Waters-Acquity-UPLC-超高效液相色谱仪10页

1、1.0 目的为了指导实验分析员在实验工作中正确使用Waters Acquity UPLC超高效液相色谱仪，特制定本规程。2.0 范围适用于指导实验人员在实验工作中对Waters Acquity UPLC超高效液相色谱仪的操作。3.0 职责3.1 实验人员在实验工作中使用Waters Acquity UPLC超高效液相色谱仪时应遵循本规程。3.2 部门负责人负责审核本规程并保证其实施。3.3 QC部门负责日常运行的监管。4.0 操作规程 4.1 试剂准备 使用色谱纯试剂配制的流动相和清洗液.强洗针液用较高比例的甲醇或乙腈的水溶液(如80/20),弱洗针液用纯水或含少量甲醇或乙腈的水溶液(如10/

2、90),清洗柱塞密封垫（Seal Wash）溶液应使用纯水或5%10%甲醇溶液。 4.2 液相开机 4.2.1 先打开UPLC所有模块电源（最后打开SO（Sample Organizer）电源），打开Analyst software，点击ACQUITY Console进入液相控制界面，图1。图1 4.2.2 连接液相 4.2.2.1自动启动液相：点击system，点击control，选择start up system，弹出图2控制界面，依次选择需要执行的项目。Prime Solvents中选择需要进行SM（Sample Manger）和BSM（Binary Solvent Manager）的相

3、关项目。依次在Opitonal和Equilibrate to Method中按实验需要进行设置。然后点击start，仪器自动进行清洗等准备工作。如果BSM,SM,SO等显示红色字体，说明仪器和软件连接失败，分别点击control，reset相关部分。图2 4.2.2.2 连接液相各个部分（如果BSM,SM,SO等显示红色字体，说明仪器和软件连接失败，分别点击control，reset）。选择BSM，点击control，选择Prime seal wash，进行柱塞杆的清洗。然后选择Prime A/B Solvents，选择A1（或A2）、B1（或B2）进行溶剂脱气操作，时间设定 5min，Pri

4、me时流速已设定，无需改动，脱气时Degasser的压力 1psi。见图3。图3 选择BSM，点击control，分别选择Prime syringes，Wash needle清洗注射器和进样针，见图4。在Number of cycles中输入要灌注的次数（进行5次左右的灌注），点击OK。图4 4.2.3 配置SO：在SM中选择Configure，选择Sample Organizer，在弹出的窗口选择SO，见图5。在Plate setup中可以设置SO中的样品盘类型，见图6。 图5图6 在SO中选择Configure，选择Scan and store shelf layout，SO进行样品盘扫描

5、，自动识别样品盘类型，如果识别错误，继续执行该步骤。勾选Disable shelf check可以禁止SO进行再次扫描，在样品盘类型识别并设定无误情况下使用，见图7。在图7 右侧的temperature中设定SO的内部温度。图7 4.2.4 色谱柱信息，见图8，在此设置柱温箱温度，查看色谱柱相关信息。图8 4.3 定量环的更换 选择所需更换的定量环，在SM右侧的六通阀上更换。然后在SM中选择Maintain中选择Replace，点击Sample syringe，点击OK，见图9。此时注射器柱塞杆下降到指定位置，拧下固定螺丝，取下注射器。安装新的注射器，点击reset。在Configure中选择

6、Volume Configure设置新更换的定量环和注射器体积，见图10。然后选择Prime syringes，进行注射器灌注，直到注射器中没有气泡存在。再次选择Maintain中选择Leak test ，点击Sample syringe，点击OK，进行检漏测试。测试通过，定量环及注射器更换完成（waters 的不同体积定量环对应特定体积的注射器，不能混用）。 更换新的定量环需要进行体积校准，在Maintain中选择Characterize，点击Characterize Needle and Loop Volumes，点击start，见图11。如果测试失败，检查loop和sypinge是否漏液

7、，再次执行灌注loop和sypinge，然后重新进行体积测试。测试pass，定量环更换完成。图9图10图11 4.4 液相报错信息，点击Logs，显示相关报错信息，见图12。图12 4.5 方法编辑器中需要注意的设置 在Analyst software中点击ACQUITY Method Editor，进入方法设置界面。在ACQ-SM中设置强洗和弱洗的体积，在Temperture Control中设置柱温和样品室的温度，在Alam Band中设置允许范围（如果不在此设置，而在Console中设置实验所需温度，可能会导致仪器运行时柱温箱和样品室控温关闭，样品实际在室温下运行），见图13。图13 点

8、击右下角的Advanced，可以打开进样模式，选择More info 可以查看不同体积定量环在不同进样模式下准确的进样体积范围，满环进样时需要填充定量环的体积等信息，见图14。图14 在ACQ-BSM中设置压力范围。Seal Wash 的时间为样品运行期间多长时间清洗一次柱塞密封，见图15。图15 4.6 液相关机 先用乙腈/水或者甲醇/水冲洗系统20min左右，再用纯的有机试剂冲洗系统10min，缓慢降低流速至零，用甲醇水执行Prime seal wash，清洗柱塞杆。然后关闭SM，BSM，SO的电源开关。 4.7 注意事项 在启动液相时先打开SM电源，再打开SO电源，然后reset SM，reset SO。如果连接失败，重新启动SM和SO，再次reset。如果还是出现连接错误，则完全关闭电脑，关闭液相系统，再重新启动电脑，液相系统按之前步骤进行连接。5.0 专有名词及定义SM：Sample managerSO：Sample OrganizerBSM： Binary Solvent ManagerSample syringe：样品注射器6.0