六味地黄丸中24 乙酰泽泻醇A含量的高效液相色谱法测定

1、DOC格式论文，方便您的复制修改删减六味地黄丸中24-乙酰泽泻醇A含量的高效液相色谱法测定(作者：单位：邮编：)【摘要】 目的建立六味地黄丸中24-乙酰泽泻醇A的高效 液相色谱(HPLC)法含量测定方法。方法采用高效液相色谱法；色谱柱： Kromasil 100-5C18 色谱柱(250 mmx 4.6 mm, 5 卩 m),检测器：蒸 发光散射检测器(ELSD);柱温：室温；流动相：乙腈-水(75 : 25);流速： 0.8 ml min-1 , ELSD气流速度：2.00 L min-1 漂移管温度：82C。 结果被测定峰与其他组分可达到基线分离，24-乙酰泽泻醇A的线性 范围为0.288

2、2.304卩g(r=0.999 8)，平均回收率为100.04%(RSD 为1.05%, n=9)。结论该方法操作简便准确，重现性好，能有效控制 六味地黄丸的质量。【关键词】六味地黄丸;24-乙酰泽泻醇代高效液相色谱法六味地黄丸收载于中国药典2005年版，由熟地黄、山茱萸(制)、 牡丹皮、山药、茯苓、泽泻6味药物组成，原标准含量测定项中仅有 丹皮酚和熊果酸的含量测定1，并无24-乙酰泽泻醇A含量测定方 法。众所周知，泽泻醇具有利尿、降血脂、抗脂肪肝及保肝作用，为 泽泻的主要活性成分。但是通过文献检索，未发现有关六味地黄方中24-乙酰泽泻醇A含量测定研究报道的文献。本实验采用高效液相色 谱法测定

3、六味地黄丸中24-乙酰泽泻醇A的含量，本法操作简单，专 属性强，稳定可靠24。1仪器与试药Waters 2695高效液相色谱仪；蒸发光散射检测器 (ELSD);Sartorius BP211D 电 子天平；HU10260B 型超声波清洗 器;H.H.S型电热数字显示恒温水浴锅。乙腈为色谱纯，水为超纯水， 其它试剂均为分析纯。24-乙酰泽泻醇A由南京中医药大学提供，经 HPLC峰面积归一化法测得含量达98灿上。六味地黄丸由怀化正好制 药有限公司提供。2方法2.1 色谱条件色谱柱 Kromasil 100-5C18色谱柱(250 mm 4.6 mm 5卩m);流动相：乙腈-水(75 : 25);柱

4、温：室温；流速：0.8 ml min-1;ELSD 气流速度：2.00 L min-1，漂移管温度：82C。2.2对照品储备溶液的制备精密称取24-乙酰泽泻醇A对照品 适量，配制成浓度为720卩g/ml的储备液，待用。2.3供试品溶液的制备方法取本品内容物，研细，粉末过60目筛，取约5.0 g，精密称定，置100 ml具塞锥形瓶中，加入石油醚 20 ml，超声处理(功率200W 频率40 kHz)2次,30 min/次，滤过， 置水浴上蒸干，加乙腈定容至 2 ml,滤过，即得。2.4阴性对照试验 取按处方比例除去泽泻的其它药材适量，依 照六味地黄丸的制备工艺和供试品溶液的制备方法得到缺泽泻的空

5、 白对照溶液，作为阴性对照溶液。按照上述色谱条件进行测定，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰， 而阴性对照色谱上在此保留时间无干扰。见图1。2.5线性关系的考察精密吸取24-乙酰泽泻醇A对照品储备液分别精密吸取对照品储备溶液 1.0，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0 ml置 50ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，即得。浓度分别14.4,28.8，43.2，57.6 卩 g/ml，86.4 卩 g/ml，115.2 卩 g/ml。分别精密吸取上 述溶液各20 l，依次注入液相色谱仪，以进样浓度为横坐标 (X)， 峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线。回归方程为

6、：Y =208 996X- 96391，r=0.999 8。结果表明24-乙酰泽泻醇 A在0.2882.304卩g 范围内线性关系良好。A-对照品B-样品C-缺泽泻的阴性对照图1六 味地黄胶囊的24-乙酰泽泻醇A HPLC图2.6精密度实验精密吸取对照品溶液，连续进样6次，每次20卩l，根据6次的测得峰面积，计算24-乙酰泽泻醇A的RSD=1.3%(n=6)2.7稳定性实验精密吸取供试品溶液，分别于0，1，2, 4, 8,12 h分别进样，共进样5次，测得峰面积积分值，计算RSD=1.8%(n=5) 结果表明供试品溶液中24-乙酰泽泻醇A在12 h内基本稳定。2.8重复性实验取同一批号六味地黄

7、丸(批号：090301)5 份，按供试品溶液制备方法制得供试品溶液 5份，精密吸取供试品溶 液20卩l，进行测定，根据峰面积，计算24-乙酰泽泻醇A的平均含 量为 0.036 mg/g，RSD=2.1%(n=5)2.9加样回收实验精密称取24-乙酰泽泻醇A对照品适量，加乙腈制成57卩g/ml。精密称取已知含量的供试品(批号：090301)约5.0 g共9份，分别精密加入57卩g /ml的24-乙酰泽泻醇A对照品溶液 1.5 , 2.0 , 2.5 ml,按供试品溶液的制备方法制备供试液。分别进 行测定，计算含量，其中24-乙酰泽泻醇A的平均回收率为100.04%, RSD=1.05%(n=9)

8、见表1。表124-乙酰泽泻醇A加样回收率实验结果 2.10含量测定取10个批号的样品，分别按供试品溶液的制备方 法处理。分别吸取对照品溶液、供试品溶液各10卩l，注入液相色谱仪进行测定。由表2可见，10批样品的24-乙酰泽泻醇A含量位于 0.0310.042 mg g-1之间，含量相对稳定。3讨论泽泻作为六味地黄方中的“三泻”主药之一，在六味地黄方中具有重要的作用，24-乙酰泽泻醇A作为泽泻的主要成分，具有一定的 活性，对其进行控制无疑具有十分重要的意义；但中国药典中收载的六味地黄丸、六味地黄颗粒及中药部颁标准中六味地黄胶囊均未 对24-乙酰泽泻醇A含量测定进行限定。本实验建立了六味地黄制剂 中24-乙酰泽泻醇A的含量测定方法，通过对色谱条件进行系统的摸 索，采用乙腈-水(75:25)进行洗脱，使得分离效果明显且重现性、稳 定性都很好，可作为六味地黄系列制剂质控的一种有效检测方法。表210批六味地黄丸中24-乙酰泽泻醇A的含量测定结果六味地黄丸生 产厂家众多，由于收集样品有限，24-乙酰泽泻醇A的含量限度标准 有待进行进一步研究确定。【参考文献】1国家药典委员会中国药典S.北京：化学工业出版社，2005.2陈建忠，潘馨，黄若旺.HPLC法同时测定泽泻中2种有 效成分的含量J.药物分析杂志，20