中药8类十味降糖丸浓缩丸对主要研究结果的总结及评价

1、中药注册分类8 综述资料4对主要研究结果的总结及评价 (十味降糖丸（浓缩丸）)课题名称 十味降糖丸（浓缩丸）研究单位 xxxx制药有限公司申报单位 xxxx制药有限公司联 系 人 联系方式 对主要研究结果的总结及评价一、工艺研究资料及文献资料 （一）药材的分拣去杂质及质量验收处方各中药材，经分拣去杂质，按中国药典20xx年版一部有关规定检验; 其余各原辅料药按中国药典20xx年版二部有关规定检验，符合规定者备用。（二）配料与掺混符合规定的药材根据生产批量大小，按处方称量配伍，将拟用不同方法提取的药材及粉碎的药材分别掺混，分开放置。（三）粉碎根据生产工艺需要，将需粉碎药材用中药粉碎机粉碎，过10

2、0目筛，备用。经对三批中试产品粉碎工艺考查，结果表明常规粉碎方法即可符合本品生产需要。（四）提取工艺选择试验 根据处方中各药材所含主要成份的理化性质选择不同的提取方法，葛根、五味子适宜乙醇溶液提取，其余黄芪等六味适宜水提取。（1）葛根、五味子的提取工艺提取药材葛根、五味子。根据各药味所含成分的理化性质，适宜采用乙醇溶液提取，故采取正交试验优化乙醇溶液提取工艺条件。取提取药材，按原处方量配伍，制备工艺正交试验用样品。每正交试验样品药材重525g，其中葛根300g、五味子225g。 表1、 因素水平表 L9（34）正交表头水平因素因 素A加溶剂量（倍） B浓度（） C提取次数（次） D提取时间（小

3、时） 12310 95 3 3 8 75 2 2 6 50 1 1 表2、正交试验设计表试验号因 素A加溶剂量（倍） B浓度（） C提取次数（次） D提取时间（小时） 12345678910 95 3 3 10 75 2 210 50 1 18 95 2 18 75 1 38 50 3 26 95 1 26 75 3 16 50 2 3取每正交试验样品525g，依表2设计加溶剂量、回流时间、回流次数，分别提取，放冷，滤过，合并滤液，静置，取上清液浓缩，干燥至恒重后以干膏与葛根素的积作为评价指标。表3、 正交试验数据表实验号干膏量(g)出膏率葛根素含量(mg/g)葛根素总量(mg)132.96.

4、2712.64415.86241.17.839.78401.96325.74.99.79251.60421.94.214.42315.80523.24.412.90299.28650.29.66.65333.83720.13.812.32247.63825.24.811.12280.22933.16.38.32275.39表4、正交试验结果评价表试验号因 素评价指标A加溶剂量（倍） B浓度 C提取次数（次）D提取时间（小时）葛根素总量(mg)12345678910 95% 3 310 75% 2 210 50% 1 18 95% 2 18 75% 1 38 50% 3 26 95% 1 26

5、75% 3 16 50% 2 3415.86401.96251.60315.80299.28333.83247.63280.22275.39K1K2K31069.42 979.29 1029.91 990.53948.91 981.46 993.15 983.42 803.24 860.82 798.51 847.62k1k2k3356.47 326.43 343.30 330.18316.30 327.15 331.05 327.81267.75 286.94 266.17 282.54R88.72 40.21 77.13 47.64由上述极差分析数据表明：加溶剂量为显著因素，其次为回流次数

6、、回流时间、溶剂浓度，因此最佳提取方法为A1B2C1D1，由于C1 和C2、D1和D1 、B1和B2相差甚微，考虑到实际生产的能源问题，采用加75%乙醇溶液10倍量，回流提取二次，每次2小时。 确证实验：取两份确证实验样品，每份样品中葛根300g、五味子225g，适当破碎，加10倍量75%乙醇溶液回流提取二次，每次2小时，滤过，合并滤液，静置，取上清液浓缩，烘至恒重，称量。按质量标准测定干膏中葛根素含量。由两份确证实验数据表明：加75%乙醇溶液10倍量，回流提取二次，每次2小时的提取方法与最优方法相当，且重复性良好。（2）黄芪等六味药的提取工艺提取药材黄芪、地骨皮、知母、山药、天花粉、鸡内金。

