722型分光光度计的使用

1、一、测量原理分光光度法测量的理论依据是伯郎一比耳定律：当容液中的物质在光的照射和激发下，产生了对光吸收的效应。但物质对光的吸收是有选择性 的，各种不同的物质都有其各自的吸收光谱。 所以根据定律当一束单色光 通过一定浓度范围的稀有色溶液时，溶液对光的吸收程度A与溶液的浓度 c（g/l ）或液层厚度b（cm）成正比。其定律表达式A=abc（a是比例系数）。 当c的单位为mol/l时，比例系数用e表示，则A=e bc称为摩尔吸光系 数。其单位为L mol-1 cm-1它是有色物质在一定波长下的特征常数。T（透光率）=1/1 0 A（吸光度）=-lgT 或A=K C L（比色皿的厚度）测定 时，入射光

2、I,吸光系数和溶液的光径长度不变时，透过光是根据溶液的 浓度而变化的，即“ K”为常数。比色皿厚度一定，“L”、“ I0 ”也一定。 只要测出A即可算出“ C。二、722型分光光度计的使用1、将灵敏度旋钮调至“1”档（信号放大倍率最小）。2、 开启电源，指示灯亮，选择开关置于“ T”，波长调至到测试用波长。 仪器预热20分钟。3、打开试样室（光门自动关闭），调节透光率零点旋钮，使数字显示为 000.0。（调节100%T旋钮），盖上试样室盖，将比色皿架处于蒸馏水校正位置，使光电管受光，调节透光率100漩钮使数字显示100.0。如显示 不到100.0，则可适当增加微电流放大的倍数。（增加灵敏度的档

3、数同时 应重复（3）调节仪器透光率的“ 0”位）但尽量使倍率置于低档使用。这 样仪器会有更高的稳定性。4、预热后，按（3）连续几次调整透光率的“ 0”位和“ 100%的位置,待稳定后仪器可进行测定工作。三、吸光度“ A”的测量将选择开关置于A。调节吸光度调零旋钮，使得数字显示为零，然后将 被测样品移入光路，显示值即为被测样品的吸光度值。四、浓度c的测量将选择开关由“ A”旋至“C将已标定浓度的样品放入光路，调节浓度旋 钮，使得数字显示为标定值，将被测样品放入光路即可读出被测样品的浓 度值。注意事项：1、测量完毕，速将暗盒盖打开，关闭电源开关，将灵敏度旋钮调至最低 档，取出比色皿，将装有硅胶的干

4、燥剂袋放入暗盒内，关上盖子，将比色 皿中的溶液倒入烧杯中，用蒸馏水洗净后放回比色皿盒内。2、每台仪器所配套的比色皿不可与其它仪器上的表面皿单个调换。使用方法（1）预热仪器将选择开关置于“ T”，打开电源开关，使仪器预热20分钟。为了防止光 电管疲劳，不要连续光照，预热仪器时和不测定时应将试样室盖打开， 使 光路切断。（2）选定波长 根据实验要求，转动波长手轮，调至所需要的单色波长。（3）固定灵敏度档在能使空白溶液很好地调到“100%的情况下，尽可能采用灵敏度较低的 挡，使用时，首先调到“ 1”挡，灵敏度不够时再逐渐升高。但换挡改变 灵敏度后，须重新校正“ 0%和“ 100%。选好的灵敏度，实验

5、过程中不 要再变动。（4）调节T=0%轻轻旋动“ 0%旋钮，使数字显示为“ 00.0 ”，（此时 试样室是打开的）。（5）调节T=100%将盛蒸馏水（或空白溶液，或纯溶剂）的比色皿放入 比色皿座架中的第一格内，并对准光路，把试样室盖子轻轻盖上，调节透 过率“100%旋钮，使数字显示正好为“ 100.0 ”。（6）吸光度的测定将选择开关置于“ A”，盖上试样室盖子，将空白液置于光路中，调节吸 光度调节旋钮，使数字显示为“ .000 ”。将盛有待测溶液的比色皿放入比 色皿座架中的其它格内，盖上试样室盖，轻轻拉动试样架拉手，使待测溶 液进入光路，此时数字显示值即为该待测溶液的吸光度值。读数后，打开 试样室盖，切断光路。重复上述测定操作1-2次，读取相应的吸光度值，取平均值。（7）浓度的测定选择开关由“ A”旋置“C,将已标定浓度的样品放入光路，调节浓度旋