素细菌细菌判断该判断该培养基培养基有无选有无选择性择性只生长只生长尿素细尿素细菌菌生长多生长多种微生种微生物物2 2、取少量酵母菌放入血球计数板、取少量酵母菌放入血球计数板直接记数，测得的数目是直接记数，测得的数目是A A、活细胞数、活细胞数 B B、死细胞数、死细胞数C C、菌落数、菌落数 D D、细胞总数、细胞总数优点：优点：直观、快速直观、快速 设备简单、能观察微生物的形态特征设备简单、能观察微生物的形态特征 例：例：P22 P22 你认为这两位同学的作法正确吗？你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？如果有问题，错在哪？ 甲：没有甲：没有重复实验，不具说服

7、力重复实验，不具说服力（至少（至少涂布涂布3 3个平板）个平板） 乙：乙：A A组结果误差过大，不应用于计算组结果误差过大，不应用于计算 平均值平均值 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土土3cm3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。信封中。 取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。用前都要灭菌。 制备以尿素为唯一氮源的制备以尿素为唯一氮源的选择培养基选择培养基应在应在火焰旁火焰旁称取土壤称取土壤10g10g。将称好的土。将称好的土样倒入盛有样倒入盛有90mL90

8、mL无菌水的锥形瓶中，塞好无菌水的锥形瓶中，塞好棉塞。棉塞。在稀释土壤溶液的过程中，在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要每一步都要在火焰旁进行。在火焰旁进行。分离不同的微生物采用不同的稀释度分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是其原因是不同微生物在土壤中含量不同不同微生物在土壤中含量不同，其目的是保证获得菌落数在其目的是保证获得菌落数在3030300300之之间、适于计数的平板。间、适于计数的平板。 细菌稀释度为细菌稀释度为10104 4、10105 5、10106 6 放线菌稀释度为放线菌稀释度为10103 3、10104 4、10105 5 真菌稀释度为真菌稀释度为10102 2、101

9、03 3、10104 4实验时要对培养皿实验时要对培养皿作好标记作好标记。注明。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培培养基类型、培养时间、稀释度、培养物养物等。等。为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当当事先规划时间事先规划时间。 不同种类的细菌形成的菌落，在大不同种类的细菌形成的菌落，在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度度等方面具有一定的特征，等方面具有一定的特征，菌落特征可菌落特征可作为菌种鉴定的重要依据作为菌种鉴定的重要依据。1.1.对细菌群体生长规律测定的正确对细菌群体生长规律测定的正确的表述是的表述是 A.

10、A.在液体培养基上进行在液体培养基上进行 B. B.至少接种一种细菌至少接种一种细菌 C.C.接种一个细菌接种一个细菌 D. D.及时补充消耗的营养物质及时补充消耗的营养物质 A A3.3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是氮源分别是( )( ) A.CO2 A.CO2和和N2 N2 B. B.葡萄糖和葡萄糖和NH3NH3 C.CO2C.CO2和尿素和尿素 D. D.葡萄糖和尿素葡萄糖和尿素D D4.4.下列说法不正确的是（下列说法不正确的是（ ） A.A.科学家从科学家从70708080度热泉中分离到耐高温的度热泉中分离到耐高温的TaqDNATaqDNA聚合酶聚合酶 B.B.统计某一稀释度的统计某一稀释度的5 5个平板的菌落数依次为个平板的菌落数依次为M1M1、M2M2、M3M3、M4M4、M5M5，以，以M3M3作为该样品菌落数作为该样品菌落数的估计值的估计值 C.C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度可信度 D.D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量