7、根据各药味所含成分的理化性质，适宜采用水提取，故采取正交试验优化水提取工艺条件。取提取药材适当破碎，按处方量配伍，制备工艺正交试验用样品。每正交试验样品药材重2325g，其中黄芪450g、地骨皮750g、知母300g、山药300g、天花粉375g、鸡内金150g。 表1、因素水平表 L9（34）正交表头 水平因 素A煎煮时间（小时） B加水量（倍） C煎煮次数（次）1232 10 11.5 8 21 6 3表2、正交试验设计表试验号因 素A（小时） B（倍） C（次）1234567892 10 1 2 8 22 6 3 1.5 10 2 1.5 8 31.5 6 11 10 3 1 8 1 1

8、 6 2取每正交试验样品2325g，依表2设计加水量，煎煮时间，次数，分别煎煮，放冷，滤过，合并滤液，静置，取上清液浓缩，干燥至恒重后以干膏量作为评价指标。表3、正交试验结果分析试验号因 素评价指标A(小时) B(倍) C(次)干膏量(g)1234567892 10 12 8 22 6 31.5 10 21.5 8 31.5 6 11 10 31 8 11 6 2326.9510.34488.07556.24490.96258.74469.03256.36351.22K1K2K3 1325.32 1352.18 842.01 1305.94 1257.66 1417.80 1076.61 10

9、98.03 1448.06R248.71 254.15 606.05 由极差分析结果可得出，其中因素C (次数)为显著因素，其次为B（加水量），而A（时间）影响最小，即C B A。最优条件为A1B1C3；由于煎煮三次与二次相差较小，煎煮2小时与1.5小时差别也不大，又考虑到时间因素及实际生产因素，确定提取工艺为10倍加水量，提取2次，每次1.5小时。正交结果确证实验 取两份样品，每确证实验样品药材重2325g，其中黄芪450g、地骨皮750g、知母300g、山药300g、天花粉375g、鸡内金150g，适当破碎，加10倍量水，提取2次，每次1.5小时，流水冷却，滤过，合并滤液，静置，取上清液浓

10、缩，干燥至恒重，评价。实验结果重复性及稳定性均好。干膏量与正交表中最优者相当。说明正交选定的工艺可以在生产中采用。 （五）成型工艺条件的选定1.格列本脲混合方法的选择处方中格列本脲属于低含量原料，采用将格列本脲用等量递增法与药粉混匀，再与其它原料混匀。经此方法混合后的药粉，对格列本脲进行含量测定，混合均匀，可以满足要求。2.制丸工艺研究 制丸 常规的方法是将药粉与稠膏混匀制成软材，用制丸机制丸，由于本品稠膏量太大，无法制成软材；故将稠膏与人参细粉及适量淀粉混匀，干燥，用纯化水制成软材，制丸，结果能制出理想的丸剂。干燥 取2份样品，采用微波干燥，置70温度下分别在18分钟、20分钟、22分钟、2

11、4分钟、26分钟、28分钟、30分钟、32分钟，取样送检，测量水分、溶散时限。结果干燥24分钟即能使水分、溶散时限符合要求，硬度适中。包衣、打光 采用药用炭和明胶为包衣材料，按照常规的方法包衣打光；结果药丸色泽均匀，光亮，可以符合生产需要。(六) 中试生产取处方十倍量药材，在中试设备上试验，考核工艺稳定性，三批数据表明，工艺稳定，具可重复性和再现性。二、质量研究资料及文献资料十味降糖颗粒收载于国家药品监督管理局国家中成药标准汇编（中成药地方标准上升国家标准部分 内科 气血津液分册），十味降糖丸（浓缩丸）是根据十味降糖颗粒改变剂型的中药8类新药（减免临床研究），现将质量标准起草说明报告如下：【名

