微生物学实验课一

1、医学微生物实验医学微生物实验Experiment of Medical Microbiology 巩固基础理论、基本概念巩固基础理论、基本概念 学习基本操作学习基本操作 树立无菌概念树立无菌概念微生物实验目的微生物实验目的实验室规则实验室规则: :1.1.必须穿白大衣；必须穿白大衣；2.2.尽量保持安静；尽量保持安静；3.3.自己的实验器材自己的实验器材( (试管、平皿等试管、平皿等) )注明菌种、注明菌种、 日期、组、姓名；日期、组、姓名；4.4.除示教片以外，沾染过传染物的实验器材必除示教片以外，沾染过传染物的实验器材必须放入消毒缸；须放入消毒缸；5.5.注意安全；不要随意调动实验室仪器。

2、注意安全；不要随意调动实验室仪器。6.6.实验结束后，泡手、洗手。实验结束后，泡手、洗手。实验一实验一实验内容：实验内容： 1 1. .油浸镜的使用油浸镜的使用 2.2.细菌的基本形态细菌的基本形态 3.3.细菌的特殊结构细菌的特殊结构实验要求实验要求: : 1.1.掌握普通光学显微镜的基本构造、使掌握普通光学显微镜的基本构造、使用方法、保护要点。用方法、保护要点。 2.2.掌握普通光学显微镜油浸系的原理。掌握普通光学显微镜油浸系的原理。 3.3.使用油镜观察几种细菌的基本形态。使用油镜观察几种细菌的基本形态。实验器材实验器材：n1.1.显微镜、香柏油、显微镜、香柏油、二甲苯二甲苯、擦镜纸、擦

3、镜纸、纱布纱布等。等。n2.2.染色标本染色标本 ( (基本形态基本形态4)(4)(特殊结构特殊结构3)(3)(红细胞红细胞与葡萄球菌对比标本与葡萄球菌对比标本1)1)Antony van Leeuwenhock自制单式显微镜观察到细菌等微生物个体自制单式显微镜观察到细菌等微生物个体实验原理实验原理：n1.1.显微镜的构造显微镜的构造：n普通光学显微镜的构造可分为两大部分：一普通光学显微镜的构造可分为两大部分：一为机械装置，一为光学系统，这两部分很好为机械装置，一为光学系统，这两部分很好的配合，才能发挥显微镜的作用。的配合，才能发挥显微镜的作用。n（1 1）显微镜的机械装置）显微镜的机械装置n

4、显微镜的机械装置包括镜座、镜筒、物镜转显微镜的机械装置包括镜座、镜筒、物镜转换器、载物台、推动器、粗动螺旋、微动螺换器、载物台、推动器、粗动螺旋、微动螺旋等部件。旋等部件。 （2 2）显微镜的光学系统）显微镜的光学系统n显微镜的光学系统由反光镜，聚光器，接物显微镜的光学系统由反光镜，聚光器，接物镜，接目镜等组成，光学系统使物体放大，镜，接目镜等组成，光学系统使物体放大，形成物体放大像形成物体放大像 。n根据物镜放大率的高低，可分为：根据物镜放大率的高低，可分为：n低倍物镜低倍物镜 1010；n高倍物镜高倍物镜 4040；n 油浸物镜油浸物镜 100100。n普通光学显微镜常用的目镜为普通光学显

5、微镜常用的目镜为1010倍平场目镜倍平场目镜（P P）。）。光学显微镜的构造光学显微镜的构造1. 1. 物镜转换器物镜转换器 2. 2. 接物接物镜镜 3. 3.游标卡尺游标卡尺 4. 4.载物载物台台 5. 5.聚光器聚光器 6. 6. 彩虹彩虹光阑光阑 7. 7.光源光源 8. 8. 镜镜座座 9. 9. 电源开关电源开关 10. 10. 光源滑动变阻器光源滑动变阻器 11. 11. 粗调螺旋粗调螺旋 12. 12. 微微调螺旋调螺旋 13. 13. 镜臂镜臂 14. 14.镜镜筒筒 15. 15.目镜目镜 16. 16.标本移标本移动螺旋动螺旋n显微镜的几个常用系数：显微镜的几个常用系数

6、：na.a.放大倍数放大倍数= =接物镜放大倍数接目镜放大倍接物镜放大倍数接目镜放大倍数数 nb. b. 分辨率分辨率 ： 是表示显微镜辨析物体（两端）是表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力。两点之间距离的能力。nc. c. 数值孔径数值孔径 ：也叫做镜口率（或开口率），：也叫做镜口率（或开口率），它与显微镜的分辨力成正比，与焦深成反比，它与显微镜的分辨力成正比，与焦深成反比，与镜象亮度的平方根成正比。与镜象亮度的平方根成正比。 2.2.油镜使用的原油镜使用的原理理n油镜，即油浸接物镜。油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，片与镜头之间的空气

7、时，由于空气与玻片的密度由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野发生散射，降低了视野的照明度。的照明度。n加入中间的介质是一层加入中间的介质是一层香柏油（其折射率与玻香柏油（其折射率与玻片的相近），则几乎不片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象的进光量，从而使物象更加清晰。更加清晰。实验方法实验方法：n一一、观察前的准备观察前的准备n1 1、显微镜、显微镜移动移动时，要用右手紧握镜臂，时，要用右手紧握镜臂，左手托住镜座，平稳地将显微镜左手托住镜座，平稳地将显微镜放在放在实验实验桌上。桌上。n2 2、将显微镜放

