病理组织切片制作技术

1、最新资料推荐病理组织切片制作技术病理组织切片制作技术 病理组织切片常用的制作方法有三种。即石蜡切片法， 冰冻切片法和火棉胶切片法。以石蜡 切片法为代表， 切片的基本制作过程是：组织取材固定冲洗脱水透明浸蜡组织包埋组织切片展片附贴切 片脱蜡染色脱水染片透明封固。以上基本过程是互相联系的，任何一环节出现问题，都将使整个切片制作归于失败。因此应 细致、耐心、认真负责， 并事先做好计划安排。一、取材 采取病料，要刀剪锐利，剪切时不可挤压， 扯拉 病料，以防人为损伤。切取的工具要清洁。采取病料越新鲜越好， 一般不超过死后24小时。应选择病变部与可疑病变部切取，切取时 要由表及里，有浅入深并包括周围正常组

2、织一部分。特殊病料应根据器官的结构特点切取。管状，囊状和皮肤组织应注意垂直切取（横切） 。带有薄膜的组织，要防止切时薄膜分离和脱落。切取组织块大小，以1.51.50.3 厘米为宜， 最厚不宜超过0.5厘米。组织块病变一面应 平整光滑， 另一面可不平整， 以便包埋时辨认。切取后，放入事先准备好的装有固定液的磨 口玻璃广口瓶中， 并做好标记。二、固定 固定的目的是迅速将组织细胞杀死，使细胞中的蛋 白质，糖，脂肪等凝固，从而保持与活组 织相似的结构状态。材料取下后， 应迅速固定。固定液数量应为病理组织块的5到20倍。由于一般把组织块浸入固定液后数小时，固定液渗入组织液的深度只达2到3厘米。因此， 可

3、以放置冰箱内固定， 使组织内酶失去作用，细菌也能停止滋生。最常用的固定液是10%的福尔马林溶液：使用时，用40%的甲醛饱和水溶液10毫升，加水90毫升配 成。三、冲洗 固定后的组织块， 应将固定液洗去。一般均用流水（自来水）冲洗12到24小时左右。及时 冲洗尚有停止固定的作用，防止固定过度， 有利于制片染色。冲洗时如不方便用流水冲洗， 也可用较大容器盛装水浸洗， 每 隔相当时间换水一次。整个浸 洗时间比流水冲洗应稍长一些。酒精固定的组织材料不需冲洗。四、脱水 经过固定的组织，冲洗后要进行脱水。脱水的目的在于将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，为石蜡等其他包埋剂浸入组织创造条件。常用的脱水剂

4、为酒精。由于酒精可以任何比例与水结合，对组织穿透力强，又能使组织硬化，因而不能将组织从水中直接移入浓度高的酒精中，应从低浓度逐渐到高浓度。脱水必须充分，否则给浸蜡造成困难。除用酒精作脱水剂外， 还可以用正丁醇(NButyla alcohol )。 正丁醇微溶于水，能与各种浓 度酒精混合， 也能直接溶解石蜡。故组织经正丁醇脱水后，不须经二甲苯透明。用正丁醇作 脱水剂，组织块收缩减低， 也不会过硬， 故比酒 精优越。五、透明 透明的目的是将组织内的酒精用矿物油或植物油置 换出来，并溶解石蜡，帮助石蜡浸透组织。由于经过透明剂处理的组织块用肉眼观察呈透明状，故称这一过程为透明。常用的透明剂为二甲苯 (

5、Xylol) 因其穿透力较强，因 而组织在二甲苯中停留时间不宜过长， 一般透明时间在30分钟左 右即可。六、浸蜡 浸蜡是指组织经过透明作用以后，放入溶化的石蜡中浸渗，使石蜡浸入组织块中，冷却后，才能进行切片。通常选择熔点在5256C之间的石蜡， 并视切片时环境的气 温而选择。室温高则选用熔点 稍高的石蜡， 反之，则选用熔点较低的石 蜡，这样可防止切片时石蜡太软或易碎裂。浸蜡的过程是：二甲苯石蜡混合液（1:1 ）1小时二甲苯石蜡混合液（1:2 ）1 小时石蜡（1）1 小时30分石蜡（2）1 小时30分 上述过程可在56C58C恒温箱中进行， 含二甲苯的混合液可 用磨口小瓶盛装。七、包埋 包埋就是