12、称】 十味降糖丸（浓缩丸） 【处方】除辅料外，与原剂型标准一致。【制法】除成型工艺外，与原剂型标准一致。【性状】 以三批中试产品的实际性状描述。 【鉴别】 (1)为处方中人参的显微鉴别。 三批中试产品均检出。与原剂型标准一致。（2）为处方中人参和黄芪的薄层鉴别，经与人参皂苷Rb1、Re、Rg1对照品、黄芪甲苷对照品；缺人参阴性对照样品、缺黄芪阴性对照样品对照，斑点显色清晰，Rf值适宜，专属性强。予以采用。本鉴别项与原剂型标准一致。（3）为处方中五味子的薄层鉴别，经与五味子甲素对照品、缺五味子阴性对照样品对照，斑点显色清晰，Rf值适宜，专属性强。予以采用。与原剂型标准一致。 （4）还进行了天花粉

13、的薄层鉴别试验：取本品6g，研细，加稀乙醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取瓜氨酸对照品，加稀乙醇溶解，制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照层色谱法（中国药典20xx年版一部附录VIB）试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各5l，点于同一硅胶G薄层板，分别以正丁醇-无水乙醇-冰醋酸-水（8：2：2：3）和正丁醇-冰醋酸-水（5：2：3）为展开剂，展开，取出，晾干。喷以茚三酮试液，在105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，与瓜氨酸对照品、缺天花粉阴性对照样品对照，阴性样品、样品、瓜氨酸对照品在相同位置均有相同颜色斑点，本品中天花粉尚未找到具特异性的薄层鉴别方法。【检

14、查】依照中国药典20xx年版一部附录(D)的有关规定对三批中试产品检查（重量差异、崩解时限、微生物限度），均符合药典有关规定。重金属 依中国药典20xx年版一部(附录 E第二法)检查，三批中试产品重金属均低于百万分之五，暂不设定重金属检查项。砷盐检查 依中国药典20xx年版一部(附录 F第二法)检查,三批中试产品砷盐均低于百万分之二，暂不设定砷盐检查项。【含量测定】采用高效液相色谱法（中国药典20xx年版一部附录VI D）测定。1.葛根的含量测定原标准收载了葛根的含量测定方法，经验证，原方法样品制备合理，且峰形对称，分离度好，阴性无干扰，故采用原标准收载的方法作为含量测定方法。葛根素 中国药品

15、生物制品检定所 752-200108仪器与试剂高效液相色谱仪 xx xxxx 型高压恒流泵xxxxx紫外可见波长检测器xxx色谱数据工作站色谱柱 xxkromasil C18 5um 4.6250mm柱号谱甲醇 天津四友磷酸、三乙胺为分析纯标准曲线:精密称取葛根素对照品适量,加甲醇制成每1ml含100g的溶液,作为对照品溶液。以100g/ml的对照品溶液为母液，分别配制成50g/ml、25g/ml、5g/ml、2.5g/ml的对照品溶液 。分别精密吸取上述各对照品溶液10l,注入液相色谱仪,测定,计算，即得。回归曲线为Y(峰面积)=26.050X(浓度)+26.995

16、 r=0.99987线性范围为2.5100g/ml,标准曲线近似过圆点,采用外标一点法定量。供试品溶液制备方法的选择1. 取本品适量，研细，取1g，精密称定，加甲醇40ml，回流30分钟，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。2.取本品适量，研细，取1g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率33kHz)30分钟，放冷，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，即得。经试验方法较方法重现性好且方法简单，故采用此方法制备供试品。精密度 同一样品连续进样测定5次，相对标准偏差为1.81%,小于3.0%。稳定性 同一样品,制备后在30分钟、1小时、6小

17、时、12小时、24小时后分别测定，相对标准偏差为2.10%，小于5.0%,样品放置24小时内稳定。重现性 同一样品，取5份，各约1g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率33kHz)30分钟，放冷，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。取上述供试品溶液各10l，注入液相色谱仪，测定。相对标准偏差为1.85%，小于5.0%。加样回收率 取已知含量的样品5份(约1g),精密称定，分别置50ml量瓶中,各精密加入每1ml含0.1mg的葛根素对照品溶液3ml，蒸干，精密加甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，滤液

18、作为供试品溶液。取上述供试品溶液各10l,注入液相色谱仪，测定,平均回收率为99.94%。样品测定 对三批中试产品,采用原标准的含量测定方法测定，其结果如下。【含量测定】 葛根 照高效液相色谱法(中国药典20xx年版一部附录 D)测定。色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇磷酸盐(1：4)为流动相；检测波长为250nm；理论板数按葛根素峰计算应不低于7000。对照品溶液的制备 取葛根素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含10g的溶液，即得。 供试品溶液的制备 取本品适量，研细，取1g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率33kHz