8、在自己身体的左前方，离、将显微镜放在自己身体的左前方，离桌子边缘约桌子边缘约10cm10cm左右，右侧可放记录本或左右，右侧可放记录本或绘图纸。绘图纸。n3 3、调节光照、调节光照: :打开光源，并将光圈调到打开光源，并将光圈调到100100的位置，调节光源旋钮，使视野达到的位置，调节光源旋钮，使视野达到最亮。最亮。n4 4、调节瞳距：双筒显微镜可以调节瞳距，、调节瞳距：双筒显微镜可以调节瞳距，将刻度对准使用者瞳距大小的位置，可将刻度对准使用者瞳距大小的位置，可以使视野更加清晰。以使视野更加清晰。 使用油镜按下列步骤操作：使用油镜按下列步骤操作：n1 1、先用粗调节旋钮将镜筒提升（或将、先用粗

9、调节旋钮将镜筒提升（或将载物台下降）约载物台下降）约2cm2cm，并将高倍镜转出。，并将高倍镜转出。n2 2、在玻片标本的镜检部位滴上一滴香、在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏油柏油（盖玻片朝上，油滴在盖玻片中间（盖玻片朝上，油滴在盖玻片中间或者有明显颜色的位置）或者有明显颜色的位置）。二、二、油镜观察油镜观察n3 3、从侧面注视，用粗调节旋钮将载物台缓缓、从侧面注视，用粗调节旋钮将载物台缓缓地上升，使油浸物镜浸入香柏油中，使镜头几地上升，使油浸物镜浸入香柏油中，使镜头几乎与标本接触乎与标本接触（物镜头弹簧刚好被压缩回去即（物镜头弹簧刚好被压缩回去即停止旋转旋钮）停止旋转旋钮）。n4 4、从接目

10、镜内观察，用粗调节旋钮将载物台、从接目镜内观察，用粗调节旋钮将载物台徐徐下降，当出现物像一闪后改用细调节旋钮徐徐下降，当出现物像一闪后改用细调节旋钮调至最清晰为止。如油镜已离开油面而仍未见调至最清晰为止。如油镜已离开油面而仍未见到物象，必须再从侧面观察，重复上述操作。到物象，必须再从侧面观察，重复上述操作。n下降载物台，将油镜头转出，先用擦镜纸擦去下降载物台，将油镜头转出，先用擦镜纸擦去镜头上的油，再用擦镜纸蘸少许乙醚乙醇混合镜头上的油，再用擦镜纸蘸少许乙醚乙醇混合液擦去镜头上残留油迹，最后再用擦镜纸擦拭液擦去镜头上残留油迹，最后再用擦镜纸擦拭2323下即可，（注意向一个方向擦拭）。下即可，（

11、注意向一个方向擦拭）。n将各部分还原，转动物镜转换器，使物镜头不将各部分还原，转动物镜转换器，使物镜头不与载物台通光孔相对，而是成八字形位置，再与载物台通光孔相对，而是成八字形位置，再将载物台下降至最低，降下聚光器，反光镜与将载物台下降至最低，降下聚光器，反光镜与聚光器垂直，最后用柔软纱布清洁载物台等机聚光器垂直，最后用柔软纱布清洁载物台等机械部分，然后将显微镜放回柜内或镜箱中。械部分，然后将显微镜放回柜内或镜箱中。三三. .观察完后复原观察完后复原n1.1.学生使用显微镜固定镜号、位置，填写学生使用显微镜固定镜号、位置，填写使用卡，本学期一直使用本台显微镜。使用卡，本学期一直使用本台显微镜。

12、n2.2.不准擅自拆卸显微镜的任何部件不准擅自拆卸显微镜的任何部件, ,以免以免损坏。损坏。n3.3.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度。布，以保证光洁度。 注意事项注意事项：n4.4.观察标本时，当目视接目镜时，观察标本时，当目视接目镜时，物镜头物镜头弹簧缩回去之后弹簧缩回去之后，切不可，切不可继续顺时针继续顺时针使用使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。 n5 5. .拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。 细菌

13、的基本形态细菌的基本形态: :球菌球菌: : 直径约直径约1m1m。不同的球菌排列方式。不同的球菌排列方式不同，有不同的名称。如葡萄球菌、链不同，有不同的名称。如葡萄球菌、链球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌等。球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌等。杆菌杆菌: :bacillus bacillus 长短粗细很不一致。长从长短粗细很不一致。长从 0.6m0.6m至至10m10m，大多数长，大多数长2-3m2-3m。螺螺形形菌菌: :spiral bacteria spiral bacteria 菌体弯曲。菌体弯曲。 一个弯曲为弧菌（一个弯曲为弧菌（vibrio),vibrio), 数个弯曲为螺菌（数个弯曲为螺菌（spirilum)spirilum)。细菌的形态和结构细菌的形态和结构 ：观察示教片：观察示教片：8 8张张 葡萄球菌（革兰染色）葡萄球菌（革兰染色）链球菌（革兰染色）链球菌（