6、将已浸渗好的组织包埋于浸渗剂中。根据需要，包埋的方法常有石蜡包埋法和火棉胶包埋法。 石蜡包埋法：（1） 先将熔化的石蜡倒入包埋框，用加热的镊子将欲包埋的 组织块在蜡液内放置好。注意 各组织块之间的距离和每个组织块的位置和方向。（2） 迅速第二次往平皿内倾倒蜡液，淹没组织块。待蜡液出现凝固层后，即轻轻放入冷水 盆中或冰箱中使其凝固。石蜡完全凝固后， 倒出冷缩的蜡块片， 用加热的外科刀， 按 组织块位置修整蜡片待用。对于实验动物（狗和兔等）组织，一般的脱水透明和浸蜡时 间如下：处理步骤处理时间（min）处理步骤处理时间 （min）75%酒精长短不定二甲苯I 、 II3085%酉精120 300二甲

7、苯 皿60 95%酒精I 和I 120 300 56 58C石蜡30无水 酒精I、 I、 皿30 56 58C石蜡60 120无水酒精皿60120 56 58C 石蜡 120 180 注：摘自病理学技术， 人民卫生出版社，王伯，李玉松，黄高，张远强主编。八、组织切片 不同的切片制备方法，其切片方法也有较大差别， 组织切片法包括石蜡切片法、冰冻切片法、火棉胶切片法、石蜡包埋半薄切片法、树脂包埋薄切片法和大组织石蜡切片法 等。常用的切 片工具包括组织切片机、切片刀和自动磨刀仪器等。以下分别加以叙述。（一）石蜡切片法 组织经石蜡包埋后制成的蜡块， 用切片 机制成切片的过程称为石蜡切片法。为现在病理诊

8、断常用的制作切片的方法。在切片前应先切去标本周围过多的石蜡（此过程称为修块）但也不 能留得太少， 否则易造成组织破坏，连续切片时分片困难。般切4 6 m的切片， 特殊 情况可切1 2 m。要观察病变的连续性， 可制作连续切片。除此之外， 石蜡包埋的组织 便于长期保存， 因此石蜡切片仍 是目前各种切片制作方法中最常用，最普遍的一种方法。1 .切片前的准备 （1）固定后的标本经脱水、透明、浸蜡和包埋后，制成蜡块。高质量的蜡块和锋利的切片 刀是保证切片质量的关键环节。检查切片刀是否锋利，简便的方法是用头发在刀锋上碰一下， 如一碰即断，说明刀锋锋利。用显微镜观察可确定刀口是否平整，有无缺口。（2）准备

9、充足的经过处理的清洁载玻片和恒温烤片装置， 大 中号优质狼毫毛笔和铅笔（用于在载玻片的粗糙端写号） ，如用 普通载玻片， 可用碳素墨水和蛋白甘油按3 :1 体积混合后书写。2 .切片制作过程 （1）将预先修好的组织块先在冰箱中冷 却，而后装在切片机固定装置上。将切片刀装在刀 架上，刀刃与蜡块表面呈5C夹角。将蜡块固定， 调整蜡块与刀至合适位置，并移动刀架或 蜡块固定装置，使蜡块与刀刃接触。（2）切片多使用轮转式切片机， 使用时左手执毛笔， 右手 旋转切片机转轮。先修出标本， 直到组织全部暴露于切面为止，但小标本注意不要修得太多，以免无法切出满意的用于诊断 的切片，标本应注意切全。切出蜡片后， 用毛笔轻轻地托起， 尔后用眼科镊夹起， 正面 向上 放入展片箱(展片温度根据作用的石蜡熔点进行调整， 一般低 于蜡熔点1012C),待切片 展平后，即可进行分片和捞片。切片经30%的酒精初展后，再用载玻片捞起放入展片箱更易展 平。为减少切片刀与组织块在切片过程中产生的热量， 使石蜡保持 合适的硬度，切片时可 经常用冰块冷却切