19、)30分钟，放冷，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各lOl，注入液相色谱仪，测定，即得。原剂型标准十味降糖颗粒每袋6g，规定每袋含葛根以葛根素(C21H2009)计，不得少于2.0mg。新标准十味降糖丸（浓缩丸）每袋6g，根据原剂型标准规定及三批中试含量测定数据确定每1g含葛根以葛根素(C21H2009)计，不得少于0.35mg。2.格列本脲的含量测定原标准收载了格列本脲的含量测定方法，经试验，原方法峰形分离不好，格列本脲峰没有回到基线，调整流动相为甲醇磷酸盐(12：8)，结果峰形对称，分离度好，格列本脲峰能回到基线，阴性样品无干扰，故采用修定过

20、的方法作为含量测定方法。仪器与试剂高效液相色谱仪 xx xxx型高压恒流泵xxxx紫外可见波长检测器xxxx色谱数据工作站色谱柱 xxxx填料：Hypersil ODS2 5um 尺寸： 4.6200mm柱号：E1523753批号：5/120/7095色谱甲醇 天津四友磷酸、三乙胺为分析纯标准曲线:精密称取在105烘干至恒重的格列本脲对照品适量,加甲醇制成每1ml含308g的溶液,作为对照品溶液。以308g/ml的对照品溶液为母液，分别配制 154g/ml、77g/ml、38.5g/ml、15.4g/ml、7.7g/ml的对照品溶液。分别精密吸取上述各对照品溶液10l,注入液相色谱仪,测定,计

21、算，即得。回归曲线为Y(峰面积)17.0366X(浓度)3.1799 r0.99979 线性范围为7.7154g/ml，标准曲线近似过圆点,采用外标一点法定量。 供试品溶液制备方法的选择1取本品，研细，取1g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，用加甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。2. 取本品，研细，取1g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，用加甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。同一样品按上述两种方法，每种方法制备三个供试品，分别取上述溶液各10l，注入液相色谱仪，测定，经比较三种方法测定得的含量基

22、本一致，第一种方法重现性好，操作简单，故选用第一种供试品溶液制备方法。精密度 同一样品连续进样测定5次，相对标准偏差为1.07%，小于3.0%。稳定性 同一样品，制备后在30分钟、1小时、4小时、12小时、24小时后分别测定，相对标准偏差为1.51%，小于5.0%，表明样品放置24小时内稳定。重现性 同一样品，取5份，各约1g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，用加甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。取上述供试品溶液各10l，注入液相色谱仪，测定。相对标准偏差为1.63%，小于5.0%。加样回收率 取已知含量的样品5份(约1g)，精密称定，分别置具

23、塞锥形瓶中，各精密加入每1ml含38.5g的格列本脲对照品溶液5.0ml，蒸干，精密加入甲醇20ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，用加甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。取上述供试品溶液各10l，注入液相色谱仪，测定，平均回收率为99.81%。样品测定 对三批中试产品，采用新制订的含量测定方法测定，其结果如下。【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典20xx年版一部附录 D)测定。色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：甲醇磷酸盐(12：8)为流动相；检测波长为300nm。理论板数按格列本脲峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备 取格列本脲对照品适量，精密

24、称定，加甲醇制成每lml含20g的溶液，即得。 供试品溶液的制备 取本品适量，研细，取1g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率33kHz)30分钟，放冷，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，即得。 测定法 分别精密吸取上述溶液各10l，注入液相色谱仪，测定，即得。原剂型标准十味降糖颗粒每袋6g，每袋相当于格列本脲1.5mg，规定每袋格列本脲应为1.2mg1.8mg，新标准十味降糖丸（浓缩丸）每袋6g，每袋相当于格列本脲1.5mg，根据原剂型标准规定及三批中试含量测定数据确定本品每1g含格列本脲应为0.2mg0.3mg。【功能主治】 益气养阴，生津止渴。用于非胰岛素依赖型糖尿病中气阴两虚证者，表现为倦怠乏力，自汗盗汗，气短懒言，口渴喜饮，五心烦热，心悸失眠，溲赤便秘，舌红少津，舌体胖大，苔薄或花剥，脉